比较Engen间谍Cas9 NLS,Engen Spy Cas9 HF1的指南RNA序列和目标DNA序列之间的不匹配的耐受性,以及其他商业可用的高保真cas9变体。与荧光标记的DsDNA底物编码单个,双或三倍不匹配的几个指南RNA之一,可以与五个Cas9变体中的每一个形成核糖核蛋白(RNP)复合物。将完全匹配的导向RNA作为对照包括。将RNP与底物在37°C下以2:1的比率孵育5分钟。通过毛细管电泳测量每个RNP复合物的底物裂解百分比。的结果是作为热图的图形图形,白色代表没有裂解和蓝色强度的增加,表明裂解百分比增加。指南RNA序列在每一行中指示,并以绿色表示不匹配。DNA原始序列序列为5´ - agaactggcagagaggagggtag - 3´,而原始的邻接基序(PAM)为5´– TGG - 3´。Engen间谍Cas9 HF1通过显示出靶向裂解与平均脱靶裂解的最大比例,表现出对不匹配的敏感性提高。
1.2 施工期间的安全 农民/申请人的责任:请注意,如果发生与开发相关的任何事件,部长或部门的任何官员均不对任何人员、动物或财产的损害、损失或伤害负责,并且申请人应就开发工作期间发生的任何此类损害、损失或伤害向部长或部长的任何官员进行全额赔偿。提醒农民/申请人,根据《2013 年工作安全、健康和福利(建筑)条例》和《2005 年工作安全、健康和福利法》第 17 条,他们对正在计划或进行的任何建筑工程负有重大责任。农民/申请人有责任在设计工作开始前以书面形式任命一名胜任的设计过程项目主管 (PSDP),并在施工开始前以书面形式任命一名胜任的施工阶段项目主管 (PSCS)。
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摘要:证明是卵巢Betaceum(tamarillo)中的体细胞胚发生,因为可以从不同的epplants中诱导胚胎胜任的细胞系,因此可以从不同的植物中诱导胚胎胜任的细胞系,这是研究形态发生的有效模型系统。然而,尚未针对该物种实施胚胎愈伤组织(EC)的有效遗传转化系统。在这里,描述了使用tumefaciens的遗传转化的优化较快的遗传转化方案。确定了EC对三种抗生素的敏感性,卡纳米霉素被证明是tamarillo愈伤组织的最佳选择剂。两种农杆菌菌株EHA105和LBA4404都带有p35sgusint质粒,含有β-葡萄糖醛酸酶的记者基因(GUS)和标记基因neomycin phosycin phossforsfransferase(NPTIII),用于测试该过程。采用了基于抗生素耐药性的遗传转化,冷震处理,椰子水,聚乙烯基吡咯烷酮和适当的选择时间表的成功。通过GUS分析和基于PCR的技术评估了遗传转化,并在耐卡那霉素的EC团中确定了100%的效率。用EHA105菌株遗传转化导致基因组中GUS插入的值更高。 提供的协议为功能基因分析和生物技术方法提供了有用的工具。遗传转化导致基因组中GUS插入的值更高。提供的协议为功能基因分析和生物技术方法提供了有用的工具。
图3。随着时间的推移,隐式感知得分的总体变化(顶部)。 阴影反映95%CI。 每个月(x轴),左y轴是平均温暖和能力,在[-1,1]范围内;正确的Y轴是按月按月拟人形态隐喻的百分比。 我们发现,随着时间的流逝,拟人化和温暖的隐喻在频率上的增加,而胜任的隐喻随着时间的流逝而减少。 具有统计学上显着的时间变化的主要隐喻(|𝑟|> 0。 3,𝑝<0。 05)(底部)。 每条线代表主要比喻的一个月患病率,该比喻是根据其拟人化的百分比(群集中拟人化的隐喻百分比)进行的。 我们发现拟人化的隐喻正在增加,而非拟人化隐喻随着时间的流逝而减少。 阴影反映了3个月的滚动平均值。随着时间的推移,隐式感知得分的总体变化(顶部)。阴影反映95%CI。每个月(x轴),左y轴是平均温暖和能力,在[-1,1]范围内;正确的Y轴是按月按月拟人形态隐喻的百分比。我们发现,随着时间的流逝,拟人化和温暖的隐喻在频率上的增加,而胜任的隐喻随着时间的流逝而减少。具有统计学上显着的时间变化的主要隐喻(|𝑟|> 0。3,𝑝<0。05)(底部)。每条线代表主要比喻的一个月患病率,该比喻是根据其拟人化的百分比(群集中拟人化的隐喻百分比)进行的。我们发现拟人化的隐喻正在增加,而非拟人化隐喻随着时间的流逝而减少。阴影反映了3个月的滚动平均值。
胜任的希腊当局可以根据欧盟的欧洲地区发展基金(ERDF),欧洲海事,渔业和水产养殖基金(EMFAF)计划和Horizon Europe探索资金。EMFAF可以支持渔业领域数据的收集,管理,使用和处理以及研究与创新计划。ERDF可以支持所需的投资和研究和创新计划的一部分,而Horizon Europe不资助研究基础设施的建设,但可以根据欧洲研究基础设施战略论坛提供一些发展阶段。