粪肠球菌是人类中可以调节宿主免疫1但也获得了抗生素耐药性的一种微生物群,并且是医院相关感染2的主要原因2。值得注意的是,粪肠球菌的多种菌株产生传奇,这是一种高度保守的肽聚糖水解酶,足以促进肠道免疫3 - 5和免疫检查点抑制剂抗肿瘤活性6。然而,粪便中传奇的基本功能尚不清楚。在这里我们报告说,由于肽聚糖的裂解和细胞分离有缺陷,粪便的粪便损害受损,并导致肠球菌膨胀和聚集。此外,δ传奇显示出抗生素敏感性的增加,产生较低水平的活性杂肽,显示出肽聚糖型模式识别受体NOD2的激活降低,并且未能促进癌症免疫疗法。重要的是,基于质粒的传奇表达,而不是其催化活性突变体,恢复了δ传奇的生长,活性杂肽的产生和NOD2激活。传奇对于粪便生长,应激性抗性和宿主免疫的激活至关重要。
Izza Usman Bajwa 1 , Samuel Sigaud 1* 1 Accumol Inc.,加拿大艾伯塔省卡尔加里 * samuel.sigaud@accumol.com 摘要 磁性粒子通常用于从血液样本中分离特定类型的细胞。从这些细胞中提取的基因组 DNA 中的残留粒子会干扰紫外吸收分光光度法的浓度测量。在本研究中,我们在谱系特异性嵌合体分析工作流程中确定了紫外分光光度法 DNA 定量的不准确程度。我们发现残留磁性粒子和 RNA 的存在会导致对 DNA 浓度的估计过高。简介使用磁性粒子从血液样本中分离特定类型细胞是诊断或免疫遗传学实验室的常用技术。例如,谱系特异性嵌合体分析的典型工作流程包括从血液样本中分离 T 淋巴细胞、髓细胞或其他细胞类型,然后提取基因组 DNA,然后进行 PCR 或 qPCR 1 。提取后通常会检查 DNA 浓度和质量,以确保下游 PCR 反应在最佳条件下进行。根据 DNA 提取方法,在最终 DNA 样本中可能会发现用于细胞分离步骤的残留磁性粒子。虽然这些粒子通常不会干扰后续的 PCR 反应,但它们可能会影响 DNA 定量步骤。紫外吸光度分光光度法是评估 DNA 浓度和纯度最广泛的方法。它速度快,不需要使用标准曲线或特殊试剂。它使用非常少量的 DNA,尤其是使用无比色皿分光光度计(如 NanoDrop 仪器(ThermoFisher Scientific))进行时。然而,紫外吸光度对 DNA 2 不具有选择性。浓度测量可能会受到污染物的影响,例如 RNA、蛋白质、DNA 提取过程中使用的化学品或用于细胞分离的磁性粒子。为了克服这些问题,已经开发出荧光 DNA 结合染料 3。这些化合物与双链 DNA 结合时会显著增强荧光。它们具有高度的特异性和灵敏度,现在被认为是 DNA 定量的黄金标准。然而,与紫外分光光度法相比,荧光测量更耗时,需要使用昂贵的试剂,并需要实现 DNA 标准曲线。由于这些原因,当许多样本需要快速处理时,例如在分子诊断实验室中,紫外分光光度法仍然是确定 DNA 浓度的首选方法。本研究的目的是确定在谱系特异性嵌合体分析工作流程中紫外分光光度法 DNA 定量的不准确程度。我们研究了残留磁粒子对 DNA 浓度和质量测量的影响,并提出了提高测量准确性的建议。
Entegris 微载体和细胞分离系统旨在克服一次性系统的用户界面复杂性和经济流程挑战,同时最大限度地提高简单性、易用性和可负担性。该系统通过使用简化的一次性过滤器/网袋系统和蠕动泵来促进分离过程;无需其他设备。只需将未过滤的液体泵送到入口,通过过滤网,然后从第二个端口流出即可。