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翠鸟柔性自动隔离病毒DNA/RNA的方案| neb
将打靶特定人源基因的 Cas9 和 sgRNA 转染到 HEK293 细胞。转染所用的质粒 DNA 上含有 表达带双端核定位序列 （ NLS ）的 Cas9 及 sgRNA 的表达框，通过 TransIT-X2 (Mirus) 转染 试剂进行转染。转染所用的 Cas9 mRNA 进行了假尿苷和 5- 甲基胞嘧啶修饰且带有双端 核定位序列，使用 transIT-mRNA 转染试剂将 sgRNA 和 mRNA 共转染。 Cas9 RNPs 使用脂质 体 RNAiMAX ( Life Technologies ) 进行反向转染， RNP 的终浓度为 10 nmol 。 Cas9 蛋白上不含 核定位序列。 EnGen Cas9 含有双端核定位序列。编辑效率通过 T7E1 实验进行分析，结果 以修饰百分比进行统计。
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将打靶特定人源基因的 Cas9 和 sgRNA 转染到 HEK293 细胞。转染所用的质粒 DNA 上含有 表达带双端核定位序列 （ NLS ）的 Cas9 及 sgRNA 的表达框，通过 TransIT-X2 (Mirus) 转染 试剂进行转染。转染所用的 Cas9 mRNA 进行了假尿苷和 5- 甲基胞嘧啶修饰且带有双端 核定位序列，使用 transIT-mRNA 转染试剂将 sgRNA 和 mRNA 共转染。 Cas9 RNPs 使用脂质 体 RNAiMAX ( Life Technologies ) 进行反向转染， RNP 的终浓度为 10 nmol 。 Cas9 蛋白上不含 核定位序列。 EnGen Cas9 含有双端核定位序列。编辑效率通过 T7E1 实验进行分析，结果 以修饰百分比进行统计。
光活化的Xanthone（PAX）染料可实现定量，双色和活细胞MINFLUX纳米镜
单分子定位概念minflux引发了对流体浮动器的特征的重新评估，以实现纳米尺度分辨率。minflux纳米镜检查受益于时间控制的荧光（“ on”/“ o实易”）的照片处理。与不可逆的切换行为结合在一起，预计本地化过程将简单地转化为高度效率和定量数据分析。最近报道的光活性黄酮（PAX）染料的电势被认为扩展了Minflux所用的分子开关列表，其561 nm激发量超过了荧光蛋白mmaple。通过分析内源标记的核孔复合物的有效标记效率，在定量比较了PAX 560，PAX + 560和MMAPLE的MINFLUX定位成功率。PAX染料被证明优于mmaple，并且与通常用于单分子定位显微镜的最佳可逆分子开关相提并论。此外，引入了理性设计的PAX 595，用于补充基于光谱分类的双色561 nm minflux成像，以及在快速实时的cell Minflux Imflux Imflux Imflux Imflux Imaging中展示了基于光谱分类的PAX分类和pax光化的确定性，不可逆性和不依赖性的pax光化性质。PAX染料满足了Minflux对每个标签位置的强大读数的需求，并填充了专用于561 nm Minflux成像的可靠的流体团。
国立彰化师范大学电子工程学系硕士班毕业条件表暨课程...
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