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将适体修饰的纳米移液器与神经元介质和离体脑组织连接起来
摘要：适体功能化的生物传感器在监测复杂环境中的神经递质方面表现出高选择性。我们将纳米级适体修饰的纳米移液器传感器转化为检测体外和离体内源性多巴胺的释放。这些传感器采用具有纳米级孔（直径约 10 纳米）的石英纳米移液器，其用适体功能化，从而能够通过目标特定的构象变化选择性捕获多巴胺。多巴胺结合后适体结构的动态行为导致纳米孔内表面电荷的重排，从而导致可测量的离子电流变化。为了实时评估传感器性能，我们设计了一个流体平台来表征纳米移液器传感器的时间动态。然后，我们通过在生物环境中部署用非特异性 DNA 修饰的对照传感器以及多巴胺特异性传感器来进行差异生物传感。我们的研究结果证实了适体修饰的纳米移液器可用于直接测量未稀释的复杂流体，特别是在人类诱导多能干细胞衍生的多巴胺能神经元的培养基中。此外，传感器植入和急性脑切片中的重复测量是可能的，这可能是由于纳米级 DNA 填充孔内的受保护传感区域，最大限度地减少了非特异性干扰物的暴露并防止堵塞。此外，背外侧纹状体通过电刺激释放的内源性多巴胺的差异记录表明适体修饰的纳米移液器具有以前所未有的空间分辨率和减少的组织损伤进行体外记录的潜力。关键词：生物传感器、DNA、多巴胺、流体学、诱导多能干细胞衍生的神经元、纳米孔■简介
肿瘤组织切片体外处理作为评估肾癌患者靶向治疗的预测性临床前方法
1 格勒诺布尔阿尔卑斯大学、法国国家健康与医学研究院、CEA、IRIG-癌症和感染生物学、UMR_S 1036、F-38000 格勒诺布尔、法国； caroline.roelants@inovarion.com （CR）; qfranquet@chu-grenoble.fr（QF）; csarrazin1@chu-grenoble.fr （客户服务） nicolas.peilleron@gmail.com （NP）; sofiagiacosa@gmail.com（新加坡）; laurent.guyon@cea.fr （LG）; claude.cochet@cea.fr (CC) 2 Inovarion, 75005 巴黎，法国 3 格勒诺布尔阿尔卑斯大学，INSERM，CEA，IRIG-大规模生物学，UMR 1038，F-38000 格勒诺布尔，法国； catherine.pillet@cea.fr 4 格勒诺布尔阿尔卑斯大学医院，CS 10217，38043 格勒诺布尔 CEDEX 9，法国； lafontanell@chu-grenoble.fr（AF）; g.fiard@ucl.ac.uk （GF）; JALong@chu-grenoble.fr（J.-AL）; jldescotes@chu-grenoble.fr (J.-LD) * 通信地址：odile.filhol-cochet@cea.fr;电话：+ 33-(0)4-38785645；传真：+ 33-(0)4-38785058
体内 CRISPR/Cas9 筛选确定 Pbrm1 是小鼠髓系白血病发展的调节因子
对于表观遗传汇集筛选，对具有强力霉素诱导的 Cas9 等位基因 (KH2/iCas9;杰克逊实验室，库存编号 029415) 的 8 至 12 周龄小鼠实施安乐死，并对总共 100 万个 Lin – Sca-1 + c-Kit + (LSK) 细胞进行分选并用含有表观遗传 sgRNA 文库的慢病毒进行体外转导 (补充表 1) 14，然后移植到 B6/129 受体小鼠中 (有关更多详细信息，请参阅补充材料)。简而言之，LSK 细胞在 96 孔圆底微孔板中培养，培养基为 StemSpan 无血清扩增培养基（StemCell Technologies），其中添加了 100 ng/mL 重组鼠干细胞因子 (rmSCF)、10 ng/mL rm 白细胞介素-11 (IL-11) 和 5 ng/mL rmFlt3l (R&D Systems)，并以低感染复数共转导，慢病毒表达 Tet2 sgRNA (Tet2_e10.1；完整序列见补充表 1) 和表观遗传 sgRNA 文库，以实现 ~50% 的感染效率。24 小时后，将培养的细胞汇集、洗涤
