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通过 CRISPR/增强重组 CHO 细胞的稳定性...
中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞是生产生物治疗药物的最重要平台。转基因随机整合到基因组表观遗传不稳定区域会导致目的基因沉默和上游加工过程中生产力损失。因此，必须进行成本高、时间密集的长期稳定性研究。位点特异性整合到安全港是一种克服传统细胞系设计这些局限性的策略。最近的出版物根据组学数据集或通过从随机整合中学习来预测 CHO 细胞中的安全港，但这些预测仍然只是理论。在本研究中，我们基于 ChIP-seq 数据建立了 CRISPR/Cas9 介导的位点特异性整合策略，以提高重组 CHO 细胞的稳定性。因此，从 CHO-K1 细胞的补料分批培养的指数和稳定生长期进行的 ChIP 实验产生了 709 个潜在的稳定整合位点。报告基因 eGFP 通过 CRISPR/Cas9 整合到三个含有特定修饰的区域。靶向 Cas9 纳米孔测序显示所有 3 个细胞池中均存在位点特异性整合，特异性在 23% 到 73% 之间。随后，将具有三个不同整合位点的细胞与随机整合的供体载体在转录水平、生产力、基因拷贝数和稳定性方面进行比较。所有位点特异性整合均显示生产力和转录水平增加了高达 7.4 倍。在超过 70 代的长期培养中，两个位点特异性整合显示出稳定的生产力（> 70%），不受选择压力的影响。
使用DNA编码的图书馆技术和机器学习增强化学空间靶向肿瘤抗性机制
筛查，早期诊断和治疗方面的进步对总体癌症致命率3的下降有重大影响。然而，在改善癌症患者4的结果方面，对治疗的耐药性仍然是最大的挑战。在1942年由耶鲁大学药物老兄会和医生5 - 7的多学科团队做出多种药物后，可以发展出癌症对化学疗法的概念证明，他们对患者进行静脉内的氮芥末术治疗淋巴瘤8。这项临床试验揭示了所谓的获得的耐药性。进一步的研究表明，只有一些癌症对治疗作出反应，从而揭示了内在的抗药性。大约35年后，Ling及其同事证明了一种被指定为透化性糖蛋白的细胞表面糖蛋白的作用，在中国仓鼠卵巢细胞对秋水仙碱9、10中的耐药性。作者表明，这些细胞还耐有结构和机械无关的药物，该药物被定义为多药耐药9、10。克隆了编码该渗透性 - 糖蛋白11的ABCB1基因11。这是膜蛋白的大型超家族的第一个成员，其中包括48个MEM啤酒分为7个家庭，称为ATP结合盒（ABC）转运蛋白12。自ABCB1以来，许多其他ABC运输ER与耐药性13有关。这些抑制剂的毒性仍然是一个主要问题，其中包括在某些第13-15条中解决的问题。不幸的是，大多数临床试验未能支持这些药物外排转运蛋白作为克服ABC转运蛋白介导的耐药性14的治疗策略。癌症对化学疗法反应的表征已导致鉴定出许多其他耐药性机制，这是由于摄取转运蛋白的表达降低，表观遗传改变，药物隔离和增强的DNA损伤修复4。
辅助亚基鼻内疫苗减少SARS-COV ...
