主要特点: - 3 秒内完成 DNA、RNA 和蛋白质的定量分析 - 最宽的动态范围和最低的检测限(0.75 – 37500 ng/µL dsDNA) - 无需日常维护或重新校准 - 使用 0.5 – 1.0 µL 样品进行全光谱紫外可见光分析 - 可选择将仪器与比色皿分光光度计、荧光计或两种溶液集成在一起
5. 用 PBS 清洗载玻片以清除残留的血清(参见试剂准备)。 (注2)。 6. 将载玻片浸入含有 PBS 的比色皿中 5 分钟以清洗。更换 PBS 并重复清洗。 7. 使用提供的吸水纸小心地擦干载玻片。细胞制剂必须始终保持湿润。 8. 在每个孔中放入一滴试剂 D。将载玻片放入湿室中,在室温(15-30ºC)下孵育 30 分钟。 9. 清洗(见步骤6)并干燥(见步骤7)。 10. 在载玻片上滴几滴试剂 E,并在其上盖上盖玻片,注意避免形成气泡。
基于 mRNA 的疗法不同于小分子和其他生物制剂,它们代表着重大的分析挑战。为了在竞争激烈的市场中竞争并符合监管标准,需要对临床前/临床测试和批次放行进行 mRNA 表征。更快、更可靠的结果需要创新的解决方案来应对这些分析挑战。核酸浓度测定是通过测定 260 nm 分析波长下的紫外 (UV) 吸光度来测量的。这些吸光度测量允许科学家根据已知的 RNA 消光系数来测量核酸浓度。它们在 260 nm 处的最大吸光度峰的光谱特征与核酸浓度成正比。这种紫外核酸定量方法的优点是简单、直接,并且只需要少量样品即可进行测量。然而,分析实验室遇到的一个挑战是其特异性的局限性,因为吸收相似波长的基质成分会导致随后的核酸浓度测定不准确。我们观察到,当前传统的基于比色皿的 UV 解决方案中使用 1 cm 比色皿和/或较小固定光程长度的标准固定光程长度 UV 仍然无法解决给定测量的质量问题,并且需要数小时的调查时间。使用稀释因子(这会增加制备时间和变异性)和固定光程长度测量来确定溶液中 UV 发色团的浓度,并不能提供一种可在公司或流程内平台化的易于转移且可靠的方法。如今,研究人员可以在存在化学和核酸杂质(尤其是 DNA 和 dsRNA)的情况下选择性地量化核酸吸光度。分析软件使用全光谱数据和高级算法来识别核酸杂质并提供校正的核酸浓度。
膜片钳设备 ................................................................................................180 - 183 双层工作站 完整的双层工作站 ..............................................................................................184 双层工作站组件列表 ..............................................................................................185 双层钳放大器,BC-535 ......................................................................................186 - 187 法拉第笼,FC 系列 ......................................................................................................188 双层腔室和比色皿,BCH-M13 和 BCH-M22 .............................................................189 灌注模型 BCH-P 双层腔室 .............................................................................................190 BPS-2 和 LPF-8 双层灌注系统 .............................................................................191 LPF-8 贝塞尔滤波器 .............................................................................................................191 SUNStir-3(SUNStir 控制器、SUN-1 灯和 SPIN-2 搅拌板) ................................................................................................................192 - 193 RAC-14 仪器架................................................................................................194 BLM 入门套件 ......................................................................................................194 HST-1 MBB 头部载物台支架 ................................................................................194 BLM-TC Bilaye
4.3.4.1 程序。使用通风橱中的蒸汽浴或加热板蒸发 25 mL 容量瓶中的 2.0 mL 推进剂和 0.2 mL 1N 氢氧化钠。用氮气吹扫容量瓶以促进蒸发。用 2.0 mL 硫酸铁铵试剂和 2 mL 无氯蒸馏水溶解残留物。加入 1.0 mL 饱和硫氰酸汞试剂,旋涡混合,用无氯蒸馏水稀释至 25 mL 刻度。将容量瓶倒置几次再次混合,并在黑暗中静置 15 至 30 分钟。将蒸馏水的吸光度设为“0”后,在 5.0 cm 比色皿中测量试剂空白和样品溶液在 460 nm 下的吸光度。从样品吸光度中减去试剂空白的吸光度。根据4.3.4.3构建的校准曲线,测定氯化物含量。
比色皿流动池通过凝胶耦合到荧光物镜,以将最大量的光传输到收集光学器件(见图 2)。荧光物镜收集并将三个激光焦点发射的荧光聚焦到各个收集光纤上。然后,收集光纤将发射的光传输到收集光学器件上。收集光学器件经过精心设计,可从每个激光器实现最大量的信号检测。这是通过将最高波长传输到第一个 PMT 并通过一系列长通二向色镜将较低波长反射到下一个 PMT 来实现的。每个 PMT 前面的带通滤光片允许对收集的信号进行微调。由于反射比透射更有效,因此这种设计大大提高了仪器的多色检测能力(见图 3)。
读数 七段,3 1/2 位数字,发光二极管显示 波长范围 激发 340-750,使用石英卤素灯(使用汞灯时为 254、313 nm) 发射 340-650(使用红色敏感 PMT 时为 340-750 nm) 波长选择 可互换,外部插入过滤器 灵敏度 10 皮克/毫升(异硫氰酸荧光素)15 万亿分之一(二水硫酸奎宁,QSO 4 ) 浓度范围 0-1999 分辨率 满量程的 0.05% 荧光线性通常在 1% 以内。检测器 光电倍增管 标准样品架 可容纳 12 x 75 毫米圆形比色皿,并提供附件选项。温度范围 工作时 10 至 38 ° C,存储时 0 至 75 ° C。湿度 <95% 输出 0 - 200 mVDC,荧光线性 电源要求 100、120、220、240 VAC,50/60 Hz,可切换,75 瓦 尺寸 宽 39 厘米 (15 3/8") x 深 29 厘米 (11 1/2") x 高 13 厘米 (4 1/2") 重量 型号 450-000、450-003:7.3 千克 (16 磅。),型号 450-005:8.2 千克 (18 磅)。
DNA质粒的转化可能对克隆和蛋白质表达有益。在DNA克隆的初始步骤涉及质粒和基因插入物的限制消化,然后连接到质粒上的插入片段后,在细胞复制质粒的复制之前,仍然存在单链DNA尼克斯,必须由宿主细胞的DNA修复机器修复。细菌菌株(例如常见克隆菌株DH5α)已开发具有特定于克隆应用的特征。3已生成其他细菌菌株,例如BL21菌株,以促进靶基因在纯,完整,转化的质粒上受控的蛋白质表达。4这些细胞应变修饰的例子包括淘汰非必需的蛋白酶以最大化靶基因的蛋白质表达。请记住,可以在转化中使用许多不同类型的细菌菌株,所有这些菌株对不同的应用都有不同的修改。由于转化技术利用了细菌接受基因组DNA的能力,因此已经建立了特定的方法来最大程度地提高基因转移效率。通常,这些技术涉及某种形式的刺激,这些刺激使细菌外膜在短时间内更可渗透,从而可以摄取DNA。当前使用的两种最常见的转化技术是电击细菌菌株的化学胜任细菌菌株的热冲击(电击)。这些细胞的热休克在细胞膜中打开孔,允许进入质粒DNA。在前者中,用氯化钙处理细胞,以使细胞膜更可渗透,并促进质粒DNA附着在细菌细胞膜上。5电穿孔在细菌细胞壁中产生孔,并通过溶液中细胞的电脉冲进入质粒DNA。6平均而言,相对于热震动的转化,电穿孔在质粒摄取中产生较高的效率,并且不需要对细胞的任何化学处理。但是,电穿孔更昂贵,因为它使用电氧化器和专门的比色皿将电荷传递给溶液中的电池。必须根据可用资源和实验的所需转换效率做出方法的选择。转化后,细胞必须在营养丰富培养基中短暂生长(通常使用SOC培养基)中从冲击中恢复过来,然后可以将细胞粘贴在包含适当抗生素的LB琼脂平板上,以选择成功接受的细胞