针对 CAR-T 的疾病特异性 T 细胞体内工程改造
体内细胞工程通过直接控制体内细胞功能来增强 T 细胞免疫力，从而彻底改变了免疫疗法。这种方法绕过了目前工程细胞疗法（例如用抗癌嵌合抗原受体 (CAR) 修饰的 T 细胞）所需的复杂且昂贵的体外制造过程。然而，目前体内工程 T 细胞的方法依赖于泛 T 细胞标记（例如 CD3、CD8）来靶向 T 细胞，这可能导致与非选择性激活或抑制 T 细胞免疫相关的不良影响。在本次演讲中，我将首先介绍一种基因传递系统，称为抗原呈递纳米颗粒 (APN)，它可以通过 mRNA 传递选择性地在体内工程化疾病抗原特异性 T 细胞。然后，我将展示如何设计 APN 以选择性地消耗自身反应性 T 细胞，以防止小鼠模型中 1 型糖尿病的发作。此外，我将展示如何使用 APN 将流感特异性 T 细胞重新编程为抗癌 CAR T 细胞，这种细胞在人类多发性骨髓瘤异种移植小鼠模型中取得了与病毒转导的体外 CAR 相当的治疗效果。在本次研讨会结束时，我将概述我未来实验室将采取的研究方向，即在体内设计细胞以进行抗原特异性免疫治疗、疾病检测和肿瘤重新编程。
通过体内碱基编辑改善 Snijders Blok-Campeau 综合征小鼠模型的行为
CHD3 33 中的新生变异和遗传变异。CHD3 蛋白中几处基因突变位置的示意图（图 1a）。使用上海交通大学医学院新华医院获得的一名 SNIBCPS 儿童及其未受影响的父母的基因组 DNA 进行全外显子组测序，我们在 CHD3 基因中发现了一个新生 SNV（c.C3073T，NM_001005271.3；p.R1025W，NP_001005271.2），并使用 Sanger 测序进行了验证（图 1b）。新生变异引起的氨基酸变化（R1025W）位于 CHD3 蛋白的解旋酶 ATP 结合结构域和解旋酶 C 末端结构域之间（图 1a）。 gnomAD 数据库 (http://gnomad.broadinstitute.org) 中的数据表明，该变异 (CHD3，17号染色体：7803967) 在东亚人群中不存在，这表明它是一种罕见变异。
体内量化影响 BK 多瘤病毒 VP1 基因的 APOBEC3 突变率
摘要：BK 多瘤病毒 (BKPyV) 衣壳突变在肾移植 (KTx) 接受者体内积累，病毒持续复制。这些突变与中和逃逸有关，似乎是由于宿主细胞 APOBEC3A/B 酶使胞嘧啶脱氨而产生的。为了研究患者体内发生的致突变过程，我们扩增了 VP1 基因的分型区，对扩增子进行了 5000-10,000 × 深度测序，并确定了罕见突变，这些突变与 COSMIC 突变特征相吻合。在携带 BKPyV 基因组的质粒的扩增子中确定了背景突变，并与来自法国和越南的 23 名 KTx 接受者的 148 个样本中观察到的突变进行了比较。在尿液、血清和肾脏活检样本中持续观察到三种突变特征，其中两种，SBS2 和 SBS13，与 APOBEC3A/B 活性相对应。此外，在患者样本和体外感染 BKPyV 的细胞中均检测到了第三个病因不明的特征 SBS89。定量上，尿液样本中的 APOBEC3A/B 突变率与尿液病毒载量密切相关，并且似乎因人而异。这些结果证实，APOBEC3A/B 是患者 BKPyV 基因组突变的主要来源，但并非唯一来源。
