结果:我们发现PWEO的主要成分是单萜和倍半萜类化合物。PWEO具有强大的抗真菌活性,而PWEO的MIC对两种皮肤植物的MIC均为3.600 mg/ml。PWEO显着抑制菌丝体的生长,并且随着浓度的增加,抑制作用显着增加。当pWeo浓度达到1.8mg/ml时,菌丝体的生长被完全抑制。显微镜观察表明,PWEO破坏了菌丝的结构。细胞膜通透性测试表明,皮肤植物的细胞膜受到PWEO的破坏。细胞丙二醛(MDA)含量与PWEO的浓度呈正相关,这表明皮肤植物的脂质过氧化是由PWEO引起的。荧光显微镜图像显示,PWEO处理后,ROS的产生过多,MMP破坏了。葡萄球菌的生理实验显示,用0.450 mg/mL PWEO治疗三个小时后,蛋白质渗出,细胞外电导率和细胞内MDA含量的显着差异。通过加权基因共表达网络分析(WGCNA)鉴定了五个集线器基因,其中长链脂肪酸COA连接酶1(ACSL1)被显着上调表达。减少上调的72(MUG72)和GDP甘露糖转运蛋白基因1(GMT1)在PWEO治疗后显着下调,这影响了葡萄球菌的生长和繁殖。这些结果表明,PWEO可以用作可持续应用的天然抗真菌剂。
图 2 CLDN1 敲除会降低 N/TERT-2G 单层细胞和器官型细胞浸没培养物中的屏障完整性。浸没单层细胞培养物在高 Ca 2 + 培养基中分化。通过 (A) 分化后 5 天内每天的跨上皮电阻 (TEER) 或 (B) 分化后 1、2 和 3 天的通透性测定来量化屏障功能。WT、pCLDN1 KO 和 A8 克隆细胞用于开发器官型培养物,并且 (C) 在提升到气液界面 10 天后测量电阻抗。-gRNA、pCLDN1 KO n = 4 个实验(A、B)。B6、A8、H1 克隆 n = 3 个实验和 D5 克隆 n = 1 个实验(A、B)。n = 3-9 个来自三个实验的总构建体,不同的符号代表各个实验(C)。通过配对 t 检验 (A、B) 或 ANOVA (A、B、C) 评估与相关 WT 对照的统计差异。数据以平均值 ± SEM 表示。 * p < 0.05,** p < 0.01。
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1 英国牛津大学约翰拉德克利夫医院纳菲尔德临床神经科学系、大脑功能性磁共振成像中心 (FMRIB) 威康综合神经影像中心,英国伦敦;2 英国伦敦国王学院生物医学工程系,英国伦敦;3 荷兰奈梅亨拉德堡德大学唐德斯大脑、认知和行为研究所,荷兰奈梅亨;4 美国亚特兰大埃默里大学亚特兰大儿童保健中心马库斯自闭症中心;5 英国牛津大学生理学、解剖学和遗传学系;6 德国马格德堡马格德堡大学生物学研究所;7 德国马格德堡莱布尼茨神经生物学研究所;8 英国牛津大学实验心理学系威康综合神经影像中心