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LbCas12a-D156R 有效编辑 LOB1 效应结合元件，以产生抗溃疡病的柑橘植物
摘要：由柑橘黄单胞菌（Xcc）引起的柑橘溃疡病是全球大多数柑橘产区的重要经济病害。Xcc 分泌一种转录激活因子样效应物 (TALE) PthA4，与溃疡病易感基因 LOB1 启动子区的效应物结合元件 (EBE) 结合，激活其表达，从而引起溃疡症状。利用 Cas9/gRNA 编辑 EBE 区域已用于生成抗溃疡病的柑橘植株。然而，生成的大多数 EBE 编辑株系含有 1–2 bp 的插入/缺失，这更有可能通过 PthA4 适应来克服。TALE 的适应能力与与 EBE 的错配数量呈负相关。已知 LbCas12a/crRNA 产生的缺失比 Cas9 更长。在本研究中，我们使用了一种耐高温且更高效的 LbCas12a 变体 (ttLbCas12a)，该变体含有单个替换 D156R，用于修改 LOB1 的 EBE 区域。我们首先构建了 GFP-p1380N-ttLbCas12a:LOBP，经证实，该变体在柚子 (Citrus maxima) 叶片中通过 Xcc 促进的农杆菌渗滤而发挥功能。随后，我们在柚子中稳定表达了 ttLbCas12a:LOBP。生成了八个转基因株系，其中七个株系显示 EBE 的 100% 突变，其中一个株系是纯合的。EBE 编辑株系具有高达 10 bp 的 ttLbCas12a 介导的缺失。重要的是，这七个株系具有抗溃疡病性，并且未检测到脱靶。综上所述，ttLbCas12a 可有效利用来生成具有短缺失的双等位基因/纯合柑橘突变系，从而为柑橘的功能研究和育种提供有用的工具。
社交媒体营销策略分析与实施以提高客户参与度（PT. XYZ 案例研究）社交媒体营销策略
* 通讯作者 摘要 社交媒体在现代数字化企业界的营销推广技术中发挥着重要作用。由于其快速增长，重要的是要注意社交媒体对小型和大型企业营销的影响，使用社交媒体作为营销工具需要所有者与其追随者或成员建立客户联系。在社交媒体上发布内容必须有一个明确的概念和策略才能成功，不仅可以推广业务，还可以通过进行各种互动和活动来增加销售额并挖掘有关其追随者的更多信息。本研究试图调查和探索社交媒体营销策略分析和实施对提高 PT.XYZ 客户参与度的影响。本研究使用 Tuten & Solomon 的社交媒体营销策略框架，以及通过访谈和观察进行数据收集的定性方法。结果表明，通过最大限度地发挥功能并应用社交媒体营销策略概念，可以提高客户参与度和销售转化率。关键词：社交媒体、营销、客户参与、体育营销策略、数字营销。 ABSTRAK 媒体是现代和数字技术领域的社交媒体。请注意，请不要将媒体与社会媒体联系起来，以防止媒体社会传播。发布关于媒体社交媒体健康信息和战略的信息，请务必注意以下事项：凯吉亚坦。 Penelitian 的主要目标是分析和实施策略，以实现 PT 的社会媒体社会化。佩内利蒂亚人以图腾和所罗门的社交媒体为媒介，制定了战略，并以适当的方式进行数据分析和观察。 Hasil Penelitian Menunjukkan bahwa dengan memaksimalkan fitur-fitur yang ada dan menerapkan konsep strategi Social Media Marketing, dapat meningkatkan customerengagement and konversi penjualan.相关内容：Media Sosial、Pemasaran、Keterlibatan Pelanggan、Strategi Pemasaran Olahraga、Pemasaran Digital。一、简介
超低损失（ULL）互连
