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World File Search System外植体
人类视网膜外植体的培养作为视网膜基因疗法的离体模型
光遗传学基因治疗可以使用重组腺相关病毒（AAV）向量来用于治疗遗传性视网膜疾病的特定临床前应用。人类视网膜外植体作为离体模型辅助确定细胞向性疗法和随后的基因表达水平，然后递送病毒载体。可以在一定时间内获得视网膜组织的提取物；因此，有可能使用各种方法（包括免疫组织化学染色）转导和确认病毒的有效性。因此，我们描述了从视网膜不同部分收集和培养人类视网膜碎片的方法，这些方法在解剖和分子上不同。碎片被固定，切片和染色。也已经描述了一种分解方法，以获得视网膜细胞悬浮液，该悬浮液可用于其他实验，例如流式细胞仪或mRNA/蛋白质水平表达测定法。
基因型无关的转化和基因组编辑，使用新型的外植体材料
农杆菌介导的菜籽（甘蓝纳普斯）通过下胚轴段转化是过去30年来常用的一种方法。虽然基于下胚基的方法是良好的，但它不容易适应精英种质，并且延长过程对于生产转化设置并不理想。我们开发了一种基于上皮基和较高的茎（损伤）段的农杆菌介导的转化方法，该方法有效，快速且可用于高通量转化和基因组编辑。该方法已在多种低芥酸菜籽基因型中成功实现。该方法似乎是与基因型无关的，具有不同的转化效率。节日段转换用于产生转基因事件以及CRISPR-CAS9介导的移码基因敲除。
使用 Split AAV 进行体内遗传性眼病矫正-...
体外：293T、人类视网膜类器官、iPSC 衍生的 RPE、人类视网膜外植体、人类 RPE/脉络膜外植体 体内：C57BL/6J 小鼠（WT 和 Abca4 huG1961E）、非人类灵长类动物（食蟹猴）
CRISPR/Cas9 介导的木豆和花生中八氢番茄红素去饱和酶的诱变
在花生中，使用子叶节外植体在 cv. ICGV 15083 中进行农杆菌介导的转化。总共 250 个外植体与 CRISPR/Cas9 构建体共培养，结果 80 个外植体在芽起始培养基下 30-40 天内产生多个芽。分离产生多个芽的外植体，并在芽伸长培养基中每 10-15 天进行一次卡那霉素选择（125 mg/L）继代培养。总共 70 个芽用 Cas9 和 NptII 基因特异性引物进行测试。其中，50 个（约 70%）对 Cas9 和 NptII 基因均呈阳性（图 3）。在这个组中，25 个芽（约 25%）表现出不同程度的白化表型（图 4，表 2）。白化芽在再生后三个月内无法存活。一些
sgRNA、启动子及外植体对芥兰CRISPR/Cas9系统基因编辑效率的影响
1 四川农业大学园艺学院，成都 611130；2021305054@stu.sicau.edu.cn（WH）；zhengaihong@stu.sicau.edu.cn（AZ）；hh820423@163.com（HH）；2021205028@stu.sicau.edu.cn（XL）；2022205029@stu.sicau.edu.cn（QL）；201906195@stu.sicau.edu.cn（LL）；2022205026@stu.sicau.edu.cn（RL）；huangzhi@sicau.edu.cn（ZH）；13185@sicau.edu.cn（YQ）；13920@sicau.edu.cn（YT）；10650@sicau.edu.cn（HL）； zhangf@sicau.edu.cn (FZ) 2 遵义师范学院生物与农业技术学院，遵义 563006，浙江；czf810@163.com 3 毕节市农业科学研究所，毕节 551700，浙江；majie_011@126.com 4 浙江大学园艺系，杭州 310058，浙江 * 通讯地址：qmwang@zju.edu.cn (QW); bsun@sicau.edu.cn (BS); 电话：+86-571-88982278 (QW); +86-28-86291848 (BS) † 这些作者对本文贡献相同。
3D 肿瘤外植体作为研究癌症患者治疗途径和预测生物标志物的新平台
免疫检查点抑制剂的免疫疗法可以在不同的人类恶性肿瘤中诱导持久的临床反应，但全球范围内有反应的患者数量仍然很少。ICI 有限的治疗效果取决于多种因素，其中肿瘤微环境的免疫抑制特征起着关键作用。因此，需要能够解剖免疫敌对肿瘤环境成分的实验模型来揭示如何克服抵抗力并获得全面的抗肿瘤免疫力。最近的证据支持 3D 离体系统在保留肿瘤微环境特征以阐明对免疫检查点阻断的反应和抵抗的分子和免疫学机制方面的实用性。在这篇观点文章中，我们讨论了患者来源的 3D 肿瘤模型的最新进展及其在支持临床治疗决策方面的潜力。我们还将分享我们在动态生物反应器肿瘤外植体培养黑色素瘤和肉瘤患者样本方面的经验，这是一个可靠且有前途的平台，可以揭示对免疫检查点抑制剂的免疫反应。
