图 1:(a) 纳米线的 SEM(左)和纳米线结构示意图(右)。由于 QD 嵌入纳米线内,因此在 SEM 图像中不可见。(b) 实验装置示意图。图像的测量部分(最右边的两个部分,在图中也标记为“测量”)显示了互相关测量的方案。绿色和粉色箭头分别表示用于进行自相关和光谱仪测量的光纤重新连接。对于带上激发,切片机被绕过,来自激光器的光直接通过纳米线发送到低温恒温器。(c) 在共振激发下从纳米线反射的泵浦激光的数值模拟“花”状轮廓。
用于农业和生物医学应用的基因编辑猪通常使用体细胞核移植 (SCNT) 生成。然而,SCNT 需要使用单克隆细胞作为供体,而耗时费力的单克隆选择过程限制了大批基因编辑动物的生产。在这里,我们开发了一种快速有效的方法,称为 RE-DSRNP(报告 RNA 富集双 sgRNA/CRISPR-Cas9 核糖核蛋白),用于生成基因编辑供体细胞。 RE-DSRNP利用双sgRNA精准高效的编辑特点和报告RNA富集的RNP(CRISPR-Cas9核糖核蛋白)高编辑效率、低脱靶、无转基因、低细胞毒性的特点,无需筛选单克隆细胞,将供体细胞的生成时间从3-4周大大缩短至1周,同时也降低了供体细胞凋亡和染色体非整倍体的程度。我们应用RE-DSRNP技术生产了带有野生型p53诱导的磷酸酶1(WIP1)基因缺失编辑的克隆猪:在32头断奶克隆猪中,31头(97%)携带WIP1编辑,15头(47%)为设计片段缺失纯合,未检测到脱靶事件。 WIP1 基因敲除 (KO) 猪表现出雄性生殖障碍,这说明 RE-DSRNP 可用于快速生成精确编辑的动物,用于功能基因组学和疾病研究。RE-DSRNP 在大型动物中的强大编辑性能以及其显著缩短的 SCNT 供体细胞生成所需时间,为其在快速生成无转基因克隆动物种群中的应用前景提供了支持。