XiaoMi-AI文件搜索系统
World File Search System二甲基亚砜
有效扩增克隆插入片段和人类基因组 DNA 中的长靶标
摘要 我们利用聚合酶链式反应 (PCR) 从人类基因组 DNA 中扩增出长达 22 kb 的 3-珠蛋白基因簇，并从噬菌体 A DNA 中扩增出长达 42 kb 的 3-珠蛋白基因簇。我们还直接从重组 A 斑块中扩增出 91 个 9-23 kb 的人类基因组插入片段。为此，我们增加了 pH 值，添加了甘油和二甲基亚砜，减少了变性时间，增加了延伸时间，并使用了具有 3'-至-5'-外切酶或“校对”活性的次级热稳定 DNA 聚合酶。我们的“长 PCR”方案通过使用较低水平的聚合酶和温度和盐条件进行特定引物退火，保持了基因组 DNA 中目标所需的特异性。扩增10-40 kb DNA序列的能力将为基因组图谱和测序带来PCR的速度和简便性，并促进分子遗传学研究。
90 Å RP-酰胺，2.7 µm 色谱柱保养和使用表
色谱柱保养 为最大程度延长色谱柱寿命，请确保样品和流动相不含颗粒。强烈建议在样品注射器和色谱柱之间使用保护柱或孔隙率为 0.5 微米的在线过滤器。HALO ® 90 Å RP-Amide 色谱柱上的 2 微米孔隙率筛板比其他小颗粒色谱柱通常使用的 0.5 微米筛板更不容易堵塞。如果色谱柱的工作压力突然超过正常水平，可以尝试反转色谱柱的流动方向以去除入口筛板上的碎屑。要从色谱柱中去除强保留物质，请用非常强的溶剂（例如所用流动相的 100% 有机成分）反向冲洗色谱柱。二氯甲烷和甲醇的混合物（95/5 v/v）通常可以有效完成此任务。极端情况下可能需要使用非常强的溶剂，例如二甲基甲酰胺 (DMF) 或二甲基亚砜 (DMSO)。
联合使用 Wnt 抑制剂和查尔酮复合物靶向肺癌细胞中的上皮-间质转化 (EMT) 通路
苯并呋喃取代的查耳酮衍生物；复合物 1 [(4) ‐ ((1E) ‐ 3 ‐ (1) ‐ 苯并呋喃 ‐ 2 ‐ 基) ‐ 3 ‐ 氧代丙 ‐ 1 ‐ 烯 ‐ 1 ‐ 基] ‐ 2 甲氧基苯基氯乙酸酯) 和复合物 2 [3 ‐ [(1E) ‐ 3 ‐ (1 ‐ 苯并呋喃 ‐ 2 ‐ 基) ‐ 3 ‐ 氧代丙 ‐ 1 ‐ 烯 ‐ 1 ‐ 基)] 苯基氯乙酸酯) 被合成 16,17 并进行了表征 (Alioglu 等人，已提交)。在二甲基亚砜 (DMSO) 中制备查耳酮复合物 (复合物 1 和 2) (50 mM) 和氯硝柳胺 (20 mM) 的储备浓度。复合物浓缩液中的最终 DMSO 浓度确定为 0.2% v/v，文献报道该浓度无毒。18 将复合物的储备液分装并储存在 −20°C 下。Niclosamide 购自 Sigma（目录号：N3510；Sigma-Aldrich）。碘化丙啶 (PI) 购自市售（Sigma-Aldrich）。Hoechst 染料 33342 来自 Enzo Life Sciences。
不同样品制备方法对人体髂胫束力学性能的影响
在生物力学测试之前，通常会冷冻新鲜的人体组织样本，以抑制初始分解过程并实现组织采集与生物力学测试的时间独立性。本研究的目的是比较人类髂胫束 (IT) 的新鲜组织样本与从同一 IT 中采集的新鲜冷冻样本以及在冷冻前用不同浓度的二甲基亚砜 (DMSO) 改性的样本的机械性能。所有样品都经过部分塑化，并使用单轴拉伸试验装置进行破坏性拉伸试验。改进了实验室中已经建立的塑化技术，以改善样品的夹紧行为。材料失效是由承重胶原纤维束的逐渐断裂引起的。与我们的预期相反，新鲜和新鲜冷冻样本的拉伸强度之间没有发现显著差异。与新鲜冷冻样品相比，添加 1 wt% DMSO 不会增加拉伸强度；添加 10 wt% DMSO 甚至导致拉伸强度降低。根据我们的研究结果，使用简单的新鲜冷冻样品来确定拉伸强度是可行的；然而，应使用新鲜样品来生成完整的性能曲线。
