将 PBMC 和支气管抽吸物部分放入三块 6 孔板中,在 37°C 和 5% CO 2 条件下培养 24 小时,培养液为 RPMI 1640 培养基(PAA Laboratories,美国),培养基中添加抗生素(1% 青霉素-链霉素-新霉素,Sigma Aldrich,美国),培养液为不同浓度的 nivolum-ab(5 µg/mL、10 µg/mL、20 µg/mL 培养物)(Bristol-Myers Squibb,美国)或 atezolizumab(150 µg/mL、300 µg/mL、600 µg/mL 培养物)(Roche,法国)。培养方法如图 1 所示。培养完成当天,从培养孔中回收细胞,并进行免疫表型分析。将外周血和支气管抽吸物中不用于培养的对照细胞分装到流式细胞仪管中,与一组单克隆抗体在 4°C 下孵育 30 分钟。然后用不含 Ca 2+ 和 Mg 2+ 离子的 PBS 缓冲液(离心参数:2000 rpm/5 分钟)洗去未结合抗体的残留物,并在流式细胞仪中对细胞免疫表型进行详细分析。反过来,将用单独的抗PD-1或抗PD-L1抗体进行短期培养的细胞在孵育24小时后,与结合有适当荧光染料的选定抗体(抗CD4-FITC、抗CD274-FITC、抗CD14-FITC、抗CD8-PE、抗CD14-PE、抗CD25-APC、抗CD69-APC、抗CD95-APC、抗CD279-APC(Becton Dickinson,美国))孵育。
获得了与上述基因表达相对应的(德国Sigma Aldrich)。理想稀释比和检索缓冲液在染色之前确定(ITGA-2:1:100,MMP-1:1:1:1:1:1:1:1:1:1:250)。简短地,将组织切片用二甲苯脱蜡,并随着酒精浓度降低而补液。使用柠檬酸盐缓冲液(10 mmol/L,pH 6.0)在微波炉(600 W)中进行热诱导的表位检索后,在室温下使用载玻片,用针对ITGA-2,TEK,TEK,TEK,MMP-1的主要抗体进行1小时。Ultravision LP检测系统(Lab Vision Corporation,Fremont,California)用于根据制造商的建议检测抗体结合。抗体结合位点通过添加3-3-二氨基苯胺颜色褐色。最后,进行了用苏木精三世(Merck,Darmstadt,Germany)对Tis-Sue样品的抗染色。所有载玻片均分配给标记表达式的四类类别之一:0 =负; 1 =弱:在<30%的细胞中染色; 2 =中度:30%至60%的细胞染色;和3:超过60%的细胞中的染色强。采用核心污渍的平均值来确定染色强度。阳性对照是根据制造商的协议进行的。使用Olympus BH-2显微镜(Olympus America,Melville,New York,New York)分析样品。
新年如火如荼,全国各地的口罩要求都在下降,2022 年 AAFM 盐湖城全国会议的报名也已全面开放。我希望随着旅行限制的放宽,除了与老朋友叙旧之外,你们都能抽出时间参加我们在盐湖城举办的一场非常有教育意义的活动。您可以在我们的网站上找到注册信息,也可以撕下本通讯背面的注册信息。我很高兴地宣布,前 Malmstrom EMTer 和 Inspiration4 上的商业宇航员 Chris Sembroski 将于 10 月 7 日星期五晚上与我们共进晚餐。其他嘉宾演讲者的更多新闻将在确认后在每月更新中提供。希望您喜欢我们每月的电子邮件新闻。我们不会等待每隔几个月向您发送新闻,而是尝试每月通过电子邮件和每年三次通过通讯发送信息。如果您没有收到我们的每月电子邮件,那是因为我们的系统中没有您的有效电子邮件。在过去的几个月里,你们每个人都有机会投票重新选举或更换我们董事会中任期已满的四名成员。祝贺回归的董事会成员 Bob Parker 和 Mike Kenderes 以及我们最新的董事会成员 Linda Aldrich 和 Tony Bales。感谢即将离任的董事会成员 Randy Tymofichuck 和 Jock Dodson 为 AAFM 所做的贡献。在本期中,AAFM 董事会成员和前第 20 空军指挥官少将 (Ret) Don Alsto
$500 - $999 AE Sampson & Son, Ltd. *Jonathan & Nancy Aldrich Charles Altschul 夫妇 Bangor 储蓄银行 Stephen J. Barr & Martha G. Leggat Ellen & John Bates Susan & Richard Bates Todd & Christine Beacham Bill & Barbara Bentley John & Pamela Blackford Evelyn Blum & Steve Thomas Hathaway & Galen Brewster Patrick & Carol Cardon Belinda & Alvin Chase, Sr. Ed Collins 先生 Peter M. & Sally Enggass Angie & Ted Ewing David & Pat Farmer Bruce & Joy Faulkner Erin M. Flanagan Maureen Flanagan & Mike Bridges Ben & Leslie Fuller Mandy Funkhouser Lisa & Leon Gorman Harbor Road 兽医医院 Hedgerow Josie Hughes KeyBank 基金会 Paul & Betty Killoran Richard Lee & Cheryl Short-Lee Alexander Wilson Lloyd Bill & Beth Long Colin & Janet Marshall John & Penelope Maynard Philip 博士和 Deborah McKean 牧师 Mount Pleasant 牙科护理 Tom 和 Lisa Neely Sherman 和 Elaine Olson Alan 和 Marnie Pease Bonnie 和 Dave Percival Sarah Rheault Ellen 和 David Rich Jim 和 Ann Robbins Rockland 扶轮社 Nancy 和 Robert Shipman Wyeth 基金会 Kip 和 Evan Thomas Alexander F. Watson Jeremy Wintersteen Tom 和 Dennie Wolf Nicholas Wyeth
