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World File Search System囊胚
综论报告类囊胚：
差异介质，TDM），nive pscs 透过自我组织的方式形成类囊胚（ Yu等人，2021a）。polo polo（polo 团队则利用再程式化纤维母细胞（（成纤维细胞））te te te te te te te te pre，pre，进行聚合形成称为iblastoids 的类囊胚（ liu et al。 （腔）liu等人，2021； Yu等人，2021a）。人类类囊胚的制作方法经不断改，naive Esc或ipscs（Yanagida等，2021; Kagawa等，2022； Yu等人，2023年）、EPSCS（Fan等，2021； Sozen等，2021），以及8Clcs （Mazid等，2022； Yu等人，2022年），子宫内膜上皮细胞）（Kagawa等，2022）（2022））子宫内膜基质细胞（2023）（2023））（2023））进进
基因编辑猪的囊胚互补和种间嵌合体
终末期器官衰竭或急性创伤性损伤与相当高的发病率和死亡率相关。对于许多此类绝症或毁灭性疾病，唯一的治愈疗法是实体器官移植 ( Garry 等人， 2005 年； Virani 等人， 2021 年 )。由于器官捐赠者数量有限，这种治愈性疗法仅适用于需要这些疗法的一小部分患者。例如，据估计，每年有 20 万至 30 万美国成年人可从原位心脏移植中受益，但只有大约 3000 名成年人接受了心脏移植 ( Virani 等人， 2021 年 )。这种差异推动了人们寻求替代疗法。除了心脏病等终末期器官疾病外，还有威胁四肢并最终导致肌肉体积损失的创伤性损伤 ( Corona 等人， 2015 年； Greising 等人， 2016 年 )。目前，治疗肌肉体积损失的治疗方法有限，因此导致大量发病率、截肢、终身残疾和生命损失（Greising 等人，2017 年）。这些慢性疾病和创伤需要新的治疗方法。基因编辑（Doudna 和 Charpentier，2014 年；Jinek 等人，2012 年；Cong 等人，2013 年）和体细胞核移植 (SCNT) 技术等技术进步
细胞周期阶段和 DNA 修复途径影响猪胚胎中 CRISPR/Cas9 基因编辑效率
摘要：CRISPR/Cas9 技术是一种用于在不同细胞类型和物种中操作基因组的强大工具。然而，与所有新技术一样，它仍然需要改进。不同的因素会影响 CRISPR/Cas 在受精卵中的效率，从而影响创建大型动物研究模型的总成本和复杂性。本研究评估了 CRISPR/Cas9 成分注射时早期注射（激活/受精后 6 小时内）与晚期注射（激活/受精后 14-16 小时）受精卵细胞周期阶段的重要性，以及 DNA 修复的同源重组 (HR) 途径的抑制对受精、精子注射、体细胞核移植和孤雌激活技术产生的胚胎的基因编辑、胚胎存活和发育的影响。与早期注射（86.3%；28.8%）相比，晚期细胞周期注射降低了胚胎存活率（以未裂解胚胎的比例衡量）和囊胚形成率（68.2%；19.3%）。然而，晚期注射（73.8%）的囊胚基因编辑率高于早期注射（63.8%）的囊胚。抑制 HR 修复通路可使早期注射的囊胚基因编辑效率提高 15.6%，而不会影响胚胎发育。我们的研究结果表明，在早期细胞周期注射以及 HR 抑制可提高猪囊胚的受精卵活力和基因编辑率。
2024; 20(13): 5056-5069. doi: 10.7150/ijbs.99519 研究论文 人类 ESC 衍生的胚外细胞与小鼠囊胚的嵌合
