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细菌清除率和评估虾免疫刺激活性的新鉴别血细胞染色方法
摘要：开发了评估黑虎虾（Penaeus monodon）免疫刺激剂功效的新方法。试验虾饲喂 2% 或 4% 酵母提取物 (YE) 涂层饲料，而对照组饲喂无涂层饲料。喂养 4 周后，对单只虾进行总血细胞计数 (THC)、颗粒血细胞 (GH) 数量和细菌清除率评估。对于血细胞计数，在室温下用 50% 乙醇中的 1.2% 玫瑰红对福尔马林固定的血淋巴染色 20 分钟。一部分混合物用血细胞计数器进行 THC 计数，一部分涂在显微镜载玻片上晾干，然后用苏木精复染进行 GH 计数。通过这种技术，可以获得高质量的涂片以进行准确的分类计数。细菌清除试验用于评估体液和细胞防御机制的总体效果。每只虾肌肉注射 1 × 10 8 个哈维氏弧菌，注射后 0、15、30 和 60 分钟收集抗凝血淋巴，在 TCBS 琼脂上进行四次滴数计数（20 µl）。饲喂 4% YE 的虾的总血细胞计数显著高于（p < 0.05）饲喂无涂层饲料的虾。饲喂 YE 的虾的颗粒细胞百分比和细菌清除率高于饲喂对照饲料的虾。这两种方法可以简单快速地比较虾组抗菌防御能力的差异。
自噬激活可以部分挽救蛋白酶体功能障碍介导的心脏毒性
图 1 心脏靶向（Gal4 Τ inC Δ 4 ）蛋白酶体 Pros β 5 基因的 KD 导致蛋白质组不稳定和线粒体数量减少。 (a) Pros β 5 siRNA 后心脏组织中 Pros β 5 基因的相对表达（与对照相比）。 (b, c) Pros β 5 RNAi（与对照相比）果蝇心脏组织中相对 (%) 26S 蛋白酶体活性 (b) 和 ROS 水平 (c)。 (d) Pros β 5 KD 后果蝇心脏组织中蛋白质组泛素化 (Ub) 和羰基化 (DNP) 的免疫印迹分析。 (e) CLSM 观察用 LysoTracker 染色的 Pros β 5 RNAi（与对照相比）果蝇心管（e1）、LysoTracker 定量（e2）和使用溶酶体标记物抗 Lamp1（e3）进行免疫印迹分析。(f) 所示基因型果蝇心脏组织中蛋白酶活性的相对（％）。(g) blw/ATP5A 免疫荧光染色后，CLSM 可视化所示果蝇品系心脏组织中的线粒体；细胞核用 DAPI 复染。(h) Pros β 5 KD 后，所示基因型分离心脏组织中所示线粒体基因的相对表达水平（与对照相比）。在 (a, h) 中，基因表达与相应对照作图；使用 RpL32/rp49 基因作为 RNA 输入参考。 （d）和（e3）中的 Gapdh 和 Actin 探测分别用作蛋白质输入参考。p 值采用非配对 t 检验计算。条形图，± SD（n ≥ 3）；* p < 0.05；** p < 0.01