溴化乙锭替代品溴化乙锭是分子生物学中使用最广泛的DNA染色。但是,由于与这种化学物质相关的安全性和健康问题,人们对使用替代的DNA污渍的使用越来越兴趣,这些染色被认为是更安全的,可以将其处置为下水道,而不是危险的废物处理过程。如果您使用溴化乙锭进行DNA染色,请考虑使用以下替代方法,这些替代方法是通过低毒性,高灵敏度和出色稳定性的组合来优于溴化乙锭。
提供: - 存储:与传统的溴化乙锭染色相比,可将植物器DNA染色的植物器DNA染色可用作较安全的替代品,与琼脂糖凝胶中的DNA和RNA检测相比,可以用作更安全的替代品。与溴化乙锭相比,它的毒性和诱变性低。应用溴化乙锭的非癌替代性。协议:预制:
RNA:DNA比率已被用作各种海洋器官中生长速率的生化指标(Sutcliffe 1970,Buckley&Lough 1987,Bulow 1987,Clemmesen 1987,Clemmesen 1987,1988,Clarke等,Clarke等,1988,Raae等。 1988,Mordy&Carlson 1991),包括Phyto-Plankton(Dortch等人 1983,1985,Mordy&Carlson 1991)。 由于RNA和DNA的化学相似性,通过经典方法分别量化每种都需要冗长的提取。 此外,通过分光光度法(紫外线浸泡)和量热法(使用RNA和二苯胺的脑甲醇用于DNA)的最终量化很困难,从而使低剂量和干扰因提取其他细胞成分以及除核酸以外的许多细胞成分(例如 Herbert等。 1971,Cattolico 1978)。 可以通过使用荧光染色来实现更大的敏感性,但是可用的方法仍然是某种程度上 - 繁琐,耗时且遇到一些潜在问题(Holm-Hansen等人。 1968,Thoresen等。 1983,Clemmesen 1988)。 例如,在Prasad等人开发的广泛使用的方法中。 (1972),总核酸用溴化乙锭测量,溴化乙锭与DNA和RNA反应,并产生高度荧光化合物。 然后用酶RNase破坏RNA,并测量DNA引起的荧光。 然后从差异计算 RNA con-中心1988,Raae等。1988,Mordy&Carlson 1991),包括Phyto-Plankton(Dortch等人 1983,1985,Mordy&Carlson 1991)。 由于RNA和DNA的化学相似性,通过经典方法分别量化每种都需要冗长的提取。 此外,通过分光光度法(紫外线浸泡)和量热法(使用RNA和二苯胺的脑甲醇用于DNA)的最终量化很困难,从而使低剂量和干扰因提取其他细胞成分以及除核酸以外的许多细胞成分(例如 Herbert等。 1971,Cattolico 1978)。 可以通过使用荧光染色来实现更大的敏感性,但是可用的方法仍然是某种程度上 - 繁琐,耗时且遇到一些潜在问题(Holm-Hansen等人。 1968,Thoresen等。 1983,Clemmesen 1988)。 例如,在Prasad等人开发的广泛使用的方法中。 (1972),总核酸用溴化乙锭测量,溴化乙锭与DNA和RNA反应,并产生高度荧光化合物。 然后用酶RNase破坏RNA,并测量DNA引起的荧光。 然后从差异计算 RNA con-中心1988,Mordy&Carlson 1991),包括Phyto-Plankton(Dortch等人1983,1985,Mordy&Carlson 1991)。 由于RNA和DNA的化学相似性,通过经典方法分别量化每种都需要冗长的提取。 此外,通过分光光度法(紫外线浸泡)和量热法(使用RNA和二苯胺的脑甲醇用于DNA)的最终量化很困难,从而使低剂量和干扰因提取其他细胞成分以及除核酸以外的许多细胞成分(例如 Herbert等。 1971,Cattolico 1978)。 可以通过使用荧光染色来实现更大的敏感性,但是可用的方法仍然是某种程度上 - 繁琐,耗时且遇到一些潜在问题(Holm-Hansen等人。 1968,Thoresen等。 1983,Clemmesen 1988)。 例如,在Prasad等人开发的广泛使用的方法中。 (1972),总核酸用溴化乙锭测量,溴化乙锭与DNA和RNA反应,并产生高度荧光化合物。 然后用酶RNase破坏RNA,并测量DNA引起的荧光。 然后从差异计算 RNA con-中心1983,1985,Mordy&Carlson 1991)。由于RNA和DNA的化学相似性,通过经典方法分别量化每种都需要冗长的提取。此外,通过分光光度法(紫外线浸泡)和量热法(使用RNA和二苯胺的脑甲醇用于DNA)的最终量化很困难,从而使低剂量和干扰因提取其他细胞成分以及除核酸以外的许多细胞成分(例如Herbert等。 1971,Cattolico 1978)。 可以通过使用荧光染色来实现更大的敏感性,但是可用的方法仍然是某种程度上 - 繁琐,耗时且遇到一些潜在问题(Holm-Hansen等人。 1968,Thoresen等。 1983,Clemmesen 1988)。 例如,在Prasad等人开发的广泛使用的方法中。 (1972),总核酸用溴化乙锭测量,溴化乙锭与DNA和RNA反应,并产生高度荧光化合物。 然后用酶RNase破坏RNA,并测量DNA引起的荧光。 然后从差异计算 RNA con-中心Herbert等。1971,Cattolico 1978)。 可以通过使用荧光染色来实现更大的敏感性,但是可用的方法仍然是某种程度上 - 繁琐,耗时且遇到一些潜在问题(Holm-Hansen等人。 1968,Thoresen等。 1983,Clemmesen 1988)。 例如,在Prasad等人开发的广泛使用的方法中。 (1972),总核酸用溴化乙锭测量,溴化乙锭与DNA和RNA反应,并产生高度荧光化合物。 