据报道，用 BMP4 和 TGF β 信号抑制剂 (A83-01) 和 FGF 信号抑制剂 (PD173074)（称为 BAP）处理的人类胚胎干细胞 (hESC) 可以在体外有效分化为胚外 (ExE) 细胞。由于无法获得人类胚胎，从伦理上讲不可能在体内测试 ExE 细胞的发育潜力。在这里，我们证明大多数 ExE 细胞表达滋养层细胞 (TB) 和羊膜细胞 (AC) 的分子标记。宫内移植后，ExE 细胞会形成小鼠胎盘。更有趣的是，ExE 细胞可以与小鼠囊胚嵌合，因为在注射到囊胚后，它们会穿透其滋养外胚层。将注射的囊胚植入代孕小鼠体内后，在 E14 时在胎盘迷路、连接区甚至子宫蜕膜附近发现了人类细胞，这些细胞表达胎盘标志物并分泌人绒毛膜促性腺激素。令人惊讶的是，ExE 细胞也对嵌合胚胎的软骨有贡献，其中一些表达软骨标志物 SOX9，这与胎盘中 TB 和 AC 的中胚层潜力相一致。删除中胚层决定因子 MSX2 会限制 ExE 细胞对胎盘的贡献。因此，我们得出结论，hESC 衍生的 ExE 细胞可以与小鼠囊胚嵌合，并对嵌合体的胎盘和软骨都有贡献，这与它们的异质性一致。宫内和囊胚内注射是研究 ExE 细胞发育潜力的新颖而灵敏的方法。
一种用于预测人类囊胚倍性的非侵入性人工智能方法：回顾性模型开发和人类囊胚倍性：回顾性模型开发和
生理学和生物物理学系（J Barnes、M Brendel MEng、M Brendel MEng、S Rajendran BS、J Kim MEng、P Zisimopoulos MSc、A Sigaras MSc、P Khosravi PhD、Prof O Element PhD、I Hajirasouliha PhD）[ PubMed ] Zisimopoulos、A Cigars、P Khosravi、Prof O Element、I Hajirasouliha 和 Ronald O Perelman 和 Claudia Cohen 生殖医学中心（JE Malmsten DPS、Q Zhan PhD、Prof Z Rosenwaks MD、N Zaninovic PhD）。和迈耶癌症中心（Prof O Element、I Hajirasouliha）和 WorldQuant 定量预测计划（Prof O Element），威尔康奈尔医学院，纽约，纽约州，美国；美国纽约州康奈尔大学三机构计算生物学和医学项目（VR Gao、S Rajendran、Q Li）； QED Analytics，美国新泽西州普林斯顿（JT Sierra 博士）；美国纽约州纽约纪念斯隆凯特琳癌症中心流行病学和生物统计学系计算肿瘤学（P Khosravi）； IVI Valencia，西班牙瓦伦西亚信仰健康研究所（M Meseguer 博士）
利用 CRISPR/Cas9 系统在猪胚胎中表达 cd163
摘要 基因编辑 (GE) 在养猪生产中的应用可以产生广泛的影响，因为它可以增加基因编辑猪在农业和生物医药中的可用性。成簇的规律间隔的短回文重复序列 (CRISPR)/CRISPR 相关蛋白 9 (Cas9) 系统的最新应用有望提高基因编辑的效率。CRISPR/Cas9 系统的细胞质微注射能够在猪受精卵中诱导位点特异性突变。在本研究中，我们检查了通过细胞质微注射将 CRISPR/Cas9 蛋白和分化簇 163 (cd163) 引导 RNA (gRNA) 成分引入受精卵的效率。CRISPR/Cas9 蛋白和 cd163 gRNA 注射组的裂解率 (78.9% 和 85.2%) 与对照组 (90.6%) 在统计学上相似。此外，CRISPR/Cas9 蛋白和 cd163 gRNA 注射组的囊胚形成率（19.9% 和 19.6%）也与对照组（21.5%）具有统计学差异。当对单个囊胚进行基因分型时，我们在后续的囊胚中观察到基因的靶向修饰。在 10 ng/ul 样本中，CRISPR/Cas9 蛋白和 cd163 (10+134) gRNA 各注射组（22.7%）显著高于（p<0.05）CRISPR/Cas9 蛋白和 cd163(10) gRNA 各注射组（12.9%）。在突变囊胚中检测到了各种类型的 indel 突变，包括 4 bp 缺失到 72 bp 插入。这些结果表明，CRISPR/Cas9 技术可用于通过直接受精卵注射生产基因编辑猪。
利用 CRISPR/Cas 生成转基因小鼠...
