图1 Yarrowia脂溶性固体箭头中脂质代谢的概述:化学转换和运输反应,虚线箭头:多个化学转换步骤,虚线和箭头:代表N-限制后果。AMP,单磷酸腺苷; CIT,柠檬酸盐; DAG,二酰基甘油; DHAP,二羟基丙酮磷酸盐; F6P,果糖6-磷酸盐; FA,脂肪酸; FBP,果糖1,6-双磷酸;烟雾,富马酸; G3P,甘油3-磷酸盐; G6P,葡萄糖6-磷酸盐; GA3P,3-磷酸甘油醛; ICIT,异核酸; Imp,肌苷一磷酸; LPA,溶物磷脂酸;马尔,苹果; mal -coa,丙二酰辅酶A; NH4,铵; OAA,草乙酸; PA,磷脂酸; pyr,丙酮酸; suc,琥珀酸;标签,三乙二醇[可以在wileyonlinelibrary.com上查看颜色图]AMP,单磷酸腺苷; CIT,柠檬酸盐; DAG,二酰基甘油; DHAP,二羟基丙酮磷酸盐; F6P,果糖6-磷酸盐; FA,脂肪酸; FBP,果糖1,6-双磷酸;烟雾,富马酸; G3P,甘油3-磷酸盐; G6P,葡萄糖6-磷酸盐; GA3P,3-磷酸甘油醛; ICIT,异核酸; Imp,肌苷一磷酸; LPA,溶物磷脂酸;马尔,苹果; mal -coa,丙二酰辅酶A; NH4,铵; OAA,草乙酸; PA,磷脂酸; pyr,丙酮酸; suc,琥珀酸;标签,三乙二醇[可以在wileyonlinelibrary.com上查看颜色图]
摘要 目的 构建和验证一组含有六种不同标记的解脂耶氏酵母 CRISPR/Cas9 载体,可编辑几乎任何遗传背景,包括野生型菌株的遗传背景。 结果 使用 Golden Gate 方法,我们组装了一组六个 CRISPR/Cas9 载体,每个载体含有不同的选择标记,用于编辑工业酵母解脂耶氏酵母的基因组。此载体组可通过 Addgene 获得。使用 Golden Gate 组装,可以轻松快速地将任何向导 RNA (gRNA) 序列引入这些载体中的任何一个。使用这六个载体中的五种,我们成功地编辑了各种遗传背景(包括野生型菌株)中的六种不同基因。使用这些载体大大改善了特定位点的同源重组和盒式整合。结论我们已经创建了一套多功能、模块化的 CRISPR/Cas9 载体,可以快速编辑任何解脂耶氏酵母菌株;该工具将
