HAL 是一个多学科开放存取档案库,用于存放和传播科学研究文献,无论这些文献是否已出版。这些文献可能来自法国或国外的教学和研究机构,也可能来自公共或私人研究中心。
还使用特异性引物插入了 MglB (D236A) 中的突变。通过重叠 PCR 连接每个扩增片段,并通过热融合法亚克隆到线性化质粒中 [14]。所选载体为用于细菌表达的 pRSET B、用于哺乳动物表达的 pcDNA3 和用于植物表达的 pRI201_AN。将叶绿体定位信号、核酮糖二磷酸羧化酶小链 1A (RBCS1a) [15] 序列通过 Gly-Gly-Ser-Gly-Gly 接头融合在 LOTUS-Glc 和 LOTUS-Glc (D236A) 的 N 末端。为了共表达 miniSOG2 和 LOTUS-Glc,我们将 LOTUS-Glc 和 miniSOG2 与可自裂解的 P2A 肽连接起来 [16]。使用热休克法对大肠杆菌 (E. coli) 菌株 XL10-Gold 进行转化,并在 2 mL LB 培养基中用 0.1 mg/ml 氨苄青霉素在 37 ◦ C 下培养单个菌落过夜。通过碱性-SDS 裂解从收集的细菌沉淀中进行小规模 DNA 制备。使用 BigDye Terminator v1.1 循环测序试剂盒 (Thermo Fisher Scientific) 通过染料终止子循环测序确认质粒序列。LOTUS-Glc 及其变体的 DNA 序列显示在注释 S1 中。
图 1:CHO-K1 细胞在含有或不含有 2.5 mM 丙磺舒的条件下,在 37 °C 下与含有缓冲液的 PhenoVue Fluo-4 AM 一起孵育 45 分钟。添加 ATP,使用 FITC 滤光片组在刺激前(对照)和刺激后(ATP)获取图像。
通讯作者:Deborah K. Lieu,博士,加利福尼亚大学戴维斯分校,内科系,心血管医学科,再生疗法研究所 1616,2921 Stockton Blvd.,萨克拉门托,CA 95817,电话:916-734-0683,dklieu@ucdavis.edu。作者贡献 Sun:构思和设计,数据收集和汇编,数据分析和解释,手稿撰写 Kao:数据收集 Chang:数据收集 Merleev:软件开发和数据分析 Overton:数据收集 Pretto:数据收集 Yechikov:软件开发,数据分析和解释 Maverakis:软件开发和数据分析 Chiamvimonvat:数据分析和解释,手稿最终审定 Chan:提供仪器,手稿最终审定 Lieu:构思和设计,资金支持,数据分析和解释,手稿撰写,手稿最终审定