阻止病毒传播是有效疫苗的重要功能。从公共卫生的角度来看，防止SARS-COV-2向其他易感人士传播至关重要。但是，大多数Covid-19-19疫苗临床试验仅研究了疫苗受体的安全性和保护，但不能预防向他人传播。的确，当前有执照的SARS-COV-2疫苗成功地减轻了19次与19例相关的住院和死亡，但对收购感染和继续传播的有效性较小（1-3）。尽管对SARS-COV-2突破性感染的研究表明，在未接种疫苗的个体中，疫苗突破性感染的感染性不及原发性感染（4，5），但这些疫苗对降低传播性的影响尚未得到很好的评估。作为SARS-COV-2传播主要是通过鼻咽传播，粘膜免疫可以潜在地降低或流产入口门户（Nasopharynx）的SARS-COV-2复制，以防止病毒传播给其他人。当前疫苗的鼻内给药导致与SARS-COV-2感染的结果不一致（6，7）。辅助亚基粘膜疫苗可诱导上和下呼吸道中剧烈的粘膜免疫（8-10），并且比给定的（IM）给定的类似亚基疫苗（IM）更有效地清除上呼吸道病毒，它可能具有更好地降低SARS-COV-2上的SARS-COV-2。作为SARS-COV-2病毒可以有效地在仓鼠之间传播，这代表了更自然的剂量和感染/传播的途径（11）。在这里，我们评估了辅助亚基疫苗（SARS-COV-2 SPIKE S1+S2+S2差异D614G和B.1.1.529在dotap纳米颗粒中以及辅助物质poly I：CPG，CPG和重组型鼠类的传播都可以保护固有的hamarsic-sars-sars-sars-cov in n o sarsic cov in n nanoparticles in dotap纳米颗粒中是否可以在辅助I：CPG和重组型较高的模型中。 疫苗。
SPAMTP：空间代谢组学和转录组学数据的综合统计分析和可视化
摘要：宿主细胞蛋白（HCP）是可能影响生物治疗剂的安全性，功效和质量的关键质量属性。标记 - 游离shot弹枪蛋白质组学是HCP监测的至关重要方法，但是选择串联质谱（MS/MS）搜索算法直接影响识别深度和定量可靠性。在这项研究中，六种突出的MS/MS搜索工具（Mascot，Maxquant，Experromine，Fragpipe，byos和Peaks）是系统上基准的，因为它们在与中国仓鼠卵巢细胞的同位素标记的蛋白质上的复杂样品上的性能进行了基准测试，该蛋白质是使用羊毛hamster卵巢细胞的，使用了诱捕的离子移动性表述和平行的仿制模式，并依赖于数据划分，并逐渐划分。关键性能指标，包括肽和蛋白质识别，数据提取精度，变化精度，线性和测量真实。使用Hamiltonian Monte Carlo采样的贝叶斯建模框架可通过后验概率校准以及局部错误的发现率来稳健地估计折叠式均值和方差。通过预期效用最大化实施的贝叶斯决策理论用于平衡准确性与后部不确定性，从而对每个工具的性能进行了概率评估。通过这种累积分析，可以观察到跨工具的变异性：一些在识别敏感性和蛋白质覆盖范围方面表现出色，有些在定量准确性方面具有最小的偏见，并且有一些在跨指标之间提供了平衡的性能。这项研究建立了一个严格的数据驱动框架，用于工具基准测试，为选择适合HCP监测生物制药开发中的HCP监视的MS/MS工具提供了见解。
在 CHO 细胞中有效 CRISPR/Cas9 介导的 BAX 基因消融可损害细胞凋亡并增强重组蛋白的产生
背景：尽管最近利用 CHO 细胞生产重组生物治疗药物取得了进展，但其生产率仍低于工业需求，主要是由于细胞凋亡。目的：本研究旨在利用 CRISPR/Cas9 技术特异性破坏 BAX 基因，以减轻产生促红细胞生成素的重组中国仓鼠卵巢细胞的细胞凋亡。材料和方法：使用 STRING 数据库识别要通过 CRISPR/Cas9 技术修饰的关键促凋亡基因。设计针对已识别基因 (BAX) 的单向导 RNA (sgRNA)，然后用载体转染 CHO 细胞。随后，研究了操纵细胞中 Bax 基因表达的变化以及随之而来的促红细胞生成素产生率，即使在存在凋亡诱导剂橄榄苦苷的情况下也是如此。结果：BAX 破坏显著延长了细胞存活率，并增加了操纵克隆的增殖率（152%，P 值 = 0.0002）。该策略将操纵细胞中的 Bax 蛋白表达水平降低了 4.3 倍以上（P 值 <0.0001）。与对照组相比，Bax-8 操纵细胞对压力和结果凋亡表现出更高的阈值耐受性。此外，在橄榄苦苷存在的情况下，它们与对照组相比表现出更高的 IC50（5095 µM.ml -1 Vs. 2505 µM.ml -1 ）。我们发现，与对照细胞系相比，即使存在 1,000 µM 橄榄苦苷，操纵细胞中的重组蛋白生产水平也显著增加（p 值 = 0.0002）。结论：CRISPR/Cas9 辅助 BAX 基因消融有望通过工程化抗凋亡基因来改善 CHO 细胞中的促红细胞生成素产生。因此，有人提出利用 CRISPR/Cas9 等基因组编辑工具来开发宿主细胞，从而实现安全、可行、稳健的制造操作，且产量满足工业要求。
