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澳大利亚养殖的濒死斑节对虾中支原体的分离、特性和 DNA 分析

摘要。在澳大利亚昆士兰州北部爆发的中期死亡综合症期间，对 24 只濒死对虾进行了调查，首次从中培养出 14 株支原体分离株。从对虾的鳃附属物、大脑和眼睛中分离出支原体。支原体在含有 0.5 至 3.0% 氯化钠和 20% 胎牛血清的改良 Frey 培养基中，在有或没有 CO2 的情况下在 20 至 37°C 之间生长。在 37°C 和 5% CO2 下观察到最佳生长。所有菌株都经过大小过滤和克隆，并将它们的形态、生化和生物分子特征与以前描述的支原体种的特征进行了比较。结果表明，这些菌株属于 2 个新种，为其指定了临时名称支原体 P1 (MPI) 和支原体 P2 (MP2)。两种支原体都能发酵大多数测试的碳水化合物，但不能水解精氨酸和尿素。MP1 产生薄膜和斑点，具有高磷酸酶活性，但 MP2 不会产生薄膜或斑点，也没有磷酸酶活性。两种物种都能裂解绵羊红细胞。从 MP1 DNA 中制备基因组文库（Mbol 消化）并克隆到 pUC19 中。使用从纯化的 MPI 制备的探针进行菌落杂交，以识别感兴趣的菌落。通过用 EcoRI 和 HindIII 消化从重组质粒中回收 MP1 DNA 片段。该 DNA 用于制备随机引物探针，用于与来自 MP1、MP2、M. bovis、M. dispar、M. agalactiae、M. bovjyenitalium、M. ovipneumonjae、支原体组 7、M. aryinini 和属于不同属的细菌的固定 DNA 进行点印迹杂交分析。该探针仅与来自 MP1 的基因组 DNA 发生反应。为了进一步提高灵敏度，设计了一种 MP1 特异性聚合酶链反应 (PCR) 检测方法，并产生了 254 bp 扩增子，可将 MP1 与所有其他测试的支原体 DNA 区分开来。使用 DNA 探针和 PCR 检测方法，从患病虾中分离出的大多数支原体可指定为菌株 MP1 (11/14，-80%)。