Izza Usman Bajwa 1 , Samuel Sigaud 1* 1 Accumol Inc.,加拿大艾伯塔省卡尔加里 * samuel.sigaud@accumol.com 摘要 磁性粒子通常用于从血液样本中分离特定类型的细胞。从这些细胞中提取的基因组 DNA 中的残留粒子会干扰紫外吸收分光光度法的浓度测量。在本研究中,我们在谱系特异性嵌合体分析工作流程中确定了紫外分光光度法 DNA 定量的不准确程度。我们发现残留磁性粒子和 RNA 的存在会导致对 DNA 浓度的估计过高。简介使用磁性粒子从血液样本中分离特定类型细胞是诊断或免疫遗传学实验室的常用技术。例如,谱系特异性嵌合体分析的典型工作流程包括从血液样本中分离 T 淋巴细胞、髓细胞或其他细胞类型,然后提取基因组 DNA,然后进行 PCR 或 qPCR 1 。提取后通常会检查 DNA 浓度和质量,以确保下游 PCR 反应在最佳条件下进行。根据 DNA 提取方法,在最终 DNA 样本中可能会发现用于细胞分离步骤的残留磁性粒子。虽然这些粒子通常不会干扰后续的 PCR 反应,但它们可能会影响 DNA 定量步骤。紫外吸光度分光光度法是评估 DNA 浓度和纯度最广泛的方法。它速度快,不需要使用标准曲线或特殊试剂。它使用非常少量的 DNA,尤其是使用无比色皿分光光度计(如 NanoDrop 仪器(ThermoFisher Scientific))进行时。然而,紫外吸光度对 DNA 2 不具有选择性。浓度测量可能会受到污染物的影响,例如 RNA、蛋白质、DNA 提取过程中使用的化学品或用于细胞分离的磁性粒子。为了克服这些问题,已经开发出荧光 DNA 结合染料 3。这些化合物与双链 DNA 结合时会显著增强荧光。它们具有高度的特异性和灵敏度,现在被认为是 DNA 定量的黄金标准。然而,与紫外分光光度法相比,荧光测量更耗时,需要使用昂贵的试剂,并需要实现 DNA 标准曲线。由于这些原因,当许多样本需要快速处理时,例如在分子诊断实验室中,紫外分光光度法仍然是确定 DNA 浓度的首选方法。本研究的目的是确定在谱系特异性嵌合体分析工作流程中紫外分光光度法 DNA 定量的不准确程度。我们研究了残留磁粒子对 DNA 浓度和质量测量的影响,并提出了提高测量准确性的建议。
粪肠球菌是人类中可以调节宿主免疫1但也获得了抗生素耐药性的一种微生物群,并且是医院相关感染2的主要原因2。值得注意的是,粪肠球菌的多种菌株产生传奇,这是一种高度保守的肽聚糖水解酶,足以促进肠道免疫3 - 5和免疫检查点抑制剂抗肿瘤活性6。然而,粪便中传奇的基本功能尚不清楚。在这里我们报告说,由于肽聚糖的裂解和细胞分离有缺陷,粪便的粪便损害受损,并导致肠球菌膨胀和聚集。此外,δ传奇显示出抗生素敏感性的增加,产生较低水平的活性杂肽,显示出肽聚糖型模式识别受体NOD2的激活降低,并且未能促进癌症免疫疗法。重要的是,基于质粒的传奇表达,而不是其催化活性突变体,恢复了δ传奇的生长,活性杂肽的产生和NOD2激活。传奇对于粪便生长,应激性抗性和宿主免疫的激活至关重要。
1个从哺乳动物胃内膜中的消化细胞分泌酶的倍蛋白酶原。将其中一些细胞分离并维持在含有放射性标记氨基酸的培养溶液中。定期进行细胞样品,并制备电子显微镜。图1.1显示了以这种方式处理的消毒细胞的电子显微照片的图。在每个标签之后,在括号中显示了在电子显微镜下观察的各种细胞细胞器中检测到的放射性的时间。
摘要 微流控介电泳 (DEP) 装置能够基于细胞电生理特性的差异实现无标记细胞分离和离析。该技术可用作临床诊断和医学研究的工具,因为它有助于分析患者特定血液成分以及检测和分离致病细胞,如循环肿瘤细胞或疟疾感染的红细胞。本综述比较了不同的微流控 DEP 装置分离血小板、红细胞和白细胞及其细胞亚类的方法。概述并详细介绍了用于分离、捕获和分离或纯化血细胞的不同微流控 DEP 装置的实验设置,包括其技术设计、电极配置、样品制备、施加的电压和频率以及基于和与分离效率相关的创建的 DEP 场。该技术有望在临床和门诊环境中快速获得结果。尤其是即时诊断测试场景,因广泛的微型化而受到青睐,而这可以通过 DEP 设备的微电子集成来实现。
必须遵循Miltenyi Biotec的相应说明。无菌工作过程必须用于管道集合,装配和使用。安装产品后,检查所有Luer连接是否紧密。如有必要,请重新重新连接。在人类应用之前,必须在适应症,质量和数量方面证明目标细胞的适用性。在临床应用中,制造和使用转基因的目标细胞必须符合国家法规或FDA研究法规。遗传修饰的靶细胞的任何临床应用都仅在Clinimacs Prodigy系统的使用者的责任范围内。尤其是,必须遵守有关基因工程工作,生物安全遏制水平和环境风险评估的立法,对细胞的遗传修饰,处理和任何临床应用的临床应用必须进行。使用该产品的细胞分离或其他处理只能由训练有素的操作员进行。所有与血液和血液产品接触的材料都必须视为传染性材料。治疗传染性材料的法规。
