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营救酵母人工染色体的末端碎片
酵母人工染色体（YAC）为隔离和映射哺乳动物染色体的区域提供了强大的工具。，我们通过通过同源重组将救援质粒插入YAC载体中的DNA片段开发了一种快速有效的方法来分离代表YAC克隆极端的DNA片段。构建了两个救援载体，其中包含一个酵母Lys2可选基因，一个细菌的复制起源，一个抗生素耐药基因，一个包含多个限制位点的聚链链接和与PYAC4载体同源的片段。“终端克隆”程序涉及将救援载体转化为带有YAC克隆的酵母细胞，然后制备酵母DNA并转化为细菌细胞。所得质粒的长度最高20 kb，可用作杂交探针，作为直接DNA测序的模板，以及作为荧光原位杂交绘制的探针。这些向量适合从使用PYAC衍生载体构建的任何YAC中拯救端键。我们通过从人类YAC图书馆中拯救Yac-end片段来证明这些质粒的实用性。
一种新型的HDAC6抑制剂CKD-504可有效治疗亨廷顿氏病的临床前模型
亨廷顿氏病（HD）是一种神经退行性疾病，其发病机理是由亨廷顿蛋白基因氨基末端的多谷氨酰胺扩张引起的，导致突变型HTT蛋白的促进。HD的特征是功能性运动功能障碍，认知障碍和神经精神病障碍。组蛋白脱乙酰基酶6（HDAC6）是一种微管相关的脱乙酰酶，已显示出在HD模型中诱导运输和释放缺失的表型，而HDAC6抑制剂的处理可通过增加HD的抑制作用，从而增加HD的表型，从而通过增加α-α-α-蛋白乙酰化酶的繁殖水平来增强HD的水平。 （MHTT）聚集体，建议HDAC6抑制剂作为HD强奸剂。在这项研究中，我们采用了体外神经干细胞（NSC）模型和HD的体内YAC128转基因（TG）小鼠模型来测试由Chong Kun Dang开发的新型HDAC6选择性抑制剂CKD-504（CKD Pharmaceu-tical Corp.，Korea）。我们发现，CKD-504小管蛋白乙酰化，微管稳定，轴突转运以及在体外突变亨廷汀蛋白的减少。在体内研究中，我们观察到CKD-504改善了亨廷顿氏病的病理：缓解行为缺陷，轴突运输的增加和神经元的数量，恢复的突触性功能（CS）电路中的突触功能，MHTT的积累，炎症，炎症，tau Hyperphosphospation and yac ifflosphosphoration in yac incy in yac inac inacy in yacy inacy in yacy incy incy in yac incy inace incy in y y ac yace incy incy in y y ac py y y ac py hyace yac yac128 tg incy incy incy incy complatizon Incormation。这些新型结果将CKD-504作为HD的潜在治疗策略。[BMB报告2023; 56（3）：178-183]
2025青年咨询委员会工作计划
•协调介绍当地青年问题的青年特定举措； •与与青年有关的问题或机会的个人和组织建立和维持关系； •研究并向政策提案提供意见，以考虑到直接影响社区青年的事项的考虑； •接收理事会或报告理事会要求对青年事务的指示； •提供针对青年的城市政策，计划或服务的青年镜头； •与支持青年计划和其他市政当局的行政管理和其他组织互动。在2025年，YAC有11名成员，1名成员和10名成员，从2024年返回。YAC可以很好地从成功中学习并将其利用到2025年。根据2024年委员会的反馈，年轻人确定他们希望获得政府和委员会议员的更多指导机会。根据该建议，行政和委员会议员将专注于提供其他学习成果：
单个i.v.的体内基础编辑注射载体治疗血红蛋白病
患有β-丘脑贫血或镰状细胞疾病的个体以及具有30％胎儿血红蛋白（HBF）的胎儿血红蛋白（HPFH）的遗传性持久性似乎无症状。在这里，我们使用了非整合HDAD5/35 ++矢量，该矢量表达了腺嘌呤基础编辑器（ABE8E）的高效，准确的版本（在体内安装A –113 A> g HPFH突变中，在健康CD46/β-yac小鼠中含有人β-糖的γ-蛋白启动子中的γ-蛋白启动子中的γ-蛋白启动子。我们的体内造血干细胞（HSC）编辑/选择策略仅涉及S.C.和i.v.注射，不需要骨髓和HSC移植。在CD46/β-YAC小鼠中的体内HSC碱基编辑中导致> 60％–113 A> g转化率，β-蛋白的30％γ-球蛋白在70％的红细胞中表达。 重要的是，未检测到在圆形序列或计算机中预测的位点的脱靶编辑。 此外，RNA-Seq没有发现体内编辑小鼠的转录组的临界变化。 在体外，在β-thal症和镰状细胞疾病患者的HSC中，基本编辑器载体介导的有效效率–113 A> g转化和γ-珠蛋白表达的重新激活，并随后对等肌酸细胞的表型校正。 由于我们的体内基础编辑策略在技术上是安全且技术简单的，因此它具有流行血红蛋白病的发展中国家的临床应用。导致> 60％–113 A> g转化率，β-蛋白的30％γ-球蛋白在70％的红细胞中表达。重要的是，未检测到在圆形序列或计算机中预测的位点的脱靶编辑。此外，RNA-Seq没有发现体内编辑小鼠的转录组的临界变化。在体外，在β-thal症和镰状细胞疾病患者的HSC中，基本编辑器载体介导的有效效率–113 A> g转化和γ-珠蛋白表达的重新激活，并随后对等肌酸细胞的表型校正。由于我们的体内基础编辑策略在技术上是安全且技术简单的，因此它具有流行血红蛋白病的发展中国家的临床应用。