1。引入量子信号的独特特征，例如插入和叠加，使它们非常容易受到环境干扰的影响。因此，量子应用的成功取决于单光子的传输和操纵的可靠性。超低损耗光纤连接器在这种情况下起着关键作用，是量子设备之间的关键联系。标准连接器可能会引入重大损失，从而损害了量子通信的保真度。超低损耗连接器通过最大程度地减少信号降低并保持量子状态的完整性来应对这一挑战。2。量子光子量子应用中的光纤连接器需要组合精确的，耐用性和高性能在非常专业的条件下可靠地发挥功能。钻石的E-2000®和MiniAvim®连接器即使受到挑战性的环境因素，也是由于其出色的光学性能，鲁棒性和适应性的原因而脱颖而出。e-2000®特别以其集成的快门机械性而闻名，该机构可保护纤维末端面部免受污染和损害，从而确保随着时间的推移一致的性能。另一方面，MiniAvim®由于其紧凑，轻巧的设计与坚固的可靠性相结合而受到重视，使其成为挑战性环境条件（例如极端温度和振动）的首选连接器。3。在所有制造和组装过程中，必须测量这些参数并控制在控制之下。此外，Diamond的真空进料提供了在超高真空（UHV）和低温条件下运行的量子系统的关键界面解决方案。旨在实现跨真空屏障的预先和有效的光线传输，此进料可确保在将光学组件整合到量子环境中时，可确保最小的信号损失和最佳性能。Diamond的先进技术和工程确保这些解决方案满足量子研发的严格要求，提供无与伦比的可靠性和光学精确度。插入损失的原因只能通过控制多个参数，例如： - 套圈特性：直径，形式和精度孔直径和同心性来保证连接器的光学性能； - 抛光参数； - 端面瑕疵（划痕，凹坑和污染）； - 纤维核的侧面和角度未对准。横向未对准是单模连接器中插入损失的最重要贡献者。纤维制造商通常会指出最大的核心对偏心。0.5微米和±1微米内的覆层直径精度。
使用 CRISPR-Cas9 作为限制性酶
图表列表 图 1.1：限制性酶的发现时间表及一般历史里程碑……………………………………………………………………………………………………… 2 图 1.2：中心法则图…………………………………………………………………… 4 图 1.3：不同类型的限制性酶；ZFN 和 TALEN 序列特异性分别与特定三联体或有限特定 bp 序列有关。粉红色高亮表示所示限制性酶或内切酶的结合位点。粗线表示切割位点………………………………………………………… 5 图 1.4：CRISPR-Cas9 系统的功能组件（Bortesi, L. 和 Fischer, R.，2014 年）。面板 (a) 显示了 Cas9 正常发挥功能所必需的各个 RNA 组件。图 (b) 显示 RNA 成分连接在一起形成 sgRNA 序列。……………………………………………………………………...… 8 图 3.1：设计引物的 Lambda DNA 凝胶电泳（目标大小 1000bp）。孔 1 显示大小标准（以“M 表示），孔 2 和 3 显示成功 PCR …………………………………………………………………………………..... 20 图 3.2：基于 Origene 的 CRISPR-Cas9 方案的凝胶电泳。含有梯状物的孔标记为“L”。含有未切割的 PCR 产物储备孔标记为“P”。标签 2/3、1X 和 4X 表示反应中使用的 DNA 浓度。标准浓度为 1X。孔 2-4、6-8、10-12、14-16、18 和 19 显示 CRISPR/Cas9 反应产物 .……………………………….…….….… 21 图 3.3：基于 Origene 的改良版 CRISPR-Cas9 方案的凝胶电泳图，其中模板 DNA 浓度和 Cas9 试剂浓度均增加。含有梯度的孔标记为“L”。含有未切割的 PCR 产物原料孔标记为“P”。孔 3-6、7、8、10-13、14 和 15 含有 CRISPR/Cas9 反应产物。所有反应均含有 10uL 模板 DNA .…………………………………………………..……………………..……...…. 22 图 3.4：基于 IDT 的改良版 CRISPR-Cas9 方案的凝胶电泳图。含有梯状物的孔标有“L”。含有未切割的 PCR 原液产物的孔标有“P”。孔 2 不含任何产物。孔 3-6、7-10 和 11-14 含有 CRISPR/Cas9 反应产物。所有反应均含有 tracrRNA。孔 11-14 含有 3 倍量（uL）的模板 DNA……… ...