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高通量微量滴定板筛选测定法，以量化和区分双物种生物膜中的物种
摘要：致病性细菌在感染过程中形成生物膜，而多生物生物膜是最常见的表现。生物膜附着，成熟和/或抗生素敏感性主要通过微量滴定板测定进行评估，其中将细菌染色以通过光吸光度或荧光发射来实现生物量的定量。但是，目前不可能使用这些方法在双物种或多种物种生物膜中区分不同物种。菌落形成单位从选择性琼脂培养基上的均质双物种生物膜计数允许物种分化，但在高通量筛选方面很耗时。因此，迫切需要使用可靠，可行和快速的方法来研究多种物种和双物种群落的行为。这项研究表明，铜绿假单胞菌和Burkholderia cenocepacia菌株表达了特定的荧光或生物发光蛋白，与依赖于测量总生物群的其他方法相比，双重物种生物纤维的有效研究更加有效。结合荧光和生物发光测量值可以独立地分析生物膜内不同微生物物种，表明在双物种生物膜生长期间，每个人的存在程度随着时间的流逝而存在。这项工作中开发的定量策略是可重现的，建议使用可以组成构成表达泛光或生物发光蛋白的菌株进行高通量微量液板方法的生物膜研究。
定量的经典化学分析滴定酸 -
弱酸是一种在产生氢（H 3 O +）离子水溶液中部分电离的化合物。任何弱酸解离的一般方程式可以写为：HA（aq） + H 2 O（l）a - （aq） + H 3 O +（aq）（1）添加强碱会导致中和反应导致氢氧化离子（oh -oh）与水合产生水：hydronium的水：在中和反应中，根据Le Chatelier的原理将方程1中的平衡移到右侧。neu tralization过程可以写成方程（1）和（2）的总和：ha（aq） + oh - （aq）a - （aq） + h 2 o（l）（l）（3）未知解的浓度可以通过测量添加的滴定剂量达到等效点来确定。当所有酸被碱中和时，等效点发生。将通过使用在等价点上更改颜色的指标来确定
![b'figure 1。类似药物的小分子与miR21结合。我们基于共同的2--（（5-（5-（5-（piperazin-1-基）吡啶素2-基）氨基）吡啶[3,4-D]吡啶蛋白-4（3H） - 一种结构，我们合成了一系列密切相关的化合物。两种称为45（a）和52（b）的化合物在中间NM范围内具有很强的结合活性。通过移动单个氮的位置产生的化合物（表1）显示出显着降低的亲和力（5-10倍差）（C）。进行了1d 1 H NMR配体检测到的滴定，以评估候选化合物的结合：将浓度的RNA添加到含有100 m的小分子的溶液中，该溶液中含有50 mM pH 6.5的50 mM脱位Tris的小分子，以及250 mm nacl，50 mm kcl，50 mm kcl和2 mm kcl和2 mm mmmgcl 2。随着量增加的小分子与RNA结合，1 h线宽增加，NMR峰高度相应降低。相对于内标（DSA），从峰高的降低降低计算结合小分子的比例。曲线的饱和度为1，表明存在具有子-UM亲和力的主要单位位点。相比之下，无关的RNA结合化合物Palbociclib以低得多的值饱和，并显示了几乎线性滴定曲线，这表明了非特异性结合（有关所有测试化合物的结构，请参见表1）。可以通过拟合数据](/simg/a/a5e6054f458942da9d0fd315e2dff3ce571b5880.webp)