近年来,生物化学、材料科学、工程学和计算机辅助测试领域的重大进步推动了用于分析遗传信息的高通量工具的发展。单细胞 RNA 测序 (scRNA-seq) 技术已成为在单细胞水平上解剖遗传序列的关键工具。这些技术揭示了细胞多样性,并允许以极高的分辨率探索细胞状态和转变。与提供群体平均数据的批量测序不同,scRNA-seq 可以检测出原本会被忽视的细胞亚型或基因表达变异。然而,scRNA-seq 的一个关键限制是它无法保留有关 RNA 转录组的空间信息,因为该过程需要组织解离和细胞分离。空间转录组学是医学生物技术的一项关键进步,有助于在单细胞水平上在组织切片中的原始空间环境中识别 RNA 等分子。这种能力比传统的单细胞测序技术具有显著的优势。空间转录组学为神经学、胚胎学、癌症研究、免疫学和组织学等广泛的生物医学领域提供了宝贵的见解。本综述重点介绍了单细胞测序方法、最新技术发展、相关挑战、各种表达数据分析技术及其在癌症研究、微生物学、神经科学、生殖生物学和免疫学等学科中的应用。它强调了单细胞测序工具在表征单个细胞动态特性方面的关键作用。
紧密连接在上皮细胞和内皮细胞中形成细胞旁屏障,并调节液体、分子的扩散以及细胞在组织隔室中的渗透。紧密连接由一组整合膜蛋白组成,包括紧密连接蛋白家族、紧密连接相关 Marvel 蛋白家族、连接粘附分子家族以及锚定细胞骨架的蛋白质,例如小带闭合蛋白和扣带蛋白家族。神经递质或细胞因子等多种因素以及缺血/缺氧、炎症、肿瘤发生、磷酸化/去磷酸化、泛素化和棕榈酰化等过程调节紧密连接蛋白。紧密连接蛋白参与导致神经胶质瘤形成的肿瘤发生过程。在神经胶质瘤中,紧密连接蛋白、闭合蛋白和小带闭合蛋白-1 丰度明显失调,并且已观察到它们的错位。细胞间粘附力减弱和细胞分离是导致神经胶质瘤渗入周围组织的原因。此外,血脑屏障的旁细胞通透性(由紧密连接蛋白参与形成)会影响肿瘤周围水肿的发展,同时也会影响药物向神经胶质肿瘤的输送速度。了解脑肿瘤中的连接和旁细胞环境对于预测神经胶质肿瘤进展和化疗药物输送的可行性至关重要。这些知识也可能阐明高级别和低级别神经胶质瘤之间的差异。
Diagnologix 正在开发符合 cGMP 标准的细胞处理系统,用于处理来自大量生物体液的干细胞和免疫细胞,以供临床应用。Diagnologix 发现并应用了脂质壳全氟碳填充微泡 (MB),该微泡已获得 FDA 批准,可用作超声造影剂、用于细胞分离的自动驾驶车辆以及用于靶细胞调节的可调节人工细胞。专利的 BUBLES(浮力分离)技术已应用于分离人类造血干细胞,并已证明在免疫缺陷小鼠中成功植入。Diagnologix 最近通过独特的顺序多标记细胞分选方案(称为 i(terative)BUBLES)实现了可扩展的细胞分离,用于生产记忆干细胞 T (TSCM),以克服过继细胞疗法(包括 CAR-T 细胞制造)的细胞处理瓶颈。有力的证据表明,CAR-T 细胞在患者体内的持久性与工程 TSCM 的富集有关。封闭式CAR-T细胞生产系统,从特定T细胞类型的分离到随后的细胞激活、基因改造和细胞扩增,都可以作为一个单元进行组装。该系统有望实现CAR-T细胞生产的去中心化,从而惠及更多患者。
人类嗜中性粒细胞是丰富的短寿命白细胞,通过构造凋亡程序以大约10 11个细胞的速度转换。某些生长因子,发炎的介体和感染因子会延迟细胞凋亡或诱导中性粒细胞因其他机制而死。尽管如此,大量数据表明,未经治疗的中性粒细胞的凋亡通常会在细胞分离和体外培养后24小时内发生。在分子水平上的凋亡是由execution子caspase-3驱动的,在此过程细胞促进症和宿主防御函数期间,下调。我们进行了当前的研究,以确定人类嗜中性粒细胞生存力和功能可以通过无毒,不可逆的泛蛋白酶抑制剂q-vd-o-ph-oph延长的程度。我们的数据表明,单个10μm剂量的这种药物足以显着延长细胞寿命。具体而言,我们表明,通过分析核形态,DNA碎片化和苯二烷基丝氨酸外部化以及procaspase-3加工和caspase活性的测量,预防了凋亡至少5天。相反,尽管大量的细胞白血病1(MCL-1),线粒体去极化下降下降。同时,维持谷胱甘肽水平,Q-VD-OPH阻止了与年龄相关的增加线粒体氧化应激。关于功能能力,我们表明吞噬作用,NADPH氧化酶活性,趋化性和脱粒是在Q-VD-OPH处理后保持的,尽管有所不同。因此,单个10μm剂量的Q-VD-OPH可以至少维持人类中性粒细胞活力和功能至少5天。