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ATP ATP腺苷-5'-三磷酸凸轮钙调蛋白CARQ CAQ+激活的Rho蛋白，带有嵌入的IQP Ceru ceru cerulean，相当于CFP CFP CFP CyAn荧光蛋白 Dulbecco's modified eagle medium FBS Fetal Bovine Serum FKBP12 12-kDa FK506 and rapamycin-binding protein FRB FKBP-rapamycin binding domain FRET Fluorescence resonance energy transfer GST Glutathione S-transferase His Polyhistidine-tag IRES Internal ribosomal entry site LB Luria Broth LOV Light-oxygen-voltage域，lov2域Lovs1K Lov2结构域与刺激1 c末端碎片MCS多个克隆位点MLCKP肌球蛋白轻链激酶激酶肽MRFP单体红色荧光蛋白相当于RFP，相当于RFP NES核出口NLS NLS NLS信号NLS信号NLS核定位PBS PBS PBS磷酸盐磷酸盐磷酸盐磷酸盐磷酸盐磷酸盐磷酸盐酶磷酸盐磷酸盐磷酸盐磷酸盐磷酸盐磷酸盐磷酸盐磷酸盐磷酸盐反应pdbu pdbu pdbu pdbu pdbu pdbu pdbu pdbu pdbu pdbu pdbu pdbu pdbu pdbu pdbu pdbu pdbu pdbu pdbu pdbu PKC Protein kinase C pLyn Palmitoylation sequence of Lyn kinase RFP Red fluorescent protein, equivalent to mRFP SDS-PAGE Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis SH3 SRC Homology 3 Domain TEV Tobacco etch virus TEVp Tobacco etch virus protease TS Temperature-sensitive tsTEVp Temperature-sensitive tobacco蚀刻病毒蛋白酶tvmvp烟草静脉斑点病毒蛋白酶蛋白酶ven venus，相当于YFP YFP YFP黄色荧光蛋白，相当于Ven
解散原因和后果：危险混合2风险基因座的遗传解剖以及自身免疫中DM2H NLR的激活
核苷酸结合结构域 - 富含亮氨酸的重复型免疫受体（NLR）通过效应蛋白的细胞内检测来保护植物免受致病性微生物的影响。然而，这是有代价的，因为NLR还可以在与外国等位基因的遗传相互作用中引起有害的自身免疫性。当将独立进化的基因组组合在杂质内或杂交中时，或者是通过诱变或转基因引入外来围栏时，可能会发生这种情况。大多数自身免疫性诱导的NLR都在高度可变的NLR基因簇中编码，没有已知的免疫功能，这些功能被称为自身免疫性风险基因座。NLR是否与在自然病原体抗性中运行的传感器NLR以及在自身免疫性中激活NLR的风险NLR是否有所不同。在这里，我们分析了拟南芥中主要的自身免疫热点的危险混合风险基因座。通过基因编辑和异源表达，我们表明，在三种独立的自身免疫性病例中，单个基因DM2H是自身免疫性诱导的必要且有足够的因素，可用于登录Landsberg Erecta。我们关注的是由EDS1-叶叶溶液蛋白（YFP）NLS融合蛋白引起的自身免疫性，以功能表征DM2H并确定激活免疫受体的EDS1- YFP NLS的特征。我们的数据表明，在这种情况下，在这种情况下，eDS1-YFP NLS的自身免疫性诱导性能的风险NLR的功能与传感器NLR的功能无关，与蛋白质作为免疫调节剂的功能无关。我们建议至少在某些情况下，自身免疫性可能是由外国等位基因与偶然匹配风险NLR的虚假，随机相互作用引起的。
调查帕金森氏病和癌症之间共同遗传危险因素
（a）CRISPR/CAS9基因组编辑和重组成分组合在矢量中（请参阅材料和方法1），该材料和方法1）由A. tumefaciens递送至苹果叶条。该载体包含4个GRNA表达对靶DIPM1，DIPM4，HIPM和MLO基因的单位。转化后，将叶条带在补充卡纳米霉素和激素以进行再生的MS板上转移。（b）另外，通过粒子枪仅包含FRT位点之间的序列的编辑矢量的线性化片段。在这里，YFP的编码顺序在CAS9的5'上融合在一起，以检查成功交付并监视转换效率。（c）消除从编辑植物基因组中的编辑成分是通过热休克处理的激活FLP基因的表达
在haloferax火山中的颜色荧光标记 - uts
