摘要 本研究利用CRISPR/Cas9核糖核蛋白(RNP)复合体系统对康乃馨乙烯(ET)生物合成基因[1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)合成酶1(ACS1)和ACC氧化酶1(ACO1)]进行编辑。首先,验证靶基因(ACS1和ACO1)的保守区域,以生成不同的单向导RNA(sgRNA),然后使用体外切割试验验证sgRNA特异性切割靶基因的能力。体外切割试验表明,sgRNA在切割各自的靶区域方面具有很高的效率。将sgRNA:Cas9复合物直接递送到康乃馨原生质体中,并对原生质体中的靶基因进行深度测序。结果表明,sgRNA 适用于编辑 ET 生物合成基因,因为 ACO1 的突变频率范围为 8.8% 至 10.8%,ACS1 的突变频率范围为 0.2–58.5%。在对用 sgRNA:Cas9 转化的原生质体产生的愈伤组织中的目标基因进行测序时,在 ACO1 中发现了不同的 indel 模式(+ 1、- 1 和 - 8 bp),在 ACS1 中发现了不同的 indel 模式(- 1、+ 1 和 + 11)。这项研究强调了 CRISPR/Cas9 RNP 复合物系统在促进康乃馨 ET 生物合成的精确基因编辑方面的潜在应用。关键词 愈伤组织,CRISPR/Cas9,乙烯生物合成基因,Indel 模式,体外裂解,原生质体
材料和方法植物材料和保存空间。在这些试验中使用的“改进的白色SIM卡”国家是使用推荐的文化实践在该部,戴维斯(Davis)的环境园艺或从当地商业种植者那里获得的推荐文化实践进行的。将花茎切成12 cm或50 cm的长度,处理并放置在含有25 ml稀释的微生物悬浮液(见下文)的单个管中,以确定其寿命。在每种处理中使用了十个花,并重复2或3次实验。每天观察并丢弃了花朵,因为第一个枯萎的症状是明显的。在连续的荧光下,花在22°C下保持在22°C(大约1080 lux)。相对湿度在40%至60%之间。
在1925 - 1970年期间,本质上只有一种蘑菇种,agaricus brunnescens peck [= = A. Bisporus(Lange)Sing。],在美国种植。几乎所有这些种植都是在全职商业基础上。然而,最近的栽培糊状房间多样化的趋势(4,9)促进了小规模和兼职蘑菇种植的广泛兴趣。在原木上种植蘑菇,例如shiitake,lentinus edodes(berk。)唱歌。(8)或牡蛎蘑菇,胸膜均方体(jacq。:fr。)kumm。(7)特别适合补充农场生产或家庭花园。为了培养蘑菇,将合适的子策略接种了Spawn,这是一种种植材料,该材料由营养的亚策略(例如,谷物或木材)组成,该材料是通过蘑菇菌丝体纯培养(6)所定居的。由于制造产卵所需的特殊设施,库尔和无菌技术,因此大多数蘑菇种植者从Spawn-Maker购买了其种植材料(Spawn)。通常,Agaricus spp的产卵。在产卵所需的几个小时内交付给蘑菇种植者。由于谷物产卵的高度易腐性质,生成型制造商使用冰箱的卡车将产卵传递到遥远的蘑菇农场。很可能小规模或兼职蘑菇种植的发展会受到产卵的可用性的很大影响。目前,最近介绍的蘑菇种类的产卵,例如L. edodes,pleurotus sp。和Flammulina velutipes(Fr。)