摘要 动机:CRISPR/Cas9 技术已被开发为最有效和最广泛使用的基因组编辑工具,用于修改众多植物的基因组,其中双链 DNA 中的 cas9 切割由单个向导 RNA(sgRNA)中包含的 20 个核苷酸序列驱动。然而,使用 CRISPR/Cas9 同时编辑多个目标仍然是该领域的技术挑战(Ma 等人,2014 年)。方法:在本研究中,使用 Golden Gate Assembly 克隆策略生成多个 CRISPR/cas9 编辑结构以用于蓖麻植物。模块化克隆系统使用 IIS 型酶在其识别位点外切割,从而允许有效组装具有兼容突出端的 DNA 片段,从而同时促进多个序列的正确取向(Engler 等人,2014 年)。我们的主要目标是获得一种遗传构建体,允许在同一个质粒载体中表达两个 sgRNA 和 cas9 核酸酶,以便通过农杆菌感染转化蓖麻。选择了两个针对 FAH12 蓖麻羟化酶的 CRISPR 靶标以避免可能的脱靶。这些靶标包含在 sgRNA 中并克隆到 0 级质粒中,每个质粒两侧都有 BsaI 酶的限制位点。Golden Gate 1 级反应包括几个 BsaI 消化和连接循环,将 U6 启动子与两个 sgRNA 分别组装到 1 级质粒中,两侧都有 BpiI 限制位点。同时,cas9 酶在双强 35S 启动子的控制下克隆,随后是来自 0 级质粒的胭脂碱合酶 (nosT) 终止子,包括这些元素,克隆到另一个 1 级质粒中,两侧也有 BpiI 限制位点。然后,用 BpiI 消化所有 1 级元件(U6-sgRNA1、U6-sgRNA2、2x35S-cas9-nosT)时,会出现兼容的突出端,这些突出端可以以正确的顺序和方向组装成 2 级结构。最终结果是 2 级质粒,其中包括 FAH12 羟化酶的 CRISPR/cas9 多重基因组编辑所需的所有元件。该构建体将转移到农杆菌中,以便以后进行蓖麻胚转化。
该项目包括在道路的两侧建造一条新的两车道铺装道路。建造拟议的道路将需要在路径上进行分级和压实土壤,并在道路的两侧永久铺设沥青道路和混凝土多用途路径。拟议的道路将导致BPA行内约8,000平方英尺(0.18英亩)的永久影响。将沿拟议道路的东南侧放置一个联合公用沟槽,导致400平方英尺的临时撞击。公用设施的沟槽将大约四英尺深,四英尺宽,导致400平方英尺的临时撞击。将在拟议道路的北部建造一个雨水设施,其中大部分设施都在BPA费用的行之外建造。将在该行中建造约7,000平方英尺(0.16英亩),最大挖掘深度为6英尺。雨水设施需要从新的不透水表面处理雨水径流。分级和挖掘的土壤将用于回填和/或处置异地。该项目需要使用自卸车,挖掘机,平板拖车,现成的混合卡车和沥青铺路设备。调查结果:根据《能源部(DOE)国家环境政策法》(NEPA)条例的第1021.410(b)条(57 FR 15144,4月,24,1992,在61 FR 36221-36243,Jul。9,1996; 61 FR 64608,1996年12月6日,76 FR 63764,2011年11月14日),BPA确定了拟议的诉讼:
u测试或卡方测试,适当地。配对的比较是使用配对的t检验或Wilcoxon签名的等级测试进行的。使用链式方程方法的多个插补,具有1 0个估算数据库的。 关于丢失变量的数据在线补充表S 1中显示。 在COX回归分析中研究了所有新发心力衰竭以及HFREF和HFPEF的预定符,以及HFREF和HFPEF。 单变量COX回归,此后进行p值<0。的变量 1包括在多元分析中。 然后执行向后逐步回归以制作最终的预测模型。 两侧p值为0.05被认为具有统计学意义。 使用STATA版本1 7.0 SE(美国德克萨斯州大学车站)进行统计分析。。关于丢失变量的数据在线补充表S 1中显示。在COX回归分析中研究了所有新发心力衰竭以及HFREF和HFPEF的预定符,以及HFREF和HFPEF。单变量COX回归,此后进行p值<0。1包括在多元分析中。向后逐步回归以制作最终的预测模型。两侧p值为0.05被认为具有统计学意义。使用STATA版本1 7.0 SE(美国德克萨斯州大学车站)进行统计分析。
