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有效地从cubriadus nantongensis x1t中的有机磷杀虫剂降解基因opdb通过红色系统
摘要：Cupriavidus Nantongensis X1 T是Cupriavidus属的一种菌株，可以降解八种有机磷杀虫剂（OPS）。Cupriavidus物种中的常规遗传操作是耗时，难以控制的。簇状的定期间隔短的短滴虫重复（CRISPR）/相关蛋白9（CAS9）系统已成为用于原核生物和真核生物的基因组编辑的强大工具，这是由于其简单，效率和准确性。在这里，我们将CRISPR/ CAS9与红色系统相结合，以在X1 T菌株中执行无缝的遗传操纵。构建了两个质粒，PACASN和PDCRH。 PACASN质粒含有CAS9核酸酶和红色重组酶，PDCRH质粒包含X1 T菌株中有机磷的水解酶（OPDB）的双单引导RNA（SGRNA）。 对于基因编辑，将两个质粒转移到X1 T菌株中，并在其中发生了遗传重组的突变菌株，从而导致OPDB的靶向缺失。 同源重组的发生率超过30％。 生物降解实验表明，OPDB基因负责有机磷杀虫剂的分解代谢。 这项研究是第一个使用CRISPR/ CAS9系统来靶向Cupriavidus属的基因靶向的，它进一步了解了我们对X1 T菌株中有机磷杀虫剂降解过程的理解。构建了两个质粒，PACASN和PDCRH。PACASN质粒含有CAS9核酸酶和红色重组酶，PDCRH质粒包含X1 T菌株中有机磷的水解酶（OPDB）的双单引导RNA（SGRNA）。对于基因编辑，将两个质粒转移到X1 T菌株中，并在其中发生了遗传重组的突变菌株，从而导致OPDB的靶向缺失。同源重组的发生率超过30％。生物降解实验表明，OPDB基因负责有机磷杀虫剂的分解代谢。这项研究是第一个使用CRISPR/ CAS9系统来靶向Cupriavidus属的基因靶向的，它进一步了解了我们对X1 T菌株中有机磷杀虫剂降解过程的理解。