通过RNA引导的核酸酶(例如SP Cas9)编辑的基因组编辑,已用于许多不同的植物特种中。然而,尚未得到充分记录在多大程度上可以通过多重独立基因座对准。在这里,我们基于高度内含器优化的ZCAS9I基因开发了一个工具包,该基因允许组装核酸酶构建体,该核酸酶构建体表达高达32个单导RNA(SGRNA)。我们使用此工具包探索了两个主要模型物种中多路复用的限制,并报告了无基因八个八个八杆的分离(8 3)Nicotiana Benthamiana和Duodecuple(12 3)拟南芥Thaliana thaliana突变线(分别是T 1和T 2,分别是T 1和T 2)。我们开发了新的本坦氏菌(N. benthamiana)的新颖的反式标记,最重要的是SL -Fast2,可与良好的拟南芥种子植物植物标记物和FCY-upp相当,并基于在存在先例的情况下产生有毒的5-氟中性含量。用九个不同的sgrNA靶向八个基因,并依靠fcy-upp选择非转基因t 1,我们确定了n。benthamiana突变型的n。benthamiana突变线,并具有惊人的高效效率:所有ana-属于所有基因的植物(大约112/11/11/11 target serited)。此外,我们在A. thaliana的24个sgrnas阵列获得了12个基因。效率在a中的显着较低。thaliana,我们的结果表明CAS9的可用性是这种高阶多路复用应用程序中的限制因素。我们通过表型筛选和扩增子测序的结合来识别十二指肠突变系。所呈现的资源和结果为如何使用多路复用来生成复杂的基因型或在功能上询问候选基因的基团。
•加拿大消防机构平均花费10亿美元用于直接消防费用。这些支出正在上升•加拿大人的健康和安全 - 撤离 - 烟雾。•保护财产和关键基础设施。•增加野火灾难的数量。•传统的火灾抑制方法(例如,机组人员,油轮)可能达到了经济和身体有效性的极限。
Nicotiana Benthamiana是一种在植物生物学和生物技术中广泛采用的模型生物。自2012年最初发行以来,其基因组研究已落后。为了进一步提高其实用性,我们生成和相位的同种异体二磷酸n. benthamiana的完整的2.85 GB基因组组装,所有19个centromeres和38个端粒完全分析。我们发现,尽管甲酸溶剂粒粒子被TY3/GYPSY逆转录座子广泛主导,但基于卫星的centromeres在N. Benthamiana中令人惊讶的是,在N. Benthamiana中,有11个Cendromeres中有11个由超级范围层面卫星阵列展出。有趣的是,富含卫星的和无卫星的丝粒被独特的吉普赛逆转录子广泛入侵,其中CENH3蛋白更优选地占据了CENH3蛋白,这表明它们在中心仪功能中至关重要。我们证明rDNA是丝粒卫星的主要起源,线粒体DNA可以用作Centromere的核心成分。亚基因组分析表明,卫星阵列的出现可能会在多倍体化后基因组休克期间驱动着丝粒的形成和成熟。总的来说,我们提出了本氏菌Centromeres通过Neocentromere的形成,卫星扩张,逆转录转座子富集和mtDNA整合而发展。
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1 博洛尼亚大学物理与天文学系,意大利博洛尼亚 40127;claudia.sala3@unibo.it 2 丹麦技术大学国家食品研究所基因组流行病学研究组,Kemitorvet, DK-2800 Kgs, 2800 Lyngby,丹麦;hamr@food.dtu.dk (HM);tnpe@food.dtu.dk (TNP);casper.sahl.poulsen@sund.ku.dk (CP);fmaa@food.dtu.dk (FMA);rshe@food.dtu.dk (RSH);sjpa@food.dtu.dk (SJP) 3 德国联邦风险评估研究所生物安全部,德国柏林 12277; Josephine.gruetzke@bfr.bund.de 4 高致病性病毒,ZBS 1,生物威胁和特殊病原体中心,罗伯特·科赫研究所,13353 柏林,德国;BrinkmannA@rki.de(AB);NitscheA@rki.de(AN) 5 APC 爱尔兰微生物组和 Vistamilk,Teagasc 食品研究中心,Moorepark,T12 YN60 Co. Cork,爱尔兰;paul.cotter@teagasc.ie(PDC);fiona.crispie@teagasc.ie(FC) 6 监测和实验室服务部,动物和植物健康机构,APHA Weybridge,Addlestone,Surrey,KT15 3NB,英国;Richard.Ellis@apha.gov.uk 7 博洛尼亚大学实验、诊断和专科医学系,40127 博洛尼亚,意大利; gastone.castellani@unibo.it 8 欧洲分子生物学实验室、欧洲生物信息学研究所、Wellcome Genome Campus、Hinxton、Cambridge CB10 1SD、英国;amid@ebi.ac.uk 9 国家兽医研究所,Ulls väg 2B, 75189 Uppsala,瑞典;mikhayil.hakhverdyan@sva.se 10 微生物实验室,CEDEX 03, 44311 Nantes,法国;soizick.le.guyader@ifremer.fr (SLG);julien.schae ffi er@ifremer.fr (JS) 11 博洛尼亚大学农业与食品科学系,40064 Ozzano dell'Emilia,意大利; gerardo.manfreda@unibo.it 12 流行病学和微生物基因组学,国家卫生实验室,L-3555 Dudelange,卢森堡;joel.mossong@lns.etat.lu (JM);catherine.ragimbeau@lns.etat.lu (CR) 13 南洋理工大学食品技术中心 (NAFTEC),南洋理工大学 (NTU),62 Nanyang Dr,新加坡 637459,新加坡;jschlundt@ntu.edu.sg (JS);moon.tay@ntu.edu.sg (MYFT) 14 博洛尼亚大学兽医学系,Via Tolara di Sopra 50,40064 Ozzano dell'Emilia,意大利 * 通讯地址:alessandra.decesare@unibo.it