b'figure 1。类似药物的小分子与miR21结合。我们基于共同的2--（（5-（5-（5-（piperazin-1-基）吡啶素2-基）氨基）吡啶[3,4-D]吡啶蛋白-4（3H） - 一种结构，我们合成了一系列密切相关的化合物。两种称为45（a）和52（b）的化合物在中间NM范围内具有很强的结合活性。通过移动单个氮的位置产生的化合物（表1）显示出显着降低的亲和力（5-10倍差）（C）。进行了1d 1 H NMR配体检测到的滴定，以评估候选化合物的结合：将浓度的RNA添加到含有100 m的小分子的溶液中，该溶液中含有50 mM pH 6.5的50 mM脱位Tris的小分子，以及250 mm nacl，50 mm kcl，50 mm kcl和2 mm kcl和2 mm mmmgcl 2。随着量增加的小分子与RNA结合，1 h线宽增加，NMR峰高度相应降低。相对于内标（DSA），从峰高的降低降低计算结合小分子的比例。曲线的饱和度为1，表明存在具有子-UM亲和力的主要单位位点。相比之下，无关的RNA结合化合物Palbociclib以低得多的值饱和，并显示了几乎线性滴定曲线，这表明了非特异性结合（有关所有测试化合物的结构，请参见表1）。可以通过拟合数据
b'figure 1。类似药物样的小分子与MIR21结合。我们基于常见的2--（（5-（5-（piperazin-1-基）吡啶-2-基）氨基）吡啶[3,4-D]吡啶蛋白-4（3H） - 一种结构，并分析了它们与PRE-MIR-21结合使用通用NMR ASSAIN 1，2。在NM中部范围内，称为45（a）和52（b）的两种化合物具有很强的结合活性。通过移动单个氮的位置产生的化合物（表1）显示出明显降低的亲和力（5-10倍差）（C）。1 H NMR配体检测到的滴定，以评估候选化合物的结合：将浓度的RNA添加到含有100 m小分子的溶液中，该溶液中含有50 mM pH 6.5的氘化TRI的缓冲液中的小分子，以及250 mm NACL，NACL，50 mm KCL，KCL和250 mm KCL和2 mmmmmmmmmgcl 2。随着增加量的小分子与RNA结合，1小时线宽增加，而NMR峰高相应降低。相对于内标（DSA），从峰高的降低降低来计算结合小分子的分数。曲线饱和为1的值表示存在具有子-UM亲和力的主要单位位点；相比之下，无关的RNA结合化合物Palbociclib以低得多的值饱和，并显示了几乎线性滴定曲线，这表明了非特异性结合（有关所有测试化合物的结构，请参见表1）。可以通过将数据点拟合到结合等温线来计算近似结合常数。化合物52的数据拟合对应于近似K d = 200 nm，而化合物45和49（表1）均具有K d = 600 nm。
通过体外微滴定在Bio相关培养基中评估PALBOCICLIB的pH转移药物相互作用：一种分析QBD驱动的RP-HPLC方法
在本研究中，通过使用分析质量（QBD）方法（QBD）方法，研究了一种弱基本的细胞周期蛋白依赖性激酶4/6抑制剂的pH依赖性溶解度和溶解（PB），用于反向相位高性能液相色谱（RP-HPLC）方法。使用RP-HPLC量化PB的集成分析方法是由三级三阶段的盒子– Behnken设计设计的，具有数值和图形优化。在体外微滴度上，在生物相关的培养基中进行了pH换移实验，以预测Pb依赖pH的药物相互作用（DDI）行为。RP-HPLC方法利用盒子 - Behnken三阶段三阶段设计开发了针对PB的特定的。优化的方法导致Pb的有效和更快的色谱分离，其保留时间值较低，并具有令人满意的峰对称性和低峰尾部。基于体外微渗透研究，观察到PB具有典型的弱碱基pH依赖性溶解度和溶解行为，其释放范围从98.96％到102.66％，在模拟的胃液pH 1.2中，通过添加了通过添加禁食状态的模拟肠道液体pH 6.5。总体而言，我们的发现表明，体外微溶解方法可以准确预测pH依赖性DDI的强度，并且在临床DDIS研究之前使用这些技术的使用可能允许对体内pH依赖性药物的吸收充分预测。
