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iPSC 慢病毒转导方案及 GFP/嘌呤霉素选择
人类 iPSC 慢病毒转导的详细研究使用方案，包括 GFP 监测、嘌呤霉素选择、克隆扩增、旋转感染注意事项和 QC。带有 GFP/嘌呤霉素选择的 iPSC 后慢病毒转导方案首先出现在《科学笔记》上。
来源:科学笔记慢病毒转导是一种广泛使用的对人类诱导多能干细胞 (iPSC) 进行稳定遗传修饰的方法。它通常用于引入报告基因、诱导转录因子、shRNA、miRNA、CRISPR 组件、谱系追踪系统和选择标记。
常见的设计是携带 GFP 和嘌呤霉素抗性的慢病毒载体，作为单独的表达盒或通过 IRES 或 2A 肽连接。 GFP 可以对转导效率进行早期视觉或流式细胞术监测，而嘌呤霉素可以对转导细胞进行富集或稳定选择。
该协议描述了带有 GFP/puro 选择的 iPSC 慢病毒转导的研究使用工作流程，包括培养物准备、转导优化、可选的旋转感染、嘌呤霉素杀伤曲线、基于 GFP 的评估、抗生素选择、克隆分离和质量控制。
范围和生物安全
该方案假设复制无能、自失活的慢病毒颗粒已经在您的机构生物安全工作流程下生产、浓缩（如果需要）、滴定、释放使用并获得批准。
请勿在没有以下条件的情况下执行慢病毒工作：
自失活慢病毒系统是 iPSC 工作的首选，但 SIN 设计并不能消除生物安全控制或下游基因组验证的需要。