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RecT 重组酶表达可实现高效的基因...
摘要 屎肠球菌是一种普遍存在的革兰氏阳性细菌，可从环境、食物和哺乳动物的微生物群中分离得到。屎肠球菌的共生菌株可对宿主的生理和免疫产生有益影响，但抗生素的使用已从牲畜和人类中产生了抗生素耐药性和致病性分离株。然而，由于基因编辑方法效率低下，对屎肠球菌功能和机制的解析受到限制。为了解决这些限制，我们在此报告，屎肠球菌 RecT 重组酶的表达可显著提高重组工程技术在屎肠球菌的共生菌株和抗生素耐药菌株以及其他肠球菌种（如 E. durans 和 E. hirae）中的效率。值得注意的是，RecT 与成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR)-Cas9 和向导 RNA (gRNA) 的结合表达能够实现高效的无瘢痕单链 DNA 重组，从而在屎肠球菌中产生特定的基因编辑突变体。此外，我们证明屎肠球菌 RecT 表达促进了编码抗生素选择标记的双链 DNA 模板的染色体插入，从而产生了基因缺失突变体。作为进一步的原理证明，我们使用 CRISPR-Cas9 介导的重组敲除屎肠球菌中的两个分选酶 A 基因，以进行下游功能表征。此处描述的通用 RecT 介导的重组方法应能显著增强对屎肠球菌和其他密切相关物种的遗传研究，以进行功能和机制研究。
淋巴结有针对性的两亲疫苗可诱导对SARS-COV-2
标题：RECT重组酶表达能够在肠球菌作者Victor Chen 1，Matthew G. G. G. G. G. G. G. G. G. G. G. G. G. Hang 1,2*隶属关系1化学生物学和微生物发病的实验室，纽约大学，纽约，纽约10065。2个免疫学和微生物学和化学部门，Scripps Research，La Jolla，加利福尼亚州92037，美国。*通信：hhang@scripps.edu摘要肠球菌是一种普遍存在的革兰氏阳性细菌，已从哺乳动物的环境，食物和微生物群中回收。粪肠球大肠杆菌的共生菌株可以对宿主生理和免疫产生有益的影响，但抗生素使用量可从牲畜和人类中提供抗生素耐药性和致病性分离株。然而，粪肠球菌功能和机制的解剖受到了效率低下的基因编辑方法的限制。为了解决这些局限性，我们在这里报告了粪肠球菌的表达重点酶的表达，显着提高了粪肠球菌和其他肠球菌种类（例如杜兰大肠杆菌）和Hirae等肠球菌和其他肠球菌中的重组技术的效率。值得注意的是，我们证明了E.粪便的表达表达促进了编码抗生素可选标记的单链和双链DNA模板的染色体插入。此外，RECT的表达与簇的定期间隔的plindromic重复（CRISPR）-CAS9和引导RNA（GRNA）相结合，使高效的Scar-Lise SSDNA重新组合可以在E.粪eC中产生特定的基因编辑突变体。此处描述的矩形介导的重组方法应显着增强粪肠球大肠杆菌和其他密切相关的物种的遗传研究，以进行功能和机械研究。重要性肠球菌被广泛认为是新兴的公共卫生威胁，耐药性和医生感染的兴起。然而，共生肠球菌菌株在哺乳动物中具有有益的健康功能，可以上调宿主免疫并预防微生物感染。这种肠球菌物种的功能性二分法强调了深入研究的必要性，以发现和表征强调其多种活性的遗传成分。但是，粪肠球菌中的基因工程仍需要被动同源重组，这通常需要克隆多个同源片段和筛选。为了减轻这些挑战，我们发现直接成型酶使诱变DNA模板更有效地整合能够产生粪便中基因组DNA的插入，缺失和取代。这些改进的重新组合方法应促进肠球菌的功能和机理研究。