情报提供
MMCT方法主要使用小鼠衍生的A9细胞和中国仓鼠衍生的CHO细胞作为染色体供体细胞，并将MB尺度的人类染色体（片段）引入人/小鼠干细胞中，并通过创建疾病模型和动物的创造来为生物学研究工具的开发。使用质粒载体和BAC载体的常规基因转移方法用于约5-200 kb的基因转移，使MB的尺度上的基因转移非常困难。另一方面，人类染色体引入方法通过使用人类单个染色体A9/CHO细胞库成功引入MB单元，该单元分别将染色体从1到22和X携带为染色体供体细胞。然而，保留在现有人类单染色体染色体A9/CHO细胞库中的人类染色体没有具有高染色体稳定性作为A9/CHO细胞的特征，从而导致部分染色体缺乏症和重排，从而使所需的人类染色体的长度很难以稳定的方式提供。此外，可以提供的染色体来自特定的人成纤维细胞系，导致缺乏遗传多样性。臀部细胞是一种极具吸引力的生物学资源，因为来自各种遗传背景（包括疾病患者）的人类衍生的细胞系显示了无限的增殖潜力，并且能够长期保持正常的染色体核型。该研究小组报告了一种新型高效的MMCT方法，其中使用紫杉醇（PTX）和反versin（Rev）生产微核细胞，将臀部细胞用作染色体供体细胞，并与CHO细胞融合。因此，在这项研究中，我们研究了是否可以通过使用PTX和Rev与不同的人IPS细胞产生的人IPS细胞衍生的微核细胞融合来引入染色体。
Shingrix，INN 带状疱疹疫苗（重组，佐剂）
此药品需要接受额外监控。这将使我们能够快速识别新的安全信息。要求医疗保健专业人员报告任何疑似不良反应。有关如何报告不良反应，请参阅第 4.8 节。 1. 药品名称 Shingrix 注射用粉末和混悬液 带状疱疹疫苗（重组，佐剂） 2. 定性和定量组成 重构后，一剂（0.5 毫升）含有： 水痘带状疱疹病毒 1 糖蛋白 E 抗原 2,3 50 微克 1 水痘带状疱疹病毒 = VZV 2 以 AS01 B 佐剂形式含有： 植物提取物 Quillaja saponaria Molina，级分 21 (QS-21) 50 微克 3 源自明尼苏达沙门氏菌的-O-去酰基-4'-单磷酰脂质 A (MPL) 50 微克 3 通过重组 DNA 技术在中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞中产生的糖蛋白 E (gE) 有关辅料的完整列表，请参见第 6.1 节。 3. 药物形式 注射用粉末和混悬液。粉末为白色。混悬液为无色至淡褐色乳白色液体。 4. 临床特点 4.1 治疗指征 Shingrix 适用于预防 50 岁或以上成人的带状疱疹 (HZ) 和带状疱疹后神经痛 (PHN)（见第 5.1 节）。Shingrix 的使用应符合官方建议。 4.2 用法和用量 用法 初始疫苗接种计划包括两剂，每剂 0.5 毫升：第一剂，2 个月后第二剂。如果需要灵活调整疫苗接种计划，第二剂可以在第一剂后 2 至 6 个月注射（见第 5.1 节）。尚未确定初始疫苗接种计划后是否需要加强剂量（见第 5.1 节）。对于之前接种过减毒活 HZ 疫苗的个体，可以按照相同的时间表接种 Shingrix（见第 5.1 节）。
Enhertu, INN-曲妥珠单抗
此药品需要接受额外监控。这将允许快速识别新的安全信息。请医疗保健专业人员报告任何疑似不良反应。有关如何报告不良反应，请参阅第 4.8 节。 1. 药品名称 Enhertu 100 mg 浓缩粉末，用于输液溶液 2. 定性和定量组成 一瓶浓缩粉末，用于输液溶液，含有 100 mg trastuzumab deruxtecan。配制后，一瓶 5 mL 溶液含有 20 mg/mL trastuzumab deruxtecan（请参阅第 6.6 节）。