主办机构NOVA医学院L(INOVA4HEADH研究部门)研究小组和疾病的URL分子机制https://www.nms.unl.pt/en-en-us/research/research/research-groups/research-groups/research-group/n/molecular-mechanism---主管Miguel C Seabra(MCS)的简历于1986年毕业于葡萄牙Nova de Lisboa大学的Faculdade deCiênciasMédicas。对科学生涯着迷,MSC在美国达拉斯的德克萨斯大学西南医学中心(UTSW)招收了生物化学和分子生物学博士学位,并由诺贝尔奖获得者布朗和JL Goldstein监督,并与富布赖特(Fulbright)和福尔布赖特(Fulbright)和古尔班基(Gulbenkian)的家伙一起。很快,在1992年完成了博士学位论文之后,MCS于1994年在UTSW开始了自己的助理教授实验室。1997年,MCS将实验室搬到了英国伦敦帝国学院,在那里他于1999年成为完整的教授,并成为分子医学部门的负责人。2007年,MCS搬到了他的家乡葡萄牙里斯本,担任Nova医学院(NMS)生物医学和生物化学和细胞生物学的负责人。从那时起,直到2015年,MCS一直担任英国伦敦帝国学院医学院NHLI的Molecular Medicine的名誉教授。自2016年以来,MSC是英国伦敦大学学院UCL眼科研究所的荣誉教授。2012年,MCS成为葡萄牙所有科学领域的公共赠款机构的基金会总裁(FCT)。2016年,MC返回NMS,担任疾病实验室分子机制的小组领导者,并担任正教授。5选定出版物虽然FCT总裁MCS担任科学欧洲总裁,这是一个总部位于布鲁塞尔的组织,结合了研究资金和绩效研究的欧洲组织。 在2021年,MCS在Champalimaud创建了一个新实验室,以与印度LV Prasad Institute合作实施全球眼睛研究计划,目的是开发和实施用于常见眼科疾病的低成本解决方案。 mcs是AAV2-毒性血症基因治疗专利的持有人(英国专利申请1103062.4和国际应用PCT/GB/12/050376,题为“用于Choroideremia基因治疗的AAV-Quentors”,由Choroideremia的基因治疗使用”和37位博士生。 这些已成为成功的学术教授和研究小组领导者,企业家,行业工人,科学传播,政策和行政专家。 总体而言,他在美国,英国和葡萄牙的团体领导者中获得了超过1300万欧元的竞争赠款。虽然FCT总裁MCS担任科学欧洲总裁,这是一个总部位于布鲁塞尔的组织,结合了研究资金和绩效研究的欧洲组织。在2021年,MCS在Champalimaud创建了一个新实验室,以与印度LV Prasad Institute合作实施全球眼睛研究计划,目的是开发和实施用于常见眼科疾病的低成本解决方案。mcs是AAV2-毒性血症基因治疗专利的持有人(英国专利申请1103062.4和国际应用PCT/GB/12/050376,题为“用于Choroideremia基因治疗的AAV-Quentors”,由Choroideremia的基因治疗使用”和37位博士生。这些已成为成功的学术教授和研究小组领导者,企业家,行业工人,科学传播,政策和行政专家。总体而言,他在美国,英国和葡萄牙的团体领导者中获得了超过1300万欧元的竞争赠款。
方法。第一种方法是将含有 loxP 位点的 ssODN 引入目标外显子两侧的 5' 和 3' 位点。这是通过使用 2 个 sgRNA 完成的。第二种方法使用含有 2 个 loxP 位点的 lssDNA 模板,这 2 个 loxP 位点位于目标 DNA 序列两侧。这种方法使用了 2 个 sgRNA。B. UTSW 转基因核心提供给您的试剂:您向核心支付的 CRISPR 服务费用包括我们用于完成您的项目的 IDT Sp. Cas9 蛋白的费用。如果您的项目涉及使用不同的编辑酶(如 Cas12 或 Cpf),请联系核心工作人员更详细地讨论该项目。C. 了解您的基因的重要细节:使用基因组浏览器(如 NCBI、UCSC 或 ENSEMBl)收集有关您的目标基因的相关信息。这包括任何替代转录本、外显子的数量和重要性、位于特定内含子中的调控基序以及编码序列等细节,以便成功设计 sgRNA 和供体 DNA 模板。使用 MGI- 小鼠基因组信息学来确定是否存在与靶基因敲除相关的已知表型非常重要。了解基因的 KO 是否可能导致致命表型(无论是胚胎还是出生后早期)尤为重要。了解并将此信息传达给核心人员将使我们能够修改用于生成小鼠突变株的条件,以便我们主要创建 KO 等位基因杂合的小鼠。D. sgRNA 的设计:注射受精卵中发生的基因组编辑的效率在很大程度上取决于针对靶标的 sgRNA 的正确设计。此设计的关键组成部分包括: