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用 IL-15 和 IL-18 进行预处理可挽救冷冻保存后自然杀伤细胞免于颗粒酶 B 介导的细胞凋亡
基于人类自然杀伤 (NK) 细胞的疗法正在接受用于治疗各种癌症的评估，但冷冻保存会降低 NK 细胞的恢复率和功能，从而限制了其治疗可行性。使用针对 T 细胞优化的冷冻保存方案，我们发现约 75% 的 NK 细胞在解冻后 24 小时内死亡，其余细胞的细胞毒性降低。使用 CRISPR-Cas9 基因编辑和共聚焦显微镜，我们发现冷冻保存的 NK 细胞大部分通过由细胞毒性囊泡中颗粒酶 B 泄漏引发的细胞凋亡而死亡。在冷冻保存之前用白细胞介素 15 (IL-15) 和 IL-18 的组合对 NK 细胞进行预处理可将 NK 细胞恢复率提高到约 90-100%，并且与未冷冻保存的 NK 细胞相比，在播散性 Raji 细胞淋巴瘤异种移植模型中实现相同的肿瘤控制率。 IL-15 和 IL-18 诱导的保护机制包括两种机制：通过脱颗粒暂时降低细胞内颗粒酶 B 水平，以及诱导抗凋亡基因。
针对调整受体FN14的人类融合构建体的治疗疗效和安全性，并包含改良的颗粒b
抽象背景抗体 - 药物结合物是多种疾病的特殊且有用的治疗工具，特别是用于癌症治疗。我们先前表明，丝氨酸蛋白酶颗粒B（GRB），效应分子或T和B细胞与结合结构域的融合允许将细胞毒性有效载荷控制到靶细胞中。这些构建体的产生诱导了高分子聚集体的形成，并可能影响蛋白质的疗效和安全性。方法我们的实验室设计了一种新的FN14靶向融合构建体指定的GRB（C210A）-FC-IT4，其中包含改进的GRB有效载荷，以改善蛋白质生产和保留的生物学活性。我们评估了构建体的酶活性，以及体外的细胞毒性和内在化对靶细胞。我们还评估了体内药代动力学，功效和毒理学参数。结果GRB（C210A）-FC-IT4蛋白在针对FN14阳性人类癌细胞系进行测试时，在纳摩尔范围内表现出高亲和力和选择性细胞毒性。迅速内化到靶细胞，激活caspase级联反应并引起线粒体膜去极化。在小鼠中的药代动力学研究表明，GRB（C210A）-FC-IT4显示出具有快速初始清除率（T1/2α= 0.36小时）的血浆中的双指数清除率（T1/2α= 0.36小时），然后延长了末期末期 - 末期半寿命（T 1/2β= 35小时）。与单独使用媒介物治疗的对照组相比，对确定的皮下A549肺肿瘤建立的小鼠的治疗表现出令人印象深刻的长期肿瘤。带有MDA-MB-231的小鼠用媒介物或GRB（C210A）-FC-IT4构建体（QODX5）处理的MDA-MB-231原位肿瘤异种移植物显示出肿瘤的消退和长期（> 80天）抑制肿瘤生长。小鼠的GRB（C210A）-FC-IT4（100 mg/kg总剂量）的耐受性良好，导致肺癌患者衍生的异种移植模型的肿瘤负担显着减轻。毒性研究表明，治疗小鼠中天冬氨酸转移酶，丙氨酸转移酶或乳酸脱氢酶没有统计学上的显着变化。对经过治疗的小鼠的组织的组织病理学分析尚未证明任何与药物有关的变化。