然后用酶RNase破坏RNA,并测量DNA引起的荧光。 然后从差异计算 RNA con-中心1971,Cattolico 1978)。可以通过使用荧光染色来实现更大的敏感性,但是可用的方法仍然是某种程度上 - 繁琐,耗时且遇到一些潜在问题(Holm-Hansen等人。1968,Thoresen等。 1983,Clemmesen 1988)。 例如,在Prasad等人开发的广泛使用的方法中。 (1972),总核酸用溴化乙锭测量,溴化乙锭与DNA和RNA反应,并产生高度荧光化合物。 然后用酶RNase破坏RNA,并测量DNA引起的荧光。 然后从差异计算 RNA con-中心1968,Thoresen等。1983,Clemmesen 1988)。 例如,在Prasad等人开发的广泛使用的方法中。 (1972),总核酸用溴化乙锭测量,溴化乙锭与DNA和RNA反应,并产生高度荧光化合物。 然后用酶RNase破坏RNA,并测量DNA引起的荧光。 然后从差异1983,Clemmesen 1988)。例如,在Prasad等人开发的广泛使用的方法中。(1972),总核酸用溴化乙锭测量,溴化乙锭与DNA和RNA反应,并产生高度荧光化合物。然后用酶RNase破坏RNA,并测量DNA引起的荧光。RNA con-中心
acridine橙色(AO)是阳离子的日子,可以穿透与双DNA链相互作用后,发射绿色荧光的活细胞的细胞膜。溴化乙锭是无法穿透活细胞的核酸染色。双重染色可用于区分活细胞,早期凋亡,晚期凋亡,坏死和自噬小体。因为AO可以通过细胞膜扩散,从而使核和自噬体显得绿色。溴化乙锭(EB)只有当细胞整合失去导致核为橙色时,才能吸附。因此,活细胞呈现出同质的绿色核。早期凋亡细胞具有
f:在紫外线桌上,用DNA染料着色的帮派非常明亮,但照片中几乎看不到帮派。那是什么?a:一些溴化乙锭照片过滤器非常狭窄,因此实际上将它们排除在其他波长之外,例如在这种情况下所需的绿色区域。使用宽带照片过滤器或滤波器进行SYBR®绿色。
使用凝胶提取的扩增子产物可能会导致测序性能降低,这是因为插入染料(如溴化乙锭)和暴露于紫外线辐射会造成固有的损坏。如果使用已用染料染色的凝胶提取产物,建议在文库制备和测序之前对其进行额外的扩增,以去除损坏和/或染料。
10.12.1 电泳凝胶和受污染的非尖锐碎片 ...................................................................................................................... 36 10.12.2 受污染的尖锐物品 ...................................................................................................................................... 36 10.12.3 储备溶液 ...................................................................................................................................................... 36 10.12.4 用过的缓冲溶液 ............................................................................................................................................. 37 10.12.5 有机荧光染料的吸附处理 ............................................................................................................................. 37 10.12.6 仅针对溴化乙锭的化学解毒处理 ............................................................................................................. 38 10.13 DEA 管制物质 ............................................................................................................................................. 38
Thermo Scientific Genejet基因组DNA纯化试剂盒通过从200 µL血液中分离基因组DNA和5 mg的哺乳动物组织,遵循所述方案来获得资格。纯化的基因组DNA的A260/280比为≥1.7。在琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色后,看到一个超过30 kb的单个带。通过限制酶对单拷贝基因和消化的PCR扩增来评估基因组DNA的功能质量。
描述DNA梯子步骤100长适合用作估计琼脂糖凝胶中双链DNA分子的长度和数量分析的标准。从质粒DNA中制备的梯子中包含14至3000 bp的14个DNA片段。有关琼脂糖凝胶的简单参考,500 bp和1500 bp片段是双重浓缩的。dna梯子步骤100长。该梯子可以用溴化乙锭或SYBR绿色染料染色。DNA分子量标记