图2:转座酶介导的剪切机制的示意图。(1)转座酶识别并结合了转座子两侧的TIRS,(2)换位复合物,(3)切除换位复合物,(4)转座复合物识别基因组中的靶位点,(5)转座子插入基因组中。图像改编自Skipper,K.A。等,2013 2。
电气惊人用于捕获鳄鱼以执行常规管理程序。从福利点开始,电气令人惊叹必须引起动物的无意识。然而,没有信息有关电气令人惊叹是否引起尼罗河鳄鱼(Crocodylus niloticus)的无意识。该研究的目的是使用5通道参考脑电图分析来评估鳄鱼中电气惊人之前和之后的大脑活动,以确定意识。的行为指标和15个圈养鳄鱼的脑电图记录被捕获并使用功率谱密度分析在令人惊叹前后的功率频谱密度分析进行分析,然后以60 s的间隔,直到播放后5分钟。在湿颈上施加了5–7 s的标准化刻度170伏。无意识的定义是α波功率的降低和增长三角波功率的增加。无法评估三个脑电图。在12个鳄鱼中的6个中发现了无意识,平均持续120 s。脑电图波形振幅和滋补性癫痫发作的波形活性和行为指标的增加并不是可靠的无意识指标。进一步的研究应集中于提高电气惊人的效率和可靠性。
摘要|睡美人(SB)转座子是脊椎动物基因转移的有前途的技术平台;但是,其基因插入的效率可能是主要细胞类型中的瓶颈。与第一代转座酶相比,哺乳动物细胞中的大规模遗传筛选产生了效率约100倍的过度转座酶(SB100X)。SB100X在富含造血干或祖细胞的人CD34 +细胞中支持35–50%稳定的基因转移。在免疫缺陷小鼠中基因标记的CD34 +细胞移植导致长期植入和造血重建。此外,SB100X支持体内小鼠肝脏转骨后的生理水平IX的持续(> 1年)表达。最后,SB100X可重复地导致45%稳定的转基因频率通过核心显微注射到小鼠Zygotes中。非病毒基因递送后,新开发的转座酶产生前所未有的稳定基因转移效率,与稳定的转导效率相比,与稳定的转导效率相比,预计在功能基因组学和基因疗法中广泛应用。
Anzalone, AV、Koblan, LW 和 Liu, DR (2020)。使用 CRISPR–Cas 核酸酶、碱基编辑器、转座酶和主要编辑器进行基因组编辑。《自然生物技术》,1-21。
DNA序列。它仅包含酶转座酶的基因,并且在两端都通过倒重复序列(相反的核苷酸序列或非常相似的核苷酸序列)界定。◦倒置重复序列通常长约15至25个碱基对,而在元素之间有所不同,因此
嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法改变了恶性肿瘤免疫疗法的景观,从根本上改变了传统的癌症治疗策略。然而,对T细胞转染的病毒载体的依赖构成了局限性,从而阻碍了这种有希望的治疗方法的更广泛应用。使用非病毒载体用于CAR-T细胞制备,在下一代疗法中已成为一种更通用和可持续的替代方法。转座元素(TES)是1940年代芭芭拉·麦克林托克(Barbara McClintock)在玉米中首先发现的(1)(1)的移动DNA序列,这些序列是由由反向末端重复序列(ITRS)和转座酶组成的基因片段组成的。该酶有助于转座子从其原始DNA位点切除,并将其整合到新的基因组位置。可以将其分为逆转座子,并切成两个主要类别的转座机制(2)。剪切的转座子需要对两种ITR的转座酶识别,以从其源中切除DNA转座子并将其整合到其他地方(3)。这种固有的插入DNA的能力使剪切的转座可以用于基因组操纵的强大工具(4-7)。
CHOSOURCE TM GS KO TTZ 表达池和 CHOSOURCE TM ADCC+ TTZ 表达池的生产力性能分析。两种细胞系均使用 CHOSOURCE TM 转座子技术(基于转座酶的基因整合)进行稳定转染,并在转染后 48 小时进行选择(无蛋氨酸亚砜亚胺,MSX)。恢复后,使用 Revvity 的标准摇瓶补料分批工艺评估池生产力。
建立人类疾病的非人灵长类动物模型对于开发治疗策略尤其是神经退行性疾病的治疗策略非常重要。普通狨猴作为一种新的实验动物模型引起了人们的关注,许多转基因狨猴都是通过慢病毒载体介导的转基因产生的。然而,慢病毒载体在转基因应用中的长度限制为 8 kb 以下。因此,本研究旨在优化 piggyBac 转座子介导的基因转移方法,其中将长度超过 8 kb 的转基因注射到狨猴胚胎的卵周隙中,然后进行电穿孔。我们构建了一个携带阿尔茨海默病基因的长 piggyBac 载体。使用小鼠胚胎检查了 piggyBac 转基因载体与 piggyBac 转座酶 mRNA 的最佳重量比。在注射 1000 ng 转基因和转座酶 mRNA 的胚胎中,70.7% 的胚胎干细胞确认转基因整合到基因组中。在这些条件下,将长转基因引入狨猴胚胎。转基因引入处理后,所有胚胎均存活,70% 的狨猴胚胎中检测到了转基因。本研究开发的转座子介导的基因转移方法可应用于非人类灵长类动物以及大型动物的遗传修饰。
靶标下切割和标记 (CUT&Tag) 是一种突破性的表观基因组图谱策略,它以之前的免疫束缚技术 CUT&RUN 和 ChIC 1-6 为基础。在 CUTANA ™ CUT&Tag 中,细胞核被固定在固体支持物上,抗体原位结合其染色质靶标。蛋白 A 和 G 与原核转座酶 5 (pAG-Tn5) 的融合用于选择性切割和标记抗体结合的染色质,并带有测序接头 (图 1)。使用 EpiCypher 独有的单管 (“直接 PCR”) 方法直接对标记片段进行 PCR 扩增,得到可测序的 DNA 6,7。