弗氏

利用 CRISPR/Cas9 系统对弗氏柠檬酸杆菌进行改造

CRISPR/Cas9（成簇的规律间隔的短回文重复序列/CRISPR 相关蛋白）系统是一种快速高效编辑基因组的有用工具。然而，使用 CRISPR/Cas9 编辑细菌基因组仅限于选择主要用于高价值产品生物生产的微生物底盘。因此，需要将 CRISPR/Cas9 工具扩展到其他微生物。在这里，我们的目标是评估 CRISPR/Cas9 对柠檬酸杆菌 ATCC 8090 型菌株基因组编辑的适用性。我们评估了常用的双质粒 pCas/pTargetF 系统，以实现柠檬酸杆菌中的基因删除和插入，并确定了编辑效率。基于 CRISPR/Cas9 的方法对半乳糖激酶 (galk) 的删除具有高编辑效率（~91%），并且能够使用各种单向导 RNA (sgRNA) 序列进行删除。为了评估 CRISPR/Cas9 工具插入基因的能力，我们使用了荧光报告基因 mNeonGreen、内肽酶 ( yebA ) 和转录调节剂 ( xylS )，发现每个基因都以高效率 (81 – 100%) 成功插入。这些结果加强并扩展了 CRISPR/Cas9 基因组编辑在 C. freundii 中的应用，将其作为额外的微生物底盘。