酵母人工染色体(YAC)为隔离和映射哺乳动物染色体的区域提供了强大的工具。,我们通过通过同源重组将救援质粒插入YAC载体中的DNA片段开发了一种快速有效的方法来分离代表YAC克隆极端的DNA片段。构建了两个救援载体,其中包含一个酵母Lys2可选基因,一个细菌的复制起源,一个抗生素耐药基因,一个包含多个限制位点的聚链链接和与PYAC4载体同源的片段。“终端克隆”程序涉及将救援载体转化为带有YAC克隆的酵母细胞,然后制备酵母DNA并转化为细菌细胞。所得质粒的长度最高20 kb,可用作杂交探针,作为直接DNA测序的模板,以及作为荧光原位杂交绘制的探针。这些向量适合从使用PYAC衍生载体构建的任何YAC中拯救端键。我们通过从人类YAC图书馆中拯救Yac-end片段来证明这些质粒的实用性。
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