Plantamajoside 通过抑制 p38MAPK 和 AKT 磷酸化来调节肺癌的增殖、干细胞和凋亡
植物皂苷（PMS）购自成都慕斯特生物技术有限公司（四川，中国），纯度≥98％。A549、95D、SPC-A1、H460和H292细胞购自美国典型培养物保藏中心（ATCC；美国弗吉尼亚州马纳萨斯）。RPMI-1640培养基购自HyClone公司（Cat#SH30809.01；美国犹他州洛根）。胎牛血清（ATCC 30-2020）购自赛默飞世尔科技公司（美国马萨诸塞州）。二甲基亚砜（DMSO）、1-溴-3-氯丙烷、异丙醇、乙醇、顺铂（DDP）和其他溶剂购自Sigma公司（美国密苏里州圣路易斯）。细胞计数试剂盒-8 (CCK-8)、0.25%胰蛋白酶、0.01 M PBS (粉末，pH7.2～7.4)、1%多聚甲醛、线粒体膜电位测定试剂盒（含JC-1）和100×青霉素-链霉素溶液均购自北京索莱宝科技有限公司（北京，中国）。B27、表皮生长因子 (EGF) 和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF) 均购自 Invitrogen 公司（CA，美国）。一抗，包括抗 Caspas-3 (Cat#ab13847)、抗 Caspas-9 (Cat#ab32539)、抗 SOX2 (Cat#ab93689)、抗 CD44 (Cat#ab216647)、抗
DCC-3084 是一种 RAF 二聚体抑制剂，可广泛抑制 BRAF I、II、III 类、BRAF 融合和 RAS 驱动的实体瘤，从而导致
ARAF，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 A–快速加速纤维肉瘤；ATP，三磷酸腺苷；AUC，浓度时间曲线下面积；AUC 0–last，从时间 0 到最后测量浓度的 AUC；BCRP，乳腺癌耐药蛋白转运蛋白；BID，每日两次；BRAF，v-Raf 鼠肉瘤病毒致癌基因同源物 B1；CNS，中枢神经系统；CRAF，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 C-Raf；CSF，脑脊液；DFG，天冬氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸；DMSO，二甲基亚砜；ELISA，酶联免疫吸附试验；ERK，细胞外信号调节激酶；GTP，三磷酸鸟苷；hrs，小时；IC 50，半数最大抑制浓度； Kp uu，非结合分配系数（游离脑浓度/游离血浆浓度）；KRAS，Kirsten RAS；M，摩尔；MDR1，多药耐药突变转运体；MEK，丝裂原活化蛋白激酶激酶；NRAS，神经母细胞瘤 RAS；PERK，蛋白激酶 R 样内质网激酶；PK，药代动力学；po，口服；pRSK，磷酸化 RSK；QD，每日一次；RAF，快速加速性纤维肉瘤；RAS，大鼠肉瘤小 GTPase 蛋白；RSK，核糖体 s6 激酶；SEM，均值标准误差；t 1/2，半衰期；TGI，肿瘤生长抑制；T. sol，热力学溶解度；WT，野生型。
管理洁净室风险
（µg/cm 2 /min） 1-丁醇 (99) 192.1 1.2 179 3.2 丙烯酰胺 (40) >480 0.07 >480 0.01 氯仿 (70) 0 — 0 — 柠檬酸 (70) >480 <1.0 >480 <1.0 柠檬酸一水合物 (30) >480 N/A >480 N/A 环己烷 (99.7) 52.5 9.6 >480 0.8 二甲基甲酰胺 (99) 0 — 0 — 二甲基亚砜 (99) 5.5 — 10.6 — 乙醇 (70) 27.6 16 43.8 11.6 乙醇 (99) 18.7 5.20E+01 32.1 73.8 乙锭溴化物 (1) >480 N/A >480 N/A 甲醛 (37) >480 N/A >480 N/A 戊二醛 (50) >480 N/A >480 N/A 一水合肼 (55) >480 0.08 >480 N/A 盐酸 (30) >480 N/A >480 N/A 过氧化氢 (30) 36 1.4 78.7 0.8 异丙醇 (70) 194 1.7 185 2.6 异丙醇 (99) 361 1.2 280.2 1.4 Klercide 70/30 IPA (N/A) 141 2 163.7 2.2 Klericide 中性清洁剂 (N/A) >480 N/A >480 N/A Klericide 杀孢子剂活性氯 (N/A) >480 N/A >480 N/A 甲醇 (99) 1.2 57.6 9 50.7 硝酸 (65) 15 8.90E+04 25.4 3.60E+04 过氧乙酸 (5) >480 N/A >480 N/A 磷酸 (70) >480 <1.0 >480 <1.0 氢氧化钠 (50) >480 N/A >480 N/A 次氯酸钠 (10-13%) >480 N/A >480 N/A Spor-Klenz (N/A) >480 0.0043 >480 N/A 硫酸 (50) >480 N/A >480 N/A
电子补充信息β-内酰胺酶...
7-氨基-3-氯甲基-3-头孢烯-4-羧酸对甲氧基苄酯盐酸盐 (ACLE) 购自 AK Scientific (加利福尼亚州联合城)。4-硝基苯硫酚 (NBT) 和 3-马来酰亚胺基丙酸购自 TCI Chemicals (日本东京)。头孢噻吩购自 P212121, LLC (马萨诸塞州波士顿)。氘代二甲基亚砜 (DMSO-d 6 ) 购自 Cambridge Isotope Laboratories (马萨诸塞州安多弗)。三乙胺 (TEA)、4-甲基吗啉 (NMM)、无水二氯甲烷 (DCM)、无水二甲基甲酰胺 (DMF)、己烷、乙醚、乙酸乙酯、薄层色谱法 (TLC) 硅胶 60 玻璃板、无水磷酸氢二钠、无水磷酸二氢钠、CENTA、二甲基亚砜 (DMSO)、三氟乙酸 (TFA)、苯甲醚、硫醇官能化的 4 臂聚乙二醇 (4 臂-PEG-SH; 20 kDa)、来自蜡样芽孢杆菌的 β L (β L-BC; cat.# P0389, 28 kDa, 2817.8 U/mg 蛋白, 4.72% 蛋白)、来自铜绿假单胞菌的 β L (β L-PA; cat.# L6170, 30 kDa, 1080 U/mg 蛋白，1% 蛋白）、来自阴沟肠杆菌的 β L（β L-EC；目录号 P4524，20-26 kDa，0.37 U/mg 蛋白，56.45% 蛋白）、来自溶组织梭菌的胶原酶、磷酸盐缓冲盐水 (PBS)、硝酸钠、阳离子调整的 M¨uller-Hinton 肉汤 (CMHB)、α-氰基-4-羟基肉桂酸、1-[双 (二甲氨基) 亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶 3-氧化物六氟磷酸盐 (HATU)、N,N-二异丙基乙胺 (DIPEA) 和盐酸 (HCl) 均购自 Millipore Sigma（密苏里州圣路易斯）。甲醇、硅胶、胰蛋白酶大豆肉汤 (TSB) 和 SYLGARD 184 硅胶弹性体试剂盒购自 Thermo Fisher Scientific (马萨诸塞州沃尔瑟姆)。甲氧基聚乙二醇硫醇 (mPEG-硫醇；1.7 kDa) 购自 Laysan Bio, Inc. (阿拉巴马州阿拉伯)。金黄色葡萄球菌菌株 25923 和 29213、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA) MW2、蜡样芽孢杆菌 13061、大肠杆菌 25922 和阴沟肠杆菌 13047 购自 ATCC (弗吉尼亚州马纳萨斯)。