利用 5'UTR 二级结构精确滴定救援蛋白翻译的单转录本敲低-替换策略
基因治疗的一个主要目标是用功能性基因替换有缺陷的基因。一个重大的障碍是，蛋白质的表达不足或过度表达可能像编码突变一样容易导致疾病。目前显然需要将经过实验验证的基因治疗策略转化为临床应用。为了解决这个问题，我们开发了一个模块化的单转基因表达系统，用于用生理表达的变体替换目标基因。为了实现这一点，我们首先设计了一系列 5'UTR“衰减器”序列，这些序列可以预测地减少配对基因的翻译。这些序列通过允许控制高表达、普遍存在的启动子的翻译，提供了广泛的通用用途。重要的是，我们证明这允许通过在单个转录本上将 microRNA 适应的 shRNA 与其各自的替代基因配对来实现全新的敲除和救援应用。这种矫正方法的一个值得注意的候选对象是退行性且致命的运动神经元疾病 ALS。很大一部分非特发性 ALS 病例是由 SOD1 基因的各种突变引起的，随着治疗 ALS 的临床试验的启动，重要的是要考虑到功能丧失机制对其病理的影响与任何其他因素一样大。作为治疗由异质突变引起的单基因疾病的通用方法，我们通过改变衰减剂的强度证明了对稳定细胞系中 SOD1 替换的完全和可预测的控制。
一种新型的滴定截断变体，与日本家庭中的家族性扩张心肌病有关，其功能分析在基因组编辑的mod中
摘要扩张的心肌病（DCM）是心力衰竭的常见原因。ttn是DCM的代表性致病基因，主要作为截断变体呈现。但是，在健康个体中也发现了TTN截断变体，因此评估每个变体的致病性很重要。在这项研究中，我们分析了一名男性日本患者的67个心肌病相关基因，该患者因复发性严重心力衰竭而住院，并确定了一种新型的截断变体TTN SER17456ARG FS*14。此TTN截断变体位于A波段区域。此外，患有心力衰竭的患者的母亲具有相同的变体，而父亲和没有心力衰竭的兄弟并没有带有这种变体。检查与截断变体相关的功能变化，对H9C2细胞进行了基因组编辑，以生成具有同源截断变体的细胞。使用全反击甲酸分化细胞，发现骨骼肌肌动蛋白和心肌动蛋白的mRNA表达分别增加和减少，与DCM或心力衰竭患者的已知变化一致。相比之下，用作对照的另一个带有Titin截断变体的细胞显示与心力衰竭相关的基因没有变化。总而言之，我们在家族性DCM患者中发现了一种新型的TTN截断变体，并使用相对简单的细胞模型证实了其功能变化。新型截断变体被确定为致病性和致病突变。（int heart j Advance出版）关键词：基因组编辑，心力衰竭
药物滴定和神经性疼痛的审查
每天两次从100mg开始，然后逐渐滴定剂量，直到疼痛缓解（每3天增加每3天增加100mg）。每天3或4次的剂量通常足以维持无痛状态。最大每日剂量= 1600mg缓解疼痛逐渐降低至有效剂量最低。一旦稳定优化平板电脑的强度
通过滴定测定氯离子浓度（...
图1左瓶：在滴定终点之前，添加SCN-离子会导致硫氰酸硫氰酸酯沉淀物的形成，从而使溶液混浊。在这里，由于奶酪提取物的颜色，溶液还具有微弱的黄色。中心瓶：在端点，所有游离银离子都被SCN-沉淀。丝毫过量的SCN-与硫酸铵指示剂的Fe 3+离子形成了深红色的复合物，从而使溶液略有橙色/红色。右瓶：如果添加scn-持续超过终点，则形成进一步的硫代氰酸酯复合物，并产生更强的深红色结果。nb：当观察到深红色的第一个痕迹时，应停止滴定。使用不完全滴定的参考瓶进行比较是确定红色首次出现的有用方法。