收到2024年3月14日； 2024年4月26日接受；于2024年5月24日出版作者分支：1澳大利亚微生物学研究所，悉尼科技大学，新南威尔士州锡德尼大学，2007年，澳大利亚。*信件：Solenne Ithurbide，Solenne。Ithurbide@umontreal。CA; Iain G. Duggin，Iain。Duggin@uts。Edu。Au关键字：Archaea; cetz;克隆向量；细胞骨架；荧光蛋白； ftsz。缩写：BSW，缓冲盐水； CFP，青色荧光蛋白； FP，荧光蛋白； GFP，绿色荧光蛋白； MC，多个克隆网站； ORF，开放阅读框； SLG，S层糖蛋白； wt，野生型； YFP，黄色荧光蛋白。†目前的地址：départementde Microbiologie，Infectiologie et immunologie，蒙特利尔大学，蒙特利尔大学，蒙特利尔，QC，加拿大，加拿大，地址：目前的地址：亚利桑那州立大学，亚利桑那州立大学，美国亚利桑那州凤凰城。本文的在线版本提供了五个补充数据和两个补充表。001461©2024作者
碳纳米管介导的质粒 DNA 在水稻叶片和种子中的传递
摘要：CRISPR-Cas 基因编辑技术提供了精确修改作物的潜力；然而，由于组织培养过程冗长且基因型特异性，体外植物转化和再生技术存在瓶颈。理想情况下，植物体内转化可以绕过组织培养，直接产生转化植物，但有效的植物体内传递和转化仍然是一个挑战。本研究探讨了有可能直接改变生殖系细胞的转化方法，从而消除了体外植物再生的挑战。最近的研究表明，装载质粒 DNA 的碳纳米管 (CNT) 可以扩散穿过植物细胞壁，促进外来遗传元件在植物组织中的瞬时表达。为了测试这种方法是否是植物体内转化的可行技术，利用带有报告基因的叶片和离体胚浸润，将 CNT 介导的质粒 DNA 传递到水稻组织中。定量和定性数据表明，CNT 有助于质粒 DNA 在水稻叶片和胚胎组织中的传递，从而导致 GFP、YFP 和 GUS 的瞬时表达。还利用靶向八氢番茄红素去饱和酶 (PDS) 基因的 CRISPR-Cas 载体开展实验，将 CNT 传递到成熟胚胎中，以创建可遗传的基因编辑。总体而言，结果表明，基于 CNT 的质粒 DNA 传递似乎有望用于植物体内转化，进一步优化可以实现高通量基因编辑，从而加速功能基因组学和作物改良活动。
CRISPR/CAS9核糖核蛋白介导的HTERT-RPE1细胞中的敲除蛋白
图1。使用ssDNA或PCR产物作为HDR模板（a）上部的蛋白质标记的策略示例：据报道编码Centriolar远端附属物蛋白SCLT1的C-末端的基因组序列。带下划线的序列代表CrRNA识别位点，PAM序列为黄色，垂直虚线表示切割位点。鉴于距离内源性终止密码子（BOLD大写字母的TAA）距离为14 bp，插入位点被任意定位为距剪切位点1 bp的位置，即在SCLT1的密码子之间的最接近的交界处。在下部，密码子（上图）和相应的氨基酸性残基（下图）构成了插入物：蓝色大写字母是指可易加的链接器，然后是v5-tag（红色）和附加的外源终止密码子（黑色）。50 bp lha或rha = 50碱基对左同源臂或右同源臂。（b）使用PCR产物作为供体DNA生成具有荧光蛋白（FP）的蛋白质（您最喜欢的蛋白质，YFP）的C端标记的示意图。PCR模板由带有FP，2A元件和电阻盒（R）的标准质粒（左侧）组成。使用一对60mer引物进行PCR反应。在右侧代表了目标基因座（您最喜欢的基因，YFG）的编辑。
光片荧光显微镜
封面图片。上图：Thy1-GFP 标记的透明化鼠脑（CLARITY）。采用 ZEISS Lightsheet Z.1 采集，在 arivis Vision4D 中处理。使用 5 倍物镜成像，使用来自两侧的 6x7 瓷砖。插图：皮质区域的数字变焦，显示可以识别和分析单个神经元。图片由 Douglas S Richardson 拍摄；经 ZEISS 许可复制。中间左侧：有丝分裂中的 HeLa 细胞的 3D 渲染。来自 300 个时间点图像系列的快照。染色体标记为绿色（mCherry-H2B），线粒体标记为黄色（mitotracker - 深红色），内质网标记为洋红色（mEmerald-calnexin）。细胞器结构清晰可见。由 Wesley Legant 和 Eric Betzig 使用晶格光片显微镜采集。图片来自 Chen 等人Science 2014;346:1257998。经美国科学促进会许可转载。中间右侧：海洋甲壳类动物 Parhyale hawaiensis 六天大胚胎的 3D 渲染体积数据集。七天延时拍摄的一个时间点。使用 ZEISS Lightsheet Z.1 采集，数据在斐济处理和融合。图像由 Tassos Pavlopoulos 拍摄。底部：斑马鱼视网膜的发育过程，在出生后 1.5 天至 3.5 天内，每 12 小时在光片显微镜下拍摄一次。标签：视网膜神经节细胞与 Ath5:RFP（洋红色），无长突细胞和水平细胞与 Ptf1a:YFP（黄色），光感受器和双极细胞与 Crx:CFP（青色）。图片由德累斯顿马克斯普朗克分子细胞生物学和遗传学研究所（MPI-CBG）的 Norden 实验室提供（根据知识共享署名 - 相同方式共享 4.0 国际许可证授权 https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/deed.en）。