通过乳腺导管内注射将基因递送至小鼠乳腺上皮细胞
小鼠乳腺由导管树组成，导管树内衬上皮细胞，每个乳头顶端都有一个开口。上皮细胞在乳腺功能中起着重要作用，是大多数乳腺肿瘤的起源。将感兴趣的基因引入小鼠乳腺上皮细胞是评估上皮细胞基因功能和生成小鼠乳腺肿瘤模型的关键步骤。这一目标可以通过将携带感兴趣基因的病毒载体注射到小鼠乳腺导管树中来实现。注射的病毒随后感染乳腺上皮细胞，带来感兴趣的基因。病毒载体可以是慢病毒、逆转录病毒、腺病毒或腺病毒相关病毒 (AAV)。这项研究展示了如何通过小鼠乳腺导管内注射病毒载体将感兴趣的基因传递到乳腺上皮细胞中。携带GFP的慢病毒用于显示传递基因的稳定表达，携带Erbb2（HER2/Neu）的逆转录病毒用于显示致癌基因诱导的非典型增生性病变和乳腺肿瘤。
牙龈卟啉单胞菌诱发的女性牙周炎模型中血清 C 反应蛋白升高：体内和分子对接
牙周炎与全身多种疾病关系密切，而牙龈卟啉单胞菌是牙周炎发生发展的关键，C反应蛋白（CRP）是细菌感染引起的全身炎症的主要指标之一。本研究以P. gingivalis诱发的雌性大鼠模型，通过体内实验和分子对接的方法评估血清CRP水平的升高。本研究使用P. gingivalis悬浮液于下颌第一左右磨牙近中龈沟中诱发雌性动物模型，剂量为0.05 ml，每三天注射一次，共19天。根据观察期使用致死剂量的氯胺酮对动物实施安乐死，并心脏采血。CRP测定使用ELISA试剂盒。分子对接分析采用Protein Data Bank网站、Pymol软件和ClusPro 2.对CRP水平进行统计学分析，采用方差分析（ANOVA）(p<0.05)。结果显示，雌性牙周炎大鼠模型组血清CRP水平明显高于对照组（p=0.000），在观察期范围内各组间差异无统计学意义（p>0.05），但同一观察期内对照组与雌性牙周炎模型组血清CRP水平有差异（p<0.05）。CRP-赖氨酸特异性牙龈蛋白酶（KGP）键能是P. gingivalis其他毒力因子的CRP键中最低且最稳定的（-1038.6）。综上所述，P. gingivalis诱导可升高雌性牙周炎模型中的CRP水平。
牛奶衍生的外泌体在体内的宇宙应用...
•微小的货物具有内部数据，支持使用牛奶外泌体来促进伤口愈合并增加受伤和发炎的皮肤组织的摄取。最近的出版物显示受伤的皮肤组织的摄取大于10倍（Marsh等，2025）。•Lai等人的研究。（2015）证明，MSC衍生的外泌体在糖尿病小鼠中加速了伤口愈合，通过增强上皮化和胶原蛋白沉积，支持伤口部位的组织再生。（•Zhang等人，2015年，还表明，人类脂肪衍生的干细胞（ADSC）外泌体改善了各种动物模型的皮肤再生和愈合。源自ADSC的外泌体可以增强血管生成和皮肤组织的修复，这对于伤口愈合至关重要。•Lee等人。报告说，来自人皮肤成纤维细胞的外泌体通过增加胶原蛋白合成并促进皮肤再生，从而增强皮肤再生。这表明外泌体可能有助于减轻衰老的迹象，例如皱纹和皮肤弹性的损失（。
体内基因编辑的前景
近年来，基因编辑技术取得了长足进步，为治疗遗传疾病、改善疾病建模和增进我们对生物过程的理解提供了潜力。基因编辑最有潜力的方面之一是其在人类造血干细胞（HSC）中的应用，即血细胞的祖细胞，这可能会彻底改变白血病、镰状细胞性贫血和地中海贫血等血液病的治疗方法。传统的基因编辑方法通常提供体外培养，即分离干细胞，在体外进行编辑，然后移植回患者体内。虽然在许多情况下是有效的，但这一过程引发了人们对基因毒性的担忧，即有害基因变化可能导致癌症或其他不良影响。最近的进展表明，直接在活组织内进行基因编辑，而无需体外培养，可能通过避免与传统方法相关的基因毒性风险来提供更安全的替代方法。