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trpv3和cav3.2离子通道在小鼠卵中功能相互作用
6 Centro de Investigación de Estudios Avanzados del Maule, Universidad Católica del Maule, 3480112 Talca, Chile Oocyte maturation or the acquisition of meiotic competence requires a controlled expression of proteins that supports this process in preparation for fertilization.两者均由高度调节的离子稳态确定卵母细胞的成熟和受精。几个离子通道，调节多种细胞过程，据报道在包括哺乳动物在内的不同物种的卵中表达。受精始于成熟卵母细胞中的精子 - 特异性磷脂酶（PLC）。Ca 2+流入需要在卵母细胞中积聚Ca 2+以准备受精，并在受精过程中补充其细胞内存储，从而支持Ca 2+振荡和卵子激活。卵子激活包括在其他过程之间形成前核，皮质颗粒外胞菌病，多植物的封闭性和减数分裂II，以支持向早期胚胎发育过渡的其他过程。电压门控活化的钙通道Cav3.2通道已被表达，并有助于对钙储存的补充，以准备小鼠卵中的受精。此外，已经显示出在小鼠卵中表达的阳离子非选择性通道TRPV3的瞬态受体通道TRPV3（一种阳离子非选择性通道），但是其生理功能目前尚不清楚。在这里，我们表明TRPV3和CAV3.2在小鼠卵中功能相互作用。使用缺乏TRPV3和CAV3.2蛋白的卵，我们评估它们在皮质颗粒分布中的作用。方法：使用KO动物模型，共焦显微镜，生物信息学和斑块钳电生理学，我们测试了离子通道在小鼠卵中的表达和功能，并评估了它们在皮质颗粒动力学中的作用。结果：TRPV3KO卵中的Cav3.2 -20 mV时的Cav3.2电流显着降低（8pa/pf wt卵，trpv3ko卵中的3,75 pa/pf）。TRPV3电流（41 pa/pf在wt中为41 pa/pf，而在cav3.2ko卵中的30,5 pa/pf）。trpv3ko卵显示，与WT卵相比，标记为透镜culinaris凝集素的荧光强度测量的质膜中的CG密度显着降低。生物信息学方法揭示了CAV3.2和TRPV3蛋白之间物理相互作用的可能位点/残基。我们的结果表明，Cav3.2和TRPV3的功能和/或物理相互作用可能将关键细胞过程调节为皮质颗粒分布，在哺乳动物中卵向胚胎过渡的基础。致谢：Fondecyt 1221308; Fondequip Anid EQM200122
crispr删除SVA逆转录座子在TRPV1/TRPV3属基因间区域的顺式调节元件
摘要：正弦 - vntr- Alu（SVA）逆转录子是仅在灵长类动物基因组中存在的可转座元素（TES）的子类。te插入可以作为顺式调节元素（CRES）选择；但是，使用生物信息学方法和报告基因测定法证明了SVA的调节潜力。这项研究的目的是证明通过CRISPR（群集间隔间隔短的腔粒重复序列）的SVA顺式调节活性），并随后测量直接对局部基因表达的影响。我们识别了17染色体上的一个区域，该区域富含人类特异性SVA。在该区域的比较基因表达分析揭示了多个人体组织中TRPV1和TRPV3的共表达，这在小鼠中未观察到，这突出了两种物种之间的关键调节差异。此外，TRPV1和TRPV3编码序列之间的基因间区域包含位于TRPV3启动子和TRPV1 3'端的上游的人类特定的SVA插入，该插入trpv1的3'端，强调了该SVA作为研究其潜在的CIS -CIS-候选者对这两种基因的候选者。首先，我们生成了SVA报告基因构建体，并证明了它们在HEK293细胞中的转录调节活性。然后，我们设计了一种双目标CRISPR策略，以促进整个SVA序列的删除，并生成编辑的HEK293克隆细胞系，其中包含纯合和杂合SVA缺失。在编辑的纯合∆ SVA克隆中，我们观察到TRPV1和TRPV3 mRNA表达的显着降低，与未经编辑的HEK293相比。此外，我们还观察到杂合∆ SVA克隆中mRNA表达水平的变异性增加。总体而言，在具有SVA缺失的编辑的HEK293中，我们观察到对TRPV1和TRPV3的共表达的中断。在这里，我们提供了人类特异性SVA的示例，其原位调节活性，支持SVA逆转座子的作用，是物种特异性基因表达的贡献者。
瞬态受体电势通道的基因...
宫颈癌（CC）是影响女性生殖系统的主要恶性肿瘤，其统计数据显示，它占该系统中所有恶性肿瘤的80％。此外，还有一个关于年轻人被诊断出患有宫颈癌的趋势（Cohen等，2019）。在2020年，全球诊断出大约600,000例宫颈癌病例，导致340,000例死亡（Stumbar等，2019； Sung等，2021）。尽管治疗方面取得了进步，但由于其侵略性，晚期宫颈癌患者的存活率在15％左右仍然很低。因此，识别新的生物标志物来早期检测和治疗靶标对于该领域的进一步研究至关重要。瞬态受体电位（TRP）通道是一个离子通道家族，其中涉及多种生理过程，包括伤害感受，温度监测和感觉转导（Nilius等，2007）。在1969年，研究人员在果蝇果蝇的亚种中发现了TRP通道。瞬态受体电势是指果蝇品种长时间暴露于强光时发生的瞬时钙离子插入。TRP channels can be classi fi ed into six subfamilies based on their sequence homology: TRPA (ankyrin), TRPC (canonical), TRPM (melastatin), TRPML (mucolipin), TRPP (polycystin), and TRPV (vanilloid) ( Caterina and Julius, 2001 ; Caterina and Pang, 2016 ; Moore et al., 2017 ）。TRP通道在癌症中的功能最近引起了更多的关注。此外，免疫细胞表达的TRPV1和TRPA1涉及TRP通道相关的蛋白质在各种癌细胞类型中表达，例如乳腺癌，前列腺，肺，结肠和胰腺恶性肿瘤，最近引起了更多的研究关注。特别是，TRPV6已被证明可以促进乳腺癌细胞的侵袭和迁移（Cai等，2021）。TRPV6与前列腺癌的癌细胞死亡和增殖有关（Lehen Kyi等，2007）。TRPV3已被证明可以促进肺癌的癌细胞侵袭和生存（Li等，2016）。trpm8在癌细胞中被上调，并与结肠癌的有利预后有关（Pagano等，2023）。在人类胰腺导管腺癌组织中，TRPC1大量表达，并以Ca 2+独立的方式对照胰腺导管腺癌细胞增殖（Schnipper等，20222）。此外，TRP通道还参与癌细胞与肿瘤微环境之间的相互作用。内皮细胞表达促进血管生成的TRPC1和TRPC6，这是形成新血管，以营养为营养的新血管（Li等，2017; Negri等，2019）。