用于脑机接口的人类皮层植入犹他电极阵列的外植体分析
目前正在开发脑机接口，以恢复因受伤或疾病而瘫痪的人的运动能力。虽然治疗潜力巨大，但接口的长期稳定性对于广泛的临床应用至关重要。虽然许多因素都会影响记录和刺激性能，包括电极材料稳定性和宿主组织反应，但这些因素尚未在人体植入物中进行研究。在这项临床研究中，我们试图通过外植体分析来表征材料完整性和生物组织封装，以确定影响电生理性能的因素。我们检查了从参与皮层内 BCI 研究的两名人类参与者身上移植的总共六个犹他阵列。在一名参与者 (P1) 体内植入了两个铂 (Pt) 阵列 980 天，在另一名参与者 (P2) 体内植入了两个 Pt 和两个氧化铱 (IrOx) 阵列 182 天。我们观察到，所有六个阵列的记录质量都呈现出相似的趋势，即在最初 30 – 40 天内峰峰值电压最初增加，随后在 P1 中逐渐下降。使用光学和双光子显微镜，我们观察到在参与者 P1 中植入较长时间的两个阵列的组织包裹程度更高。然后，我们使用扫描电子显微镜和能量色散 X 射线光谱来评估材料退化。发现 Pt 阵列的所有材料退化指标在植入时间较长的参与者中更为明显。两个 IrOx 阵列接受了短暂的调查刺激，其中一个阵列显示大多数受刺激部位的铱丢失。记录性能似乎不受这种铱损失的影响，这表明 IrOx 涂层的附着力可能受到刺激的影响，但金属层直到或之后才脱落阵列移除。总之，植入时间较长的阵列中组织包裹和材料降解更为明显。此外，这些阵列的信号幅度和阻抗也较低。应开发新的生物材料策略，以最大限度地减少纤维包裹并增强材料稳定性，以实现较长植入期内的高质量记录和刺激。
高效农杆菌介导的遗传...
使用含有 pCAMBIA 1301 载体的农杆菌菌株 AglI 感染新鲜芦荟外植体，以验证 GUS 基因的瞬时表达。与农杆菌共培养后，在进行外植体 GUS 组织化学染色的外植体上观察到几个明显的蓝点（图 5）。该载体在 GUS 基因中有一个内含子，确保其仅在转化组织中活跃表达，消除了假阳性的可能性。通过 GUS 组织化学染色评估了不同芦荟外植体在不同物理参数下的再生潜力和转化效率。在组 I 和组 II 中分别发现瞬时表达率为 91.3% 和 28.6%。芦荟茎（芽基部）表现出最大的再生潜力
针对基因组完整性功能障碍阻碍非小细胞肺癌循环肿瘤细胞衍生外植体的转移能力
DNA 损伤和基因组不稳定性是非小细胞肺癌 (NSCLC) 病因和进展的因素。然而，它们的治疗开发令人失望。CTC 衍生外植体 (CDX) 为 CTC 转移能力的机制研究提供了系统，并可能为生物驱动疗法提供理论基础。从 NSCLC CTC 建立了四种 CDX 模型和 3 种 CDX 衍生细胞系，并重现了患者肿瘤组织学和对铂类化疗的反应。CDX (GR-CDXL1、GR-CDXL2、GR-CDXL3、GR-CDXL4) 与患者肿瘤活检和/或单个 CTC 显示出相当大的突变景观相似性。关键 DNA 损伤反应 (DDR) 和基因组完整性相关基因的躯干改变在各个模型中普遍存在，并被评估为体外、卵内和体内的治疗靶点。 GR-CDXL1 表现出与双等位基因 BRCA2 突变和 FANCA 缺失相关的同源重组缺陷、有丝分裂后未修复的 DNA 损伤以及对奥拉帕尼的敏感性（尽管对化疗有抵抗力）。GR-CDXL4 中的 SLFN11 过表达导致对奥拉帕尼的敏感性，并且与患者肿瘤活检中的神经内分泌标志物表达一致，表明 SLFN11 在 NSCLC 组织学转化为小细胞肺癌 (SCLC) 方面具有预测价值。着丝粒聚集促进了 GR-CDXL3 细胞中可靶向的染色体不稳定性。这些 CDX 揭示了 DDR 和基因组完整性相关缺陷是 CTC 转移潜能的核心机制，并为其在转移性 NSCLC 中的治疗靶向提供了理论依据。
呼吸复合物 I 调节人类肿瘤免疫微环境外植体模型中的树突状细胞成熟
摘要 背景 将细胞毒性化疗或新型抗癌药物与 T 细胞调节剂相结合在治疗晚期癌症方面具有巨大的前景。然而，反应因肿瘤免疫微环境 (TIME) 而异。因此，显然需要药理学上可处理的 TIME 模型来剖析其对个体水平上单一和联合治疗反应的影响。 方法 我们在此建立了一种患者来源的乳腺癌外植体培养 (PDEC) 模型，该模型保留了原发性肿瘤的免疫背景，重现了细胞因子谱和 CD8+T 细胞细胞毒活性。 结果 我们探索了合成的致死性 BCL2 抑制剂维奈克拉+二甲双胍药物组合在体外的免疫调节作用，发现二甲双胍不能克服维奈克拉的淋巴细胞耗竭作用。相反，二甲双胍通过抑制线粒体复合物 I 来促进树突状细胞成熟，从而提高它们共刺激 CD4+T 细胞的能力，从而促进抗肿瘤免疫。结论我们的研究结果确立了 PDEC 是一种可行的模型，可用于在患者特定 TIME 的背景下识别抗癌药物的免疫调节功能。