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没有项目操作5。PARTIES INVOLVED IN THE CONTRACT AND THEIR REPRESENTATIVES 5.1 Project Funded by ADAPTATION FUND 1818 H Street NW, Washington DC 20433, USA Website: www.adaptation-fund.org 5.2 Implementing Entity DESERT RESEARCH FOUNDATION OF NAMIBIA (DRFN) P O Box 20232, Windhoek Represented by Mr O Aldrich Tel: (061) 37 7500 Fax: (061) 23 0172电子邮件:ola@aldrichprojectConsulting.com 5.3执行实体(雇主)纳米比亚水公司私人袋13389,由R Likando先生代表的Windhoek电话:(061)71 2039 FAX:(061)FAX:(061)71 3801 Cell.com:01 3801 Cell.com:081 734 3184 3184 3184 3184 3184 E-MAIL:4 3184 3184 EM-MAIL:4 3184 EM-MAIL:4334 3184 E-MAIL: BETHANIE VILLAGE COUNCIL P O Box 74, Bethanie Represented by the CEO, Mr Hendrik Gaobaeb Tel: (063) 283 006 Fax: (063) 283 107 e-mail: gaobaebh@gmail.com 5.5 Contractor MAIN CONTRACTOR: CSV Construction Namibia (PTY) Ltd P O Box 86418, Eros, Windhoek Represented by Mr L Zaayman电话:(061)41 3550传真:(061)21 0210单元格:081 712 4236电子邮件:louis@csvnam.com.na电气分包商:C van Heerden先生代表的Ecoprojects由C van Heerden Mr代表carlo@ecoprojects.com.na
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2025 年 1 月 4 日,星期六 圣伊丽莎白 Ann Seton,宗教 上午 8:00 IRV STONE (Anniv) 作者:Richard Ondrako 下午 5:00 LARRY CORDSEN 作者:John 和 Arlene Cordsen KAREN SIMONS 作者:John Giarrusso KEVIN AUSTIN 作者:Ladamon Allamon 2025 年 1 月 5 日,星期日 主显节 上午 8:00 ERNIE 和 CHRIS 作者:Deborah Lisberg PATRICIA ZELLER 和 DANIEL SMITH(用于治疗)作者:Jessica Zeller Aldrich 上午 10:00 ELINOR 和 SAVANAH KELLOGG 作者:Pat(姐妹)和 Mark GIfford 下午 6:00 GEORGE GOODMAN SR. 作者:John Goodman 2025 年 1 月 6 日,星期一圣。 André Bessette,宗教 7:00am CANIA SABIA(58 周年纪念日)由孩子们讲述 FLOYD 和 DOROTHY EDDY GIFFORD 的家人由 James Gifford 讲述 2025 年 1 月 7 日,星期二 圣雷蒙德·佩尼亚福特,牧师 7:00am CARLY 和 JAKE POHL(结婚 2 周年) 2025 年 1 月 8 日,星期三 9:00am NORMA PLOPPER 由家人讲述 2025 年 1 月 9 日,星期四 7:00am JIM OCUTO 由女儿 Kim 讲述 2025 年 1 月 10 日,星期五 7:00am IZZO 家族由他们的遗产讲述 2025 年 1 月 11 日,星期六 8:00am MSGR。 ROBERT A. CASEY (周年纪念) 下午 5:00 CHRIS HANSEN (生日) 作者:Sharon Hansen 2025 年 1 月 12 日星期日 主的洗礼 上午 8:00 KEVIN AUSTIN 作者:Ruth Ann Abel 上午 10:00 FRANK J. COSTELLO (周年纪念) 作者:Jack ad Joan Harper 下午 6:00 ALINDA GOODMAN 和孩子们 作者:John Goodman
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