Promoter 35s from the cauliflower mosaic virus (CAMV P35S) Promoter 35s from the leper mosaic virus (FMV P35S) Promoter NOS NOS from Agrobacterium Tumefaciens (PNOS) Terminator nose from AGROBACTERIUM Tumefaciens (tnos) Hygroscopicus Gen Barnase from Bacillus Amyloliquefaciens Gen EPSPS from Agrobacterium Tumefaciens, Szczep CP4 Gen GOX with Ochrobactrum Anthropi Gen Pat from Streptomyces Viridochromogenes NPTII gene from Escherichia coli Gen Cry1AB/AC Construct Promoter 35s from the Cauliflower mosaic病毒/Gen PAT与链霉菌的病毒蛋白色,CAMV p35s/pat)构造CTP2-CP4 EPSPPNOS/NPTIA构建体CAMV
然而,由于该系统最初是为了更具体地针对已正式进入欧盟授权程序的转基因事件而开发的,因此在检测欧盟未经授权的转基因生物方面可能会遇到一些问题。首先,如果转基因生物不含有 qPCR 筛选分析中专门针对的转基因元件,则无法检测到。然而,最近的估计表明,当同时使用筛选标记 p35S 和 tNOS 时,这种情况发生在不到 10% 的欧盟未经授权的转基因生物中。10,12,13 其次,如果欧盟未经授权的转基因生物含有至少一种 qPCR 筛选分析针对的转基因元件,则可能出现两种情况。一方面,当样本由欧盟授权和未授权的转基因生物组成,且这些生物具有一些共同的转基因元件,例如 p35S 和 tNOS,qPCR 筛选试验通过鉴定欧盟授权的转基因生物而得出的阳性结果并不能保证不存在欧盟未授权的转基因生物。另一方面,如果无法在观察到的 qPCR 筛选信号与欧盟授权的转基因生物列表之间建立联系,则只能怀疑存在欧盟未授权的转基因生物。此外,qPCR 事件特异性方法通常不适用于欧盟未授权的转基因生物。4,10
图1的遗传转化效率(ET)线。10个选定的F8线被用作202材料,用于转化Pant1ox构建体。从幼苗中切出7天大的子叶,并通过pant1ox构建体转化203个子叶,然后在卡纳米霉素选择培养基上生长。在一个实验中使用了至少30个204个外植体。进行了三个生物学重复。pant1ox 205构造。kanr:kanamycin表达录音带(pnos-nptii-tocs),p35s:CAMV35S长启动器。b 206 slant1在番茄共叶中的表达(代表性图片)。上图:转换后21 207天的Slant1表达(DAT)。紫色箭头指示紫色斑点。下面板:紫色芽(左)208和水果(右)。c转换效率。y轴显示平均每209个外植体的紫色斑点。 X轴表示在本实验中测试的番茄F8线。数据表示平均值±SD。n = 3。210星号表示ET线与对照HK之间的显着差异(P <0.05),为211由t检验确定。212
