QIASEQ靶向DNA Pro面板可以简化样本到Insight®,靶向下一代测序(NGS)。目标富集技术通过使用户能够对特定的感兴趣区域(ROI)进行测序(而不是整个基因组)来增强DNA NG,从而有效地增加了测序深度和样本吞吐量,同时最小化了成本。QIASEQ靶向DNA Pro面板通过将独特的分子指数(UMI)纳入单个基因或ROI特异性的,基于引物的靶向富集过程中,利用高度优化的反应化学来克服偏见/伪像。通过结扎和目标富集步骤在酶促清理中更换珠子清理,QIASEQ靶向DNA Pro面板可以更有效,快速,一致,自动化 - 友好的工作流程。
QIAseq Targeted DNA Pro Panel 可简化 Sample to Insight® 的 DNA 靶向新一代测序 (NGS)。靶向富集技术增强了 DNA NGS,使用户能够对特定感兴趣区域 (ROI)(而不是整个基因组)进行测序,从而有效提高测序深度和样本通量,同时最大限度地降低成本。QIAseq Targeted DNA Pro Panel 利用高度优化的反应化学,将独特的分子指数 (UMI) 整合到单个基因或 ROI 特定的基于引物的靶向富集过程中,从而克服偏差/伪影。通过在连接和靶向富集步骤后用酶净化代替珠子净化,QIAseq Targeted DNA Pro Panel 可实现更高效、快速、一致且自动化友好的工作流程。
此外,DHS-8800Z QIAseq Targeted DNA panel 涵盖了可用于推断微卫星不稳定性状态的有用基因位点。该状态测量几个微卫星基因位点长度分布的统计变化,并将测试样本的统计变化与正常样本基线(包含在 QIAGEN 参考数据集中,可在 Workbench 中下载)进行比较。如果不稳定性微卫星基因位点的比例高于预定义阈值,则认为样本不稳定。许多 MSI-High 肿瘤患者对免疫疗法产生了积极的反应。此外,美国食品药品监督管理局 (FDA) 已加速批准 pembrolizumab 用于治疗微卫星不稳定性 (MSI)-High 的儿童和成人患者,这使其成为首个获批用于治疗具有这种生物标志物的实体瘤的药物,无论肿瘤来源如何 [ Chang et al., 2018 ]。
产品描述:凤凰热启动TAQ DNA聚合酶是一种重组的,恒温器TAQ DNA聚合酶,与热层,中和抗体复合,可阻断PCR的初始DNA脱酸步骤之前的5'→3'聚合酶活性(1,2)。这种抗体介导的热启动能力通过在PCR循环前还原非特异性扩增和引物二聚体形成,从而提高了PCR的总体特异性,灵敏度和产率,并允许在室温下设置的反应的便利性。在PCR循环的初始DNA定性步骤中,PCR反应混合物的温度达到≥94°C时,TAQ DNA聚合酶的活性被充分恢复。凤凰热启动TAQ DNA聚合酶,例如标准TAQ DNA聚合酶,也具有5'→3'外切核酸酶活性,但缺乏任何可检测到的3'→5'外核酸酶活性。
生物学资格结果,以评估NGS星MOA上QIASEQ靶向DNA Pro面板方法的生物学性能,使用带有4110引物的自定义面板执行了96个人类基因组DNA样品的库制备。作为输入DNA,使用了五个不同的基因型,每个基因型都使用了两个不同的输入量(10 ng和40 ng)(请参阅应用注释末尾的方法要求)。使用8个PCR循环进行了运行,以实现靶富集,并为25个PCR循环进行通用PCR。DNA浓度和总产率,该运行具有Quant-IT 1X DSDNA HS HS分析套件。使用具有高敏感性D5000试剂的高敏性D5000屏幕截图,用Agilent Tapestation 4150对图书馆DNA的尺寸分布进行了MEA(表1)。
研究人员还可以使用 QIAseq 多模态 DNA/RNA 文库试剂盒生成仅含 DNA 或仅含 RNA 的文库。这是市场上第一款可兼容多种输入样本的 NGS 多模态试剂盒,包括血液、福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 样本和无细胞 DNA (cfDNA)。这在转化研究中尤其重要,例如在癌症研究中,可能会有不同类型的样本。该试剂盒灵敏度高,可检测 DNA 和 RNA 稀有变异。使用 QIAseq 多模态 DNA/RNA 文库试剂盒生成的 DNA 和 RNA 文库可直接与不同的测序平台兼容,例如 Illumina 仪器和 Element Aviti,并且可以通过增加转换步骤在其他测序仪上进行测序(Complete Genomics/MGI、Singular Genomics 和 Ultima Genomics)。
商标:Qiagen®,样本到Insight®(Qiagen Group)。注册名称,商标等。在本文档中使用的,即使没有明确标记,法律也不被认为不受保护。
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在同种异体器官移植受体的同种异体移植监测中,使用供体衍生的无细胞无细胞DNA(DD-CFDNA)在等离子体中的液体活检已成为一种新型方法。尽管对技术进行了早期临床实施和分析验证,但仍缺乏对DD-CFDNA定量方法的直接比较。此外,关于尿液中DD-CFDNA的数据是稀缺的,到目前为止,基于高通量测序的方法尚未利用独特的分子识别剂(UMIS)来实现绝对DDDNNA量化。在肾脏和肝脏受体的尿液和血浆中比较了不同的DD-CFDNA定量方法:a)使用等位基因特异性检测的液滴数字PCR(DDPCR),可检测七个常见的HLA-DRB1等位基因和Y染色体; b)使用定制的QIASEQ DNA面板的高通量测序(HTS),该面板的靶向121个常见多态性; c)商业DD-CFDNA定量方法(Alloseq®CFDNA,Caredx)。dd-cfDNA定量为%dd-cfDNA,用于DDPCR和HTS,并使用UMIS作为供体副本。此外,在临床稳定的受体中比较了尿液和血浆中的相对和绝对DD-CFDNA水平。此处介绍的HTS方法表明,%dd-cfDNA与ddpcr(r 2 = 0.98)和Alloseq®CfDNA(R 2 = 0.99)之间的相关性很强,仅显示最小的比例偏见。绝对DD-CFDNA拷贝也与UMI和DDPCR之间的HTS之间也有很强的相关性(τ= 0.78),尽管具有相当比例的偏置(斜率:0.25; 95%-CI:0.19 - 0.26)。在30个稳定的肾脏移植受者中,尿液中的中值%dd-cfDNA为39.5%(四分位数,IQR:21.8 - 58.5%),含36.6份/μmol尿肌氨酸(IQR:18.4 - 109)和0.19%(IQR:0.01 - 0.01 - 0.01 - 0.01 - 0.01 - 0.01 - 0.01-01): 12.9)在体液之间没有任何相关性的等离子体中。来自八个稳定肝脏受体的血浆中的中位数%DD-CFDNA为2.2%(IQR:0.72 - 4.1%),使用120份/ml(IQR:85.0 - 138),中位DDDNNA拷贝/ml低于0.1,尿液中低于0.1。尿液和等离子体中DD-CFDNA绝对和相对定量的方法的第一个正面比较,支持与方法无关的%DD-CFDNA截止