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摘要 屎肠球菌是一种普遍存在的革兰氏阳性细菌，可从环境、食物和哺乳动物的微生物群中分离得到。屎肠球菌的共生菌株可对宿主的生理和免疫产生有益影响，但抗生素的使用已从牲畜和人类中产生了抗生素耐药性和致病性分离株。然而，由于基因编辑方法效率低下，对屎肠球菌功能和机制的解析受到限制。为了解决这些限制，我们在此报告，屎肠球菌 RecT 重组酶的表达可显著提高重组工程技术在屎肠球菌的共生菌株和抗生素耐药菌株以及其他肠球菌种（如 E. durans 和 E. hirae）中的效率。值得注意的是，RecT 与成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR)-Cas9 和向导 RNA (gRNA) 的结合表达能够实现高效的无瘢痕单链 DNA 重组，从而在屎肠球菌中产生特定的基因编辑突变体。此外，我们证明屎肠球菌 RecT 表达促进了编码抗生素选择标记的双链 DNA 模板的染色体插入，从而产生了基因缺失突变体。作为进一步的原理证明，我们使用 CRISPR-Cas9 介导的重组敲除屎肠球菌中的两个分选酶 A 基因，以进行下游功能表征。此处描述的通用 RecT 介导的重组方法应能显著增强对屎肠球菌和其他密切相关物种的遗传研究，以进行功能和机制研究。
RecT 重组酶表达可实现高效的基因...
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