桑格测序:原理、历史、挑战和应用

为学生解释桑格测序,涵盖 DNA 测序的原理、工作流程、挑战和现代应用。后桑格测序:原理、历史、挑战和应用首先出现在《科学笔记》上。

来源:科学笔记

DNA测序是现代生物科学中最重要的技术之一。从识别基因中的单个突变到验证克隆的 DNA 片段,测序使科学家能够读取 DNA 中核苷酸的确切顺序。在当今可用的众多测序技术中,桑格测序仍然是准确性、可靠性和简单性的黄金标准,尤其是在教育实验室和小规模研究中。

这本适合学生的指南解释了桑格测序是什么、它是如何工作的、它的历史重要性、它的挑战以及为什么它今天仍然被广泛使用。

什么是 DNA 测序以及为什么它很重要?

DNA 测序是指确定 DNA 分子内核苷酸(腺嘌呤 (A)、胸腺嘧啶 (T)、胞嘧啶 (C) 和鸟嘌呤 (G))精确顺序的过程。了解 DNA 序列有助于研究人员:

识别基因突变

研究遗传疾病

分析克隆的 DNA 片段

了解基因功能和调控

对生物体进行全基因组测序

虽然现代下一代测序 (NGS) 技术可以快速对整个基因组进行测序,但传统测序方法为基因组学的所有进步奠定了基础。

历史背景:桑格测序的诞生

DNA 测序并不总是像今天这样容易实现。 1977 年,弗雷德里克·桑格 (Frederick Sanger) 和他的合作者开发了一种革命性的方法,称为链终止法或桑格测序。这种方法首次使得准确解码DNA序列成为可能。

与此同时,还存在另一种方法,称为 Maxam-Gilbert 测序方法。然而,由于其复杂性和危险化学品的使用,Maxam-Gilbert测序逐渐失宠。另一方面,桑格测序被广泛采用,直到今天仍然具有重要意义。

桑格测序原理(链终止法)

桑格测序所需的关键组件

模板 DNA(通常经过 PCR 扩增)

单个底漆

DNA 聚合酶

单基因