格式 C-19、F-19-1、Z-19(通用)1.研究初始背景 (1)在养殖虎斑河豚时,每只虎斑河豚需剪牙1-2次,防止其被咬而死亡或掉鳍,降低鱼的商业价值。牙齿切割工序由熟练的人员逐一进行,因此非常繁琐。此外,还对鱼造成负担,包括麻醉和术后需要治愈嘴部周围的伤口。从生产率和动物福利的角度来看,希望制定措施来减轻这项工作的负担。 在虎斑河豚养殖中,一般以颗粒饲料作为食物,因此不需要用大牙齿来咬碎壳或撕碎肉。即使它们的牙齿发育不全,但由于它们能够吸入和食用复合饲料,因此它们能够充分生长。另一方面,如果养殖的虎斑河豚从笼子里逃出到海里,牙齿发育不全的个体咬合力会降低,从而降低它们在野外捕食的能力。因此,它们的生存能力将低于野生鱼类,也更难以繁衍下一代。这被认为有助于防止养殖鱼类的遗传偏差基因传播到自然界,因此预计在保护遗传资源方面具有重要价值。 硬骨鱼牙齿和哺乳动物牙齿被认为是生物体产生的最坚硬的组织结构。这两种牙齿都具有功能和形态相似的最外层结构,称为牙釉质(硬骨鱼)和牙釉质(哺乳动物)。此前人们认为,虽然硬骨鱼的牙齿与哺乳动物的牙齿在形态上相似,但由于两者的晶体结构不同,且牙齿中的组织来源于不同的结缔组织,因此它们是分别进化的类似器官(参考文献1)。但是,2005年,美国发现了与河豚门牙形成有关的一个基因群,即分泌性钙结合磷蛋白(SCPP)的存在(参考文献2)。通过分子进化分析发现,该基因群是所有脊椎动物牙齿在进化过程中共同参与的牙齿组织矿化的主要基因群(参考文献3)。 (2)在个体中,单碱基替换突变有:1.通过在蛋白质编码区创建终止密码子来抑制基因功能;2.通过氨基酸替代来降低或改变蛋白质的功能,3.人们认为表达调控区的突变会导致基因表达的增加或减少。因此,人工诱导单碱基替换突变的技术是分析基因功能的技术之一。 此前,我们已开发出利用化学诱变剂诱发单碱基置换突变的TILLING法,从适用于小型养殖鱼的传统方法(参考文献4~7),发展成为适用于养殖鱼精子和卵子的安全实用的突变引入技术(突变引入率为0.4%)(参考文献7)。利用该技术,对约300尾突变的虎斑河豚进行了9个SCPP基因突变的有无检测,发现了数尾SCPP2基因氨基酸取代的突变个体,但并未观察到牙齿缺损等明显症状。 近年来,基因组编辑技术作为一种可以针对特定基因引入突变的技术,在育种领域受到广泛关注。其中,CRISPR方法不仅比以往的ZFN、TALEN方法实施效果显著提高,而且操作也相对简单,目前已在多个领域得到应用并有报道结果(参考文献8)。在日本,真鲷和虎河豚是首批由民间企业上市的基因组编辑养殖鱼。预计未来基因组编辑鱼在水产养殖中的应用将变得更加广泛。 因此,我们开展了这个项目,因为我们认为使用 CRISPR/Cas 系统(最通用的基因组编辑技术,可以直接针对特定基因的碱基序列)一次性将突变引入所有目标 SCPP 基因是有效的。 2.研究目标:(1)利用突变导入技术CRISPR/Cas系统,对9种门牙形成基因同时导入多种突变,并通过对各个个体门牙的形态分析,识别出在虎斑河豚门牙形成过程中起关键作用的基因。 (2)为了减少今后虎河豚养殖中所需的切牙工作量,我们将通过基因功能分析培育出门牙形成率低的虎河豚个体,为生产门牙形成率低的虎河豚品种奠定基础(图1)。
Ashley Rasys 博士完美地体现了 ISTT 青年研究员奖的精神和目标,正如所述:“ISTT 青年研究员奖表彰年轻科学家的杰出成就,他们将以新想法让转基因技术领域充满活力,并且最近获得了高级专业学位。” Rasys 博士以双博士学位学生的身份就读于佐治亚大学 (UGA)。她的研究生培训是在细胞生物学系进行的,由 Jim Lauderdale 博士和 Doug Menke 博士(遗传学系)指导。 Rasys 博士成功地完成了博士学位答辩,完成了 DVM 培训,并于 2022 年 5 月获得了两个学位。 Rasys 博士是 ISTT 青年科学家奖的杰出获奖者,因为她创造了一种新颖的方法,培育出了第一批转基因爬行动物。她的开创性发现已被世界各地的新闻媒体和科学期刊报道,包括《纽约时报》、《PBS》、《Business Insider》、《Science》、《New Scientist》、《The Scientist》和《Nature》等。 Rasys 博士对动物解剖学、生理学和比较动物医学的广泛了解使她提出,棕色安乐蜥(Anolis sangrei)将是研究中央凹发育的良好动物模型。