铜绿假单胞菌 PA01 由沃尔特里德陆军研究所 (马里兰州银泉) 慷慨捐赠。大肠杆菌 DH5-α 购自 Life Technologies (加利福尼亚州卡尔斯巴德)。双马来酰亚胺-PEG 3（mal-PEG-mal，494.5 Da）购自 BroadPharm（加利福尼亚州圣地亚哥）。Repligen Biotech 纤维素酯 500-1000 Da 分子量截留 (MWCO) 透析管购自 Spectrum Labs Inc.（加利福尼亚州兰乔多明格斯）。超高纯度氮气（99.999%）购自 Airgas（罗德岛州沃里克）。所有实验均采用超纯去离子水（18.2 MΩ·cm，Millipore Sigma，马萨诸塞州比勒里卡）。本研究中提到的室温 (RT) 约为 23 ◦ C。
研究论文 开放获取 CRISPR/Cas9 介导的靶向
向日葵 ( Helianthus annuus L.) 是世界上最重要的油料作物之一，用途广泛 (Hu 等，2010)。根据脂肪酸组成，向日葵可分为高油酸 (85%)、中油酸 (60-65%) 和亚油酸 (低油酸)。世界对高油酸向日葵的生产和消费需求不断增加，因为高油酸向日葵基因型在工业用途和人类健康方面具有各种优势 (Kaya 等，2007)。向日葵的油组成可以通过对脂肪酸去饱和酶 2 ( FAD2 ) 基因进行遗传修饰来改变，这种修饰促进油酸到亚油酸的生物转化。使用化学诱变剂二甲基亚砜 (DMSO) 可将 Pervenets 向日葵品种的油酸组成提高至 75%（Soldatov 等人，1976 年）。许多衍生自突变体 Pervenets 的自交系的油酸组成高达 90%（Fernandez-Martinez 等人，1993 年；Miller 等人，1987 年；Zambelli 等人，2015 年）。此外，Vick & Miller（1996 年）报道了通过使用乙基甲烷磺酸盐 (EMS) 处理来开发高油酸和中油酸向日葵突变体。同样，Leon 等人（2013b）也进行了 EMS 处理以开发高油酸突变体。该处理诱导了点突变，导致氨基酸替换和过早终止密码子（Leon 等人，2013b）。另一方面，FAD2-1基因的重复导致基因转录沉默，从而导致油酸的积累（Lacombe等，2009；Martinez-Rivas等，2001）。此外，Schuppert等（2006）也报道了高油酸突变体向日葵是通过FAD2-1基因的重复和向日葵基因型中油酰磷脂酰胆碱去饱和酶的诱导而产生的。
调节 Linothele fallax 的表面特性 ...
摘要：使用定量峰值力测量原子力显微镜和带能量色散光谱的扫描电子显微镜对 Linothele fallax (Mello-Leita ̃ o) (L. fallax) 蜘蛛网进行了研究，这种蜘蛛网是一种很有潜力的组织工程材料，在天然状态下和用不同蛋白质亲和力的溶剂（即水、乙醇和二甲基亚砜 (DMSO)）处理后都进行了研究。天然的 L. fallax 丝线被球状物体密集覆盖，这些球状物体构成了它们不可分割的部分。根据溶剂的不同，处理 L. fallax 会改变其外观。在使用水和乙醇的情况下，变化很小。相反，DMSO 几乎可以去除小球并将丝线融合成致密的带状。此外，溶剂处理会影响丝线表面的化学性质，改变其粘附性，从而改变其生物相容性和细胞粘附特性。另一方面，溶剂处理的网状材料对不同类型的生物物质的接触效果存在很大差异。富含蛋白质的物质在用疏水性更强的溶剂处理的蜘蛛丝包裹时，可以更好地控制湿度。然而，碳水化合物植物材料在用天然蜘蛛丝包裹时会保留更多的水分。使用核磁共振 (NMR) 和液相色谱-质谱技术分析了用溶剂产生的提取物，发现不饱和脂肪酸是代表性的吸附物质，这可以解释蜘蛛丝的温和抗菌作用。提取的代谢物对于不同的溶剂是相似的，这意味着小球不是“溶解”的，而是“融合”到丝线本身中，据说是蛋白质链的卷结。■ 简介