XiaoMi-AI文件搜索系统
World File Search SystemPPIB
DNA提取播放的DNA用于继承的分子诊断1
该疾病的遗传原因是PPIB基因（肽基丙基异构酶b）中的突变，该突变编码了负责胶原蛋白产生的环氨酸B蛋白。这是由PPIB基因115中的错义突变引起的一种常染色体隐性疾病，导致用阿环蛋白替换甘氨酸。需要进行分子诊断，动物DNA提取，PCR（聚合酶链反应）和测序。由于获得的材料是通过动物的最大材料，因此测试了两种头发提取方案。Initially, the hair with bulbs were inserted into Micro Centrifuga tubes with ATL buffer, DTT and proteinase K solution, resulting in a liquid with saponifying, oxidizing and protein solvent properties, capable of dissolving membranes, oxidizing disulfide bridges and breaking down proteins around the genetic material, such as the histons, without damaging the DNA.Initially, the hair with bulbs were inserted into Micro Centrifuga tubes with ATL buffer, DTT and proteinase K solution, resulting in a liquid with saponifying, oxidizing and protein solvent properties, capable of dissolving membranes, oxidizing disulfide bridges and breaking down proteins around the genetic material, such as the histons, without damaging the DNA.
荧光 Cas9 mRNA 用于富集 CRISPR-...
图 2：使用荧光 Cas9 mRNA 富集基因敲除 A. 对与 mKate2 Cas9 mRNA 和阳性对照 PPIB crRNA:tracrRNA 共电穿孔并根据 mKate2 荧光进行分选的 K-562 细胞群进行错配检测分析。B. 在次优和最优脂质转染条件下，EGFP Cas9 mRNA 分选的 U2OS 细胞群的 FACS 数据。C. 对 EGFP Cas9 mRNA 分选的 U2OS 细胞群进行错配检测分析
高质量亮度分析用于蛋白质和基因表达多重分析
图3。用PHA，CONA或LPS刺激后，基因（RNA）与蛋白质表达的相关性与蛋白质表达的相关性。在刺激后12、24和48小时，ENA（CXCL5），GRO-ALPHA（CXCL1），MCP-3（CCL7）和BLC（CXCL13）的相对RNA和蛋白质表达。将Quantigene plex人免疫反应面板80-plex数据（线图）标准化为管家PPIB。使用Procartaplex人免疫反应面板80-plex获取蛋白质数据。数据（条形图）显示为log2折叠在未刺激的控制样本上的变化。
Edit-R™ CRISPR 设计工具
图 1. Edit-R™ CRISPR 设计工具如何选择针对人类基因 PPIB 的 20 个核苷酸序列的示例。目标序列可以位于基因组 DNA 的任一链上，只要它处于 5' 到 3' 方向，并且该链的 3' 端有一个 NGG PAM（使用默认的 S. pyogenes Cas9 时）。Cas9 核酸酶将在 NGG PAM 上游三个核苷酸的位置切割 DNA 的两条链。建议选择完全位于编码基因早期组成外显子内的靶位点，但 Edit-R™ CRISPR 设计工具将返回整个编码区域的结果，因此如果需要，可以靶向特定的外显子或蛋白质结构域。
基于 RNP 的原代 CD4+T 细胞编辑...
电穿孔后 72 小时，可使用 BioLegend APC 抗人 TCR α / β 抗体通过流式细胞术评估用靶向 Edit-R sgRNA RNP 的 TRAC 或 TRBC 编辑的原代 CD4 + T 细胞的 TCR α / β 敲除情况。除了通过流式细胞术读取表型外，在基于 RNP 的编辑后 48-72 小时内，可以通过 T7EI/TIDE 测量插入/缺失形成。使用表 1 中列出的每个经过验证的 sgRNA 的引物，遵循 Dharmacon™ Edit-R™ 合成 gRNA 阳性对照试剂盒方案中的直接细胞裂解和 PCR 条件。要测量 T7EI 内切酶的插入/缺失形成，请完成上面列出的方案并使用分析软件。要通过分解 (TIDE) 分析跟踪插入/缺失来测量插入/缺失形成，请将得到的 PCR 扩增子发送至 Sanger 测序并使用网络工具，例如 http://shinyapps.datacurators.nl/tide/ 。以下方案描述了用于通过流式细胞术评估原代 CD4 + T 细胞中 TCR α / β 表型敲除的染色条件。1. 通过离心（300-5 分钟）沉淀用 PPIB、NTC2、TRAC 或 TRBC 靶向 RNP 电穿孔的 CD4 + T 细胞