2.0 NPK肥料MOMBASA CS农业和牲畜开发部Mithika Linturi在MOMBASA的肯尼亚港口管理局的NPK肥料两侧,这标志着通过KTDA购买的第一个通过KTDA购买的肥料来支持茶农。 政府热衷于通过将肥料提供到工厂水平来支持茶农。 该肥料将在港口接收,然后通过SGR分配给农民,并在最近的茶购买中心接触。 第二货运将在11月中旬左右到达。 正统茶将由于市场上的良好价格而增加农民的收入,并且政府渴望确保农民准备在短雨期间种植茶。2.0 NPK肥料MOMBASA CS农业和牲畜开发部Mithika Linturi在MOMBASA的肯尼亚港口管理局的NPK肥料两侧,这标志着通过KTDA购买的第一个通过KTDA购买的肥料来支持茶农。政府热衷于通过将肥料提供到工厂水平来支持茶农。该肥料将在港口接收,然后通过SGR分配给农民,并在最近的茶购买中心接触。第二货运将在11月中旬左右到达。正统茶将由于市场上的良好价格而增加农民的收入,并且政府渴望确保农民准备在短雨期间种植茶。
联络通道是地铁隧道内常见结构,为事故隧道人员快速疏散至对面安全隧道提供通道。地铁隧道联络通道通风是通过隧道两侧通风系统的协同作用实现的。同时,列车堵塞、车厢内热量积聚等因素也会影响地铁隧道内烟气运动,前者需要进一步细化,以预测防止烟气进入地铁隧道联络通道所需的临界速度和驱动力。通过一维理论分析和全尺寸冷烟实验,研究了两侧隧道风机送风参数与联络通道通风速度之间的关系,提出了隧道联络通道烟气控制对侧安全隧道风机选型计算模型。通过数值模拟,量化了列车位置、火灾热释放速率和主隧道通风速度对联络通道临界速度的影响。结果表明:畅通条件下联络通道内临界速度大于阻塞条件下的临界速度,且临界速度在畅通和阻塞条件下均表现出相对稳定性。在无量纲分析的基础上,提出了一种分段函数来预测隧道联络通道内临界速度。研究结果可为类似结构的隧道防火防烟措施的实施提供有益指导。
强大的TopCon细胞本质上是敏感的 - 因此,在我们最先进的制造过程中,我们用热冰的玻璃将它们包裹在两侧。这使我们的玻璃玻璃模块比传统的玻璃框模块更加健壮。有了这种保护,由冰雹,恶劣的天气或雪引起的机械应力不会导致微裂纹,并且细胞通常不容易受到损害。蒸汽和其他高度侵略性剂(例如盐喷雾剂或氨)也无法穿透玻璃。并且由于玻璃的实际年龄并不像其他材料那样年龄,所以即使是时间本身也很难造成损失。玻璃衬里模块
EPR 提供特别有效的物理保护,防止极端外部危害。反应堆厂房 (1)、乏燃料厂房 (2) 和四座安全厂房 (3) 中的两座以及控制室 (4) 均受到钢筋混凝土外壳 (5) 的保护,其厚度足以承受军用或商用飞机的高速撞击。另外两座安全厂房位于反应堆厂房的相对两侧,因此只有其中一座因飞机坠毁而受损,不会造成任何安全后果。同样,用于应急电力供应的柴油发电机位于两座不同的厂房 (6) 中,也受到地理隔离的保护。
g,靶向必需(红色)和非必需(蓝色)基因(n = 4个GRNA)的单个GRNA的归一化耗竭。钻石表示GRNA的中位数。中间95%的非靶向(NT)GRNA的分布以灰色显示。箱图表明所有靶向必不可少的GRNA(平均DEPMAP计时<-1,n = 1,095个细胞系)(红色)和非必需(Chronos> -0.25)(蓝色)基因(蓝色)基因和HAP1细胞中的基因,并使用两侧Mann -Whitney U Test确定了显着性。
DC 类型 .如果市交通运输管理局认为没有必要,则有权禁止或限制任何车辆在任何一条街道的一侧或两侧停车,或在该路线的某个部分设置一个通道或处理程序,或任何特殊的程序,并在其相邻的街道上通过临时标志的纠正或放置提供适合这种限制。当在游行、游行过程中,或特殊场合竖立或放置此类标志时,任何违反此类标志的车辆停车或离开道路都是违法的;
•认证值是通过实验室结果不高的分析物的平均分析物的平均值来确定的,或者对具有较高实验室结果的人的中位数中位数•标准偏差是测定分析物的分布的度量,包括实验室间偏见,方法不确定性和物质同质性不确定性。使用相同分析方法的确定的约95%预计将在认证值的两侧两侧之间。标准偏差是根据经过验证的实验室数据数据计算得出的,较少的实验室和个体确定。•置信区间(CI)是对95%置信区间材料中真实(不可知的)分析物浓度的估计。例如,可以解释95%CI,因为有0.95的概率是真实值在认证值±CI之间。间隔越窄,认证值越精确。95%CI不应用于确定质量控制门。•标准不确定性(U CRM)是表征和同质性研究的差异之和。表征的不确定性来自实验室平均值的标准偏差除以实验室数量的平方根。材料同质性(U HOM)的不确定性是根据ISO指南35。根据ISO指南35。•覆盖率因子(k)是两个尾部测试的学生T分布值,为95%。•扩展的不确定性(U CRM)是覆盖率因子和标准不确定性的乘积,代表批处理的真正不可知的分析物浓度的95%置信区间,并结合了单个样本的偏见。