曲妥珠单抗 deruxtecan 是一种抗体-药物偶联物 (ADC)，含有人源化抗 HER2 IgG1 单克隆抗体 (mAb)，其氨基酸序列与曲妥珠单抗相同，由哺乳动物 (中国仓鼠卵巢) 细胞产生，通过基于四肽的可裂解接头与 DXd (一种依沙替康衍生物和一种拓扑异构酶 I 抑制剂) 共价连接。每个抗体分子上附着约 8 个 deruxtecan 分子。有关辅料的完整列表，请参阅第 6.1 节。3. 药物形式用于输液溶液的浓缩粉末。白色至黄白色冻干粉末。 4. 临床特点 4.1 治疗适应症 乳腺癌 HER2 阳性乳腺癌 Enhertu 单药疗法适用于治疗已接受过一种或多种抗 HER2 方案的不可切除或转移性 HER2 阳性乳腺癌成年患者。 HER2 低乳腺癌 Enhertu 单药疗法适用于治疗已接受过转移性化疗或在完成辅助化疗期间或后 6 个月内出现疾病复发的不可切除或转移性 HER2 低乳腺癌成年患者（见第 4.2 节）。 非小细胞肺癌 (NSCLC) Enhertu 单药疗法适用于治疗肿瘤具有激活 HER2 (ERBB2) 突变且需要在铂类化疗（联合或不联合免疫疗法）后进行全身治疗的晚期 NSCLC 成年患者。
新西兰数据表1。产品名称Avonex®Interferon Beta-1A（RCH）用于注射预填充注射器Avonex®Interferon Beta-1A（RCH）
新西兰数据表1。产品名称Avonex®Interferon Beta-1A（RCH）溶液用于注射预填充注射器Avonex®Interferon beta-1a（RCH）溶液用于注射笔2。定性和定量组成干扰素β-1A是166个氨基酸糖蛋白，每毫克的抗病毒活性约为2亿个国际单位（IU）。它的预测分子量约为22,500 daltons，由哺乳动物（中国仓鼠卵巢）细胞产生，引入了人干扰素β基因。avonex的氨基酸序列与天然人干扰素β的氨基酸序列相同。avonex由重组DNA技术生产，并作为30微克注射溶液生产。avonex作为一种无菌溶液，用于注射干扰素β-1A，用于肌内注射。注射预填充的注射器的每种0.5 mL Avonex溶液中包含30 µg干扰素β-1A，具有600万IU的抗病毒活性。注射笔的每种0.5 mL Avonex溶液包含30 µg干扰素β-1A，具有600万IU的抗病毒活性。有关赋形剂的完整列表，请参见第6.1节。3。Pharmaceutical Form avonex预填充的注射器以单次使用注射器提供，可提供4个泡沫托盘的包装。每个水泡托盘都包含一个预填充的Avonex注射器和一个用于IM给药的针头。avonex笔提供作为单填充笔，可提供4个单独纸箱的包装。并非所有演示文稿都在新西兰分发。4。每个纸箱都包含一支avonex预填充的笔，一根16毫米，25量规针和一个avonex笔盖。临床细节4.1治疗指示AVONEX（干扰素β-1A）用于治疗多发性硬化症（MS）的复发形式。avonex在经历了单个脱髓鞘事件并且有可能基于MS的脑MRI异常的特征的患者中有可能开发临床上确定的MS的患者。
附件一 产品特性概述
1. 药品名称 Prolia 60 mg 预充注射器注射液 2. 定性和定量组成 每个预充注射器 1 mL 溶液中含 60 mg 地诺单抗（60 mg/mL）。地诺单抗是通过重组 DNA 技术在哺乳动物细胞系（中国仓鼠卵巢细胞）中产生的人单克隆 IgG2 抗体。 已知作用的辅料 此药每毫升溶液含 47 mg 山梨醇。有关辅料的完整列表，请参阅第 6.1 节。 3. 药物形式 注射液（注射剂）。澄清、无色至微黄色溶液。 4. 临床特点 4.1 治疗指征 治疗绝经后女性和骨折风险较高的男性的骨质疏松症。对于绝经后女性，Prolia 可显著降低脊椎、非脊椎和髋部骨折的风险。 对于骨折风险较高的前列腺癌男性，治疗激素消融相关的骨质流失（见第 5.1 节）。 对于接受激素消融的前列腺癌男性，Prolia 可显著降低脊椎骨折的风险。 对于骨折风险较高的成年患者，治疗长期全身性糖皮质激素治疗相关的骨质流失（见第 5.1 节）。 4.2 用法用量和给药方法 用法用量 建议剂量为 60 毫克地诺单抗，每 6 个月一次皮下注射到大腿、腹部或上臂。患者必须充分补充钙和维生素 D（见第 4.4 节）。 应向使用 Prolia 治疗的患者提供包装说明书和患者提醒卡。抗骨质疏松症治疗（包括地诺单抗和双膦酸盐）的最佳总治疗时长尚未确定。应根据地诺单抗对个体患者的益处和潜在风险定期重新评估是否需要继续治疗，尤其是在使用 5 年或更长时间后（参见第 4.4 节）。