Izza Usman Bajwa 1 , Samuel Sigaud 1* 1 Accumol Inc.,加拿大艾伯塔省卡尔加里 * samuel.sigaud@accumol.com 摘要 磁性粒子通常用于从血液样本中分离特定类型的细胞。从这些细胞中提取的基因组 DNA 中的残留粒子会干扰紫外吸收分光光度法的浓度测量。在本研究中,我们在谱系特异性嵌合体分析工作流程中确定了紫外分光光度法 DNA 定量的不准确程度。我们发现残留磁性粒子和 RNA 的存在会导致对 DNA 浓度的估计过高。简介使用磁性粒子从血液样本中分离特定类型细胞是诊断或免疫遗传学实验室的常用技术。例如,谱系特异性嵌合体分析的典型工作流程包括从血液样本中分离 T 淋巴细胞、髓细胞或其他细胞类型,然后提取基因组 DNA,然后进行 PCR 或 qPCR 1 。提取后通常会检查 DNA 浓度和质量,以确保下游 PCR 反应在最佳条件下进行。根据 DNA 提取方法,在最终 DNA 样本中可能会发现用于细胞分离步骤的残留磁性粒子。虽然这些粒子通常不会干扰后续的 PCR 反应,但它们可能会影响 DNA 定量步骤。紫外吸光度分光光度法是评估 DNA 浓度和纯度最广泛的方法。它速度快,不需要使用标准曲线或特殊试剂。它使用非常少量的 DNA,尤其是使用无比色皿分光光度计(如 NanoDrop 仪器(ThermoFisher Scientific))进行时。然而,紫外吸光度对 DNA 2 不具有选择性。浓度测量可能会受到污染物的影响,例如 RNA、蛋白质、DNA 提取过程中使用的化学品或用于细胞分离的磁性粒子。为了克服这些问题,已经开发出荧光 DNA 结合染料 3。这些化合物与双链 DNA 结合时会显著增强荧光。它们具有高度的特异性和灵敏度,现在被认为是 DNA 定量的黄金标准。然而,与紫外分光光度法相比,荧光测量更耗时,需要使用昂贵的试剂,并需要实现 DNA 标准曲线。由于这些原因,当许多样本需要快速处理时,例如在分子诊断实验室中,紫外分光光度法仍然是确定 DNA 浓度的首选方法。本研究的目的是确定在谱系特异性嵌合体分析工作流程中紫外分光光度法 DNA 定量的不准确程度。我们研究了残留磁粒子对 DNA 浓度和质量测量的影响,并提出了提高测量准确性的建议。
A. Hamja, a) R. Florentin、S. Chénais、S. Forget 激光物理实验室,巴黎北索邦大学,CNRS,UMR 7538,F-93430 Villetaneuse,法国 a) 通讯作者:mdamir.hamja@sorbonne-paris-nord.fr 摘要 液态染料激光器一直被认为是可见光范围内理想的可调谐激光源,但体积庞大、价格昂贵,并且需要复杂的染料循环系统。我们在此介绍一种依靠低成本蓝色激光二极管作为泵浦源和密封染料电池(无流动电路)的系统,从而形成一种结合了固态设备的便利性和尺寸以及液态有机激光器的稳定性的设备。获得了非常高的光稳定性(高达 1.2×10 9 个脉冲,或 1 kHz 下 12 天),比在类似条件下工作的固态染料激光器高出 5 个数量级。发现在低重复率下可获得的脉冲数受分子自扩散限制,因此与总比色皿体积有关。相反,重复率限制为几 kHz,这表明热效应比三重态粒子群效应发挥更大的作用。热效应通过建立强大的负热透镜来抑制激光:通过谐振器设计校正此热透镜的非异常部分,可将重复率提高到 14 kHz,并可能进一步优化。这项工作展示了一种构建现成的、紧凑的、低成本的、方便的可见光范围内可调脉冲激光器的途径,其稳定性优于有机固态激光器。最近,高功率蓝色和紫色激光二极管 1 的出现促使人们重新考虑许多以前需要昂贵的可见光固态激光器的应用:例如,当用激光二极管取代泵浦激光器时,钛宝石激光器的成本可以下降一个数量级。2 由于染料激光器在光谱的蓝绿区域表现出大的吸收带,它们也非常适合 GaN 二极管泵浦,并且可能会遵循相同的路线。3–8 然而,虽然液态染料激光器是第一种可调谐激光器,可用于光谱学、9 医学 10 或传感 11,但如今它们更加保密,主要是因为染料溶液电路的处理麻烦而复杂。事实上,在那些激光器中,增益介质必须通过主动流不断补充:这可以避免三线态的积累,缓解热问题,并疏散光漂白分子以实现稳定的激光发射。染料电路的复杂性是许多应用的瓶颈,尽管可以通过使用光流体装置在一定程度上降低这一问题。12,13 为了克服这一困难,可以实施两种解决方案:固态增益介质或无循环液体胶囊。虽然固态染料激光器被认为非常有前途(特别是在有机半导体出现之后,这引发了人们制造电泵有机激光二极管的希望 14–16 ),但它们也存在重大缺陷。主要缺陷是光稳定性低,无法在高温下工作