这些蜥蜴需要高敏锐度的视力来捕食昆虫,并且有中央凹眼。然而,与蜥蜴一起工作给 Rasys 博士带来了巨大的挑战。当她开始她的项目时,还没有人成功地对任何爬行动物进行过有针对性的基因操作。虽然操纵老鼠、斑马鱼和青蛙基因组的技术已经为人所知一段时间了,但蜥蜴是一个更具挑战性的物种,因为卵子的受精发生在体内,雌性会储存以前交配的精子。这使得研究人员很难控制受精发生的时间。此外,当卵子产下时,已经有一个非常先进的胚胎。Ashley 的主要突破是直接在卵巢中未受精的卵母细胞上进行基因编辑,而不是对新受精的卵子或早期胚胎进行基因编辑。为了完成对蜥蜴的基因操作,拉西斯博士必须开发新的麻醉和手术技术,用于治疗安乐蜥。这些技术现在正被世界各地专门研究爬行动物的兽医诊所和动物园采用。这项工作为蜥蜴中央凹发育的分子研究奠定了必要的基础,也是其他致力于了解脊椎动物眼睛进化的实验室的重要资源。此外,拉西斯博士对棕色安乐蜥眼睛发育的仔细评估重新引起了人们对与人类眼睛发育有关的一种奇怪现象的兴趣,这种现象最早由德国外科医生和眼科医生弗里德里希·奥古斯特·冯·阿蒙在 19 世纪 50 年代报告。Ammon 报告称,人类的眼睛在发育过程中会发生短暂的不对称形状变化。此后,这种现象已被多次报道,其意义也引起了激烈的争论。Rasys 博士的研究有力地表明,不对称的眼睛发育与中央凹的形成有关,她根据自己的数据提出了一种新的中央凹发育机制。这种新提出的机制已经对该领域产生了强烈的影响。她开发的基因改造方法已被 Menke 实验室用来生成具有其他基因突变的蜥蜴。此外,Rasys 博士在蜥蜴中开发的方法现在正在被修改以用于鸡。Rasys 博士最近开始在美国国立卫生研究院的国家眼科研究所担任博士后研究员,她将继续推进爬行动物基因编辑和眼睛发育方面的工作。 Ashley Rasys 博士在美国德克萨斯州休斯顿举行的第 18 届转基因技术会议(TT2023;2023 年 11 月 12 日至 15 日)上展示了她的科学成就,并在会上领取了奖项并发表了演讲。
执行摘要 黑尾鹿(Odocoileus hemionus)是蒙大拿州的重要物种,蒙大拿州鱼类、野生动物和公园管理局 (MFWP) 在基于科学的鹿管理方面有着悠久的历史。近年来,由于全州许多地区都记录到了黑尾鹿数量不同程度的下降和猎人的猎杀,黑尾鹿种群动态和生态尤其令人担忧。野生动物管理人员的任务是维持或恢复鹿种群,抑制未来潜在的下降幅度,以及稳定种群和随后的猎人机会。因此,增进对黑尾鹿生态学和种群动态的定量了解对整个蒙大拿州都具有重要意义。我们在蒙大拿州西北部的三个研究区域进行了实地研究,这些区域对黑尾鹿生态学的研究较少。实地研究包括评估季节性空间使用和迁徙、种群动态和生命率、夏季饲料营养(特别关注森林干扰)、夏季和冬季栖息地选择以及狩猎季节的秋季迁徙模式。我们还对蒙大拿州东部收集的黑尾鹿监测数据进行了综合种群建模技术的新应用,这为监测和管理提供了一些潜在有用的进步。空间利用和迁徙(第 3 部分):我们在 3 个研究区域捕获了 134 只成年雌性黑尾鹿并戴上项圈,其中卡内伯特-萨利什山脉 41 只、落基山脉前线 49 只和白鱼山脉 44 只。夏季家域的面积通常比冬季大,不过所有研究区域和季节的平均家域面积≤10 平方公里。三个研究区域的鹿都表现出部分迁徙行为,大多数(80-90%)鹿迁徙到不同的夏季家域。研究区域的平均迁徙距离为 23-33 公里,范围从 3-59 公里。不同个体的迁徙时间差异很大,动物在 5 月 7 日至 20 日开始春季迁徙,具体日期取决于研究区域,而所有研究区域秋季迁徙开始的平均日期为 10 月 19 日。多年来,鹿对冬季和夏季的活动范围都非常忠诚,93% 至 100% 的鹿在连续几年返回相同的活动范围,具体日期取决于季节和研究区域。营养状况和生命率(第 4 节):我们以体脂百分比的形式测量营养状况,该百分比是根据超声波臀部脂肪测量和身体状况评分估算的。不同个体鹿的营养状况差异很大,随着冬季的推移,体脂会随着时间的推移而显着下降。在控制捕获日期的影响后,研究区域或捕获的生物学年份之间的体脂没有显着差异。事实上,未校正的体脂百分比中值在研究区域之间是相同的(图 4.2),为 6.9%,这略低于其他地区在冬末观察到的平均值(加州和科罗拉多州的研究中约为 7.2%)。