一旦 Cas9/sgRNA RNP 复合物通过囊泡递送并恢复细胞,就必须分离单细胞并将其扩增成克隆细胞系,以便分离和筛选目标基因型(图 3)。传统上,从作为菌落生长和传代的 hiPS 细胞建立克隆群效率低、困难且耗时;通常会导致细胞死亡或过早分化。然而,Cellartis iPSC CRISPR/Cas9 囊泡和单细胞克隆系统的细胞培养组件包含一个确定的培养系统(Cellartis DEF-CS™ 培养系统,由基础培养基、涂层和添加剂组成),可有效进行单细胞克隆和扩增编辑的 hiPSC 克隆。 DEF-CS 培养系统是一种基于单层的培养系统,它通过允许单细胞传代、促进接种单细胞的存活和进一步扩增以及保留这些细胞的多能性,克服了基于菌落的培养所面临的挑战。
仅供研究使用。不可用于诊断程序。© 2024 Thermo Fisher Scientific Inc. 保留所有权利。除非另有说明,所有商标均为 Thermo Fisher Scientific 及其子公司的财产。Amersham 和 Typhoon 是 Cytiva 的商标。SnapGene 是 GSL Biotech LLC 的商标。Gibson Assembly 是 Telesis Bio, Inc. 的商标,经许可和授权使用。APN-9114086 1024
未经同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可不得重复使用。此预印本的版权所有者(此版本于 2024 年 5 月 2 日发布。;https://doi.org/10.1101/2024.02.27.582389 doi:bioRxiv preprint
2023在格罗宁根大学2020年至2021年获得大学教学资格(UTQ)参加了虚拟会议(无介绍):生物设计会议2020&2021,CINBI 2020,世界CRISPR日,RNA 2020,RNA 2020,EFB生物催化日开放日。06/2020 Three-day course in analysis of bulk RNA-seq data with R , MRC LMB 11/2019 Four-day course in Numeric Python and Deep Neural Network Basics , MRC LMB 05/2016 Five-day training school systems biocatalysis , COST action, Siena, Italy 2015 – 2016 RUG: 1-day workshop in numerical python , 2-day course on protein mass光谱,为期5天的大师班计算方法,用于酶的发现与工程
图 1. BioXp 上的 Golden Gate 组装。Golden Gate 组装概览。要克隆的插入 DNA 带有侧翼 GG 酶识别位点(BsaI 和/或 BsmBI),可以作为合成基因片段或 PCR 扩增子(1A)和(1B)或预克隆载体格式(1C)获取。用户可以输入任何具有兼容 GG 突出端(以粉色和紫色显示)的所需目标载体(2)。用户在 BioXp 3250 上输入 96 孔板和 GG 克隆条(4)。GG 克隆产品在 BioXp 运行后作为输出交付(5)。
CEPT 补充剂可促进健康单细胞克隆的建立。使用补充有 CEPT 混合物的培养基生成并接种微流体平台的克隆细胞系显示出与亲本系相似的增殖率和对单细胞解离的敏感性(图 3)。新的克隆系在培养中保持未分化状态,表达预期的多能性标记,并通过定向分化方法展示多能性。使用 CEPT 补充剂生成的克隆细胞系保持正常核型,在基因组癌症热点处未检测到染色体异常或 p53 突变。
使用悬垂引物在PCR产物的末端添加悬垂序列来扩增感兴趣的序列。悬垂序列的长度取决于用于吉布森组件的商业套件。如果使用了来自新英格兰Biolabs(NEB)的HIFI组装主混合物,则足够的20个碱基对。
量子密码系统的密码分析通常涉及寻找针对底层协议的最佳对抗攻击策略。量子攻击建模的核心原则通常归结为对手克隆未知量子态并由此提取有意义的秘密信息的能力。由于电路深度较大或在许多情况下未知,显式最佳攻击策略通常需要大量计算资源。在这里,我们介绍了变分量子克隆 (VarQlone),这是一种基于量子机器学习的密码分析算法,它允许对手使用混合经典量子技术训练的短深度量子电路获得最佳近似克隆策略。该算法包含具有理论保证的具有操作意义的成本函数、量子电路结构学习和基于梯度下降的优化。我们的方法能够端到端发现硬件高效的量子电路来克隆特定的量子态系列,我们在 Rigetti Aspen 量子硬件上的实现中展示了这一点。我们将这些结果与量子密码原语联系起来,并推导出由 VarQlone 促进的显式攻击。我们期望量子机器学习将成为改进当前和未来量子加密协议攻击的资源。
通过下一代测序分析不同的肿瘤区域可以评估肿瘤内遗传异质性 (ITGH),这种现象已在某些肿瘤类型中得到广泛研究,但在子宫内膜癌 (EC) 中的研究较少。在本研究中,我们试图使用全外显子组测序来表征 9 种不同 EC 的空间和时间异质性,并对所分析的 42 个原发性肿瘤区域和 30 个转移性样本进行靶向测序验证。此外,通过比较基因组杂交阵列评估了浆液性癌的拷贝数变异。从通过全外显子组测序鉴定的体细胞突变中,有 532 个通过靶向测序验证。基于这些数据,为每例重建的系统发育树使我们能够确定肿瘤的进化并将其与肿瘤进展、预后和复发性疾病的存在相关联。此外,我们研究了不明确的 EC 的遗传图谱,并使用获得的分子谱来指导为该患者选择潜在的个性化疗法,随后通过患者来源的异种移植模型的临床前测试验证了该疗法。总体而言,我们的研究揭示了分析不同肿瘤区域对解读 EC 中的 ITGH 的影响,这有助于做出最佳治疗决策。
HKU4相关的冠状病毒属于与中东呼吸道综合征冠状病毒(MERS-COV)的同一Merbecovirus子属,该疾病导致死亡率超过30%的人类的严重呼吸道疾病。与HKU4相关的冠状病毒和MERS-COV之间的高遗传相似性使它们成为建模潜在的人畜共患溢出场景的有吸引力的研究主题。在这项研究中,我们确定了一种新型的冠状病毒污染农业水稻RNA测序数据集。2020年初,惠宗农业大学将数据集存放在NCBI中。我们能够组装出新型HKU4相关Merbecovirus的完整病毒基因组。组装的基因组为98.38%,与最接近已知的完整基因组序列tylonycteris pachypus bat bat孤立BTTP-GX2012相同。在使用计算机建模中,我们表明,新型HKU4相关的冠状病毒尖峰蛋白可能与MERS-COV使用的受体(DPP4)结合。我们进一步表明,新型HKU4相关的冠状病毒基因组已插入与先前发表的冠状病毒感染性克隆一致的形式中的细菌人造染色体。此外,我们发现了MERS-COV参考菌株的尖峰基因的几乎完整的读取覆盖率,并确定数据集中可能存在HKU4相关的嵌合体。