RNA病毒克隆平台 有历史的小鼠
《自然》杂志的一项研究报告了酵母酿酒酵母作为组装和维护各种 RNA 病毒基因组（包括 SARS-CoV-2）的平台的适用性，该平台可实现对 SARS-CoV-2 的基因操作和功能表征。在疫情爆发期间，病毒分离株可用于开发诊断、体内模型、抗病毒疗法和疫苗。如果病毒分离株的可用性有限，可以从化学合成的 DNA 中克隆病毒基因组，但使用大肠杆菌的既定方法通常不足以容纳冠状病毒（冠状病毒科）等 RNA 病毒的大型基因组。Thao 等人将转化相关重组 (TAR) 克隆应用于含有 GFP 基因的小鼠肝炎病毒 (MHV)，该病毒具有成熟的反向遗传学平台。将覆盖 MHV-GFP 基因组和 TAR 载体的重叠 DNA 片段转化到酵母中，DNA 片段通过同源重组组装，产生包含全长病毒 cDNA 的酵母人工染色体 (YAC)。值得注意的是，90% 以上的筛选克隆显示 YAC 组装正确，表明组装效率高。通过分离和线性化 YAC 进行体外转录以生成病毒 RNA，成功从两个单个克隆中回收了传染性病毒，然后将其与编码 MHV 核衣壳蛋白的 mRNA 一起转染到 BHK-MHV-N 仓鼠细胞系中，以产生和扩增病毒。回收的病毒表现出与亲本 MHV-GFP 相同的复制动力学。该团队着手确定合成基因组学平台是否可以应用于 MERS-CoV，使用低拷贝细菌人工染色体 (BAC) 从八个重叠的 PCR 扩增 DNA 片段克隆病毒。该方法还应用于突变的 MERS-CoV 克隆，该克隆中插入了 GFP 基因。YAC 克隆组装和从克隆 DNA 中拯救病毒均取得成功，确定了该平台可适用于更广泛的病毒，包括转基因病毒基因组。进一步的实验确定病毒基因组可以稳定维持，并且该平台适用于其他难以克隆的病毒，例如寨卡病毒（黄病毒科）和人类呼吸道合胞病毒（副粘病毒科），包括直接从临床样本中克隆，而无需事先了解病毒基因型。令人惊讶的是，在收到基于 2020 年 1 月发布的基因组序列的 SARS-CoV-2 合成 DNA 片段后 1 周内，就实现了重组 SARS-CoV-2 和 SARS-CoV-2-GFP 的克隆和拯救。总之，这项研究展示了合成基因组学平台在疫情期间从不同起始材料（包括病毒分离物、克隆 DNA、合成 DNA 或临床样本）快速生成和功能表征进化 RNA 病毒的实用性。
导师简介
张恒，江苏省高层次人才培养计划（“ 333 工程”）第二层次培养对象，江苏省杰出青年基 金获得者，博士毕业于浙江大学控制学院，目前担任江苏海洋大学计算机工程学院副院 长、教授、硕士生导师，中国矿业大学兼职博士生导师，齐鲁工业大学（山东省科学院） 兼职硕士生导师。目前担任中国自动化学会工业控制系统信息安全专委会委员，江苏省 自动化学会控制理论专委会委员、青年工作委员会委员，担任国际学术期刊 EURASIP JWCN 等编委，曾担任 EJC 、 JFI 等多个国际期刊的客座编委，受邀担任美国控制会议 ACC 2017 分会场 Chair 、亚洲控制会议 ASCC2017 分会场 Chair 等，担任知名国际会议 IEEE ICCC'14 、 ICNC'17 、 ICNC'18 、 YAC'18 、 IEEE SmartGridComm'19 、 ICNC'20 程序 委员会委员 , 长期担任包括 IEEE TAC 、 Automatica 等 20 余个国际知名期刊论文审稿人。 2016 年入选江苏省 “ 双创博士 ” （科技副总类）， 2017 年入选连云港市 “ 港城英才计划 ” ， 2018 年获得江苏省 “ 六大人才高峰 ” 项目、连云港市 “ 海燕计划 ” 重点资助类， 2019 年入选 江苏省 “ 青蓝工程 ” 中青年学术带头人（考核优秀）。曾在香港科技大学、澳大利亚西悉尼 大学访问研究。发表研究论文 70 余篇，其中包括在期刊 IEEE TAC 、 Automatica （控制 领域两大顶级期刊）、 IEEE TCST （控制领域旗舰期刊）、 IEEE TCNS （控制领域旗舰期 刊）、 IEEE TIE （ SCI 一区期刊）等高水平期刊发表论文，论文曾入选中国百篇最具影响 国际学术论文、 ESI 高被引论文、 ESI 热点论文、国际会议最佳论文奖。主持国家自然 科学基金面上项目、国家自然科学基金青年基金项目、江苏省自然科学基金面上项目、 江苏省高校自然科学研究面上项目等。研究成果获江苏省科学技术奖二等奖、江苏省高 校科学研究成果三等奖。