引言 转基因小鼠被广泛用于研究基因功能和建立人类疾病模型。传统的基因打靶方法 1 ，是通过在小鼠 ES 细胞中同源重组 (HR) 引入突变来生成的突变小鼠。注射入野生型 (WT) 小鼠囊胚的靶向 ES 细胞可形成嵌合小鼠的生殖系，当嵌合小鼠通过生殖系传递时，就会产生含有靶基因的后代 1 。通过 ES 细胞的 HR 生成突变小鼠成本高且耗时，因为需要选择基因打靶的 ES 细胞克隆并注射入囊胚来生成嵌合小鼠，然后必须对其进行繁殖以产生单基因突变后代，这个过程通常需要 9 到 12 个月。构建携带多个突变的小鼠将增加更多的时间和精力。此外，HR 基因靶向需要使用 ES 细胞技术，而大多数哺乳动物物种无法使用这种方法。
仅敲除 LincRNA#1 不会影响凯尔特 POLLED 等位基因杂合牛的无角表型
长基因间非编码 RNA（lincRNA#1）在无角牛胎儿的角芽区过度表达，表明其可能在角芽抑制中发挥作用。使用基因组编辑来测试此序列的缺失是否与角表型有关。将两个具有高突变效率的 gRNA 靶向 lincRNA#1 序列两侧的 5′ 和 3′ 区域，在授精后 6 小时与 Cas9 一起作为核糖核蛋白复合物注射到牛受精卵（n = 121）中。在产生的囊胚（n = 31）中，84% 具有预期的 3.7 kb 缺失；在这些具有 3.7 kb 缺失的胚胎中，88% 是双等位基因敲除。将 39 个推测已编辑的 7 天囊胚移植到 13 头同步受体母牛体内，导致 10 例妊娠，其中 5 个胚胎在 POLLED 基因座上为显性 PC POLLED 等位基因杂合子，5 个胚胎为隐性 pp 基因型。产生的胎儿中有 8 个 (80%) 为双等位基因 lincRNA#1 敲除，其余两个为嵌合体。RT-qPCR 分析用于确认敲除胎儿中不存在 lincRNA#1 表达。对基因型 (PC p) POLLED 、lincRNA#1 敲除胎儿的表型和组织学分析显示，其形态与未编辑的对照无角胎儿相似，表明仅缺乏 lincRNA#1 不会导致有角表型。
人工智能模型（整倍体预测算法）可以根据延时数据预测胚胎倍性状态
摘要背景：对于延时摄影技术（TLT）与胚胎倍性状态之间的关联，目前尚未完全阐明。TLT具有数据量大、非侵入性的特点。如果想从TLT准确预测胚胎倍性状态，人工智能（AI）技术是一个不错的选择。但目前AI在该领域的工作需要加强。方法：研究共纳入2018年4月至2019年11月的469个植入前遗传学检测（PGT）周期和1803个囊胚。所有胚胎图像均在受精后5或6天内通过延时显微镜系统捕获，然后进行活检。所有整倍体胚胎或非整倍体胚胎均用作数据集。数据集分为训练集、验证集和测试集。训练集主要用于模型训练，验证集主要用于调整模型的超参数和对模型进行初步评估，测试集用于评估模型的泛化能力。为了更好的验证，我们使用了训练数据之外的数据进行外部验证。从2019年12月至2020年12月共155个PGT周期，523个囊胚被纳入验证过程。结果：整倍体预测算法（EPA）能够在测试数据集上预测整倍体，曲线下面积（AUC）为0.80。结论：TLT孵化器已逐渐成为生殖中心的选择。我们的AI模型EPA可以根据TLT数据很好地预测胚胎的倍性。我们希望该系统将来可以服务于所有体外受精和胚胎移植（IVF-ET）患者，让胚胎学家在选择最佳胚胎进行移植时拥有更多非侵入性辅助手段。关键词：AI，倍性状态，延时，PGT，预测