成年雌性年平均存活率为 0.77,各个研究区域的情况相似,每个研究区域的平均估计值分别为 0.79(0.70–0.90;Cabinet-Salish)、0.77(0.68–0.87;Rocky Mountain Front)和 0.75(0.66– 0.86;Whitefish Range)。所有 3 个研究区域在生物年末的早春月份 4 月和 5 月都显示出最高的死亡率。在所有研究区域中,美洲狮捕食是已知的主要死亡原因,造成各地区成年雌性每年 6-11% 的死亡率。我们没有观察到因狩猎而导致的死亡,这在三个研究区域中的两个区域中是预料之中的,因为在研究期间禁止采集无角鹿角。因此,观察到的 21-25% 的年死亡率主要可归因于“自然死亡率”,与之前在蒙大拿州东部研究中观察到的死亡率(5-7%)相比,这一比率很高。2018 年冬季之后,在怀特菲什山脉观察到的春季死亡率脉动包括持续的不良状况和低骨髓脂肪。
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这部改编作品重新诠释了讲故事的力量,三个人分享了他们小时候在大屠杀中的经历。弗兰克的日记讲述了她的家人躲避纳粹的悲惨经历,后来被一个不知名的团体出卖。相比之下,中泽的经典自传讲述了他在 1945 年原子弹轰炸广岛后幸存和失去的故事。本书向读者介绍了三个在二战期间和战后遭受创伤的人。当时还是青少年的桑德勒讲述了他在美国军队服役并在战争期间与英国犹太家庭失去联系的经历。李玉善的故事突出了日本军队对韩国妇女和女孩的性奴役,这是战争中经常被忽视的一个方面。Mizuki 的叙述揭示了二战最后几周的绝望和暴行。Glanzman 的回忆录讲述了他在海军驱逐舰上服役的经历,而 Tyler 的故事则探讨了二战老兵 Charles Tyler 遭受的创伤后应激障碍。Takei 的叙述还探讨了二战期间日裔美国人被迫迁往集中营的情况。Miriam 和她母亲逃离纳粹占领的匈牙利的悲惨经历为该系列增添了另一层复杂性。在最近的一项发现中,Krimstein 汇编了犹太青少年在大屠杀中消失之前写的自传,将他们的希望和梦想变成了现实,这本令人难忘的系列令人难忘。这部图画小说还深入探讨了马塞尔·佩蒂奥的真实故事,他是一名连环杀手,在二战期间专门捕食逃亡的犹太人。图画小说《白鸟》讲述了二战期间生存和抵抗的动人故事。这本书讲述了马克斯和泽娜的故事,他们是两个犹太兄弟姐妹,被纳粹与父母分开。在犹太抵抗战士和彼此的帮助下,他们试图在战争的恐怖中生存下来。同一宇宙的另一部分是萨拉的故事,灵感来自一个真实事件,一个年轻女孩被一个法国家庭藏在法国。这部图画小说还探讨了原子弹及其发展的历史。它讲述了日本家庭主妇铃的故事,她在广岛分崩离析时努力维持家庭团结。此外,它还讲述了一名日本男子 Mizuki 被迫参军并被派往巴布亚新几内亚的故事。准备好深入了解二战的惊心动魄的故事吧!本书重点讲述了二战期间那些反抗美国政府对待日裔美国人的人们所面临的斗争。作者从自己父亲的故事和对现实生活中的人物的采访中汲取灵感,比如冒着生命危险揭露毛特豪森集中营真相的摄影师弗朗西斯科·博伊克斯 (Francisco Boix)。这部图画小说提供了一个引人入胜的故事,探讨了运气、勇气、心碎和多代创伤的主题。这一系列图画小说将带您踏上一场史诗般的旅程,经历战争中最关键的时刻,从曼哈顿计划到塔斯基吉飞行员。见证美国队长和他的盟友在争取自由的斗争中对抗轴心国的勇敢。探索神奇女侠、星女、女超人、扎坦娜等美国女英雄鲜为人知的故事,看看她们如何联手打败敌人。深入了解英国情报界,他们招募女巫来抓捕希特勒的副手。了解战时女性不畏传统、打破障碍的精彩故事。从女子陆军六团八营到苏联“夜间女巫”飞行员,这些女性表明她们也可以成为战士。深入了解战争护士的世界,她们冒着生命危险在混乱和破坏中拯救他人。跟随盟军在瓜达尔卡纳尔战役和诺曼底登陆日取得关键胜利。准备好被二战期间成为非凡英雄的普通人的故事所激励吧。这些图画小说将带您回到过去,让您置身于激烈的战斗之中。本书讲述了诺曼底登陆军事行动和随后在莱特岛的战斗,一支小型船只部队在与日本入侵的激烈对抗中处于劣势。克鲁格的回忆录探讨了她的祖父母在二战期间的经历,而冯内古特的小说则讲述了比利·皮尔格里姆作为二战老兵的经历。一本图文并茂的传记探讨了汉娜·阿伦特在记录大屠杀和极权主义方面的作用,揭示了她如何成为理解这一时期的重要声音。
