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World File Search System凝胶电泳
执行DNA凝胶电泳 - 实验室设备
凝胶基质和凝胶铸琼脂是核酸电泳中使用的最常见的凝胶基质。琼脂糖是一种多糖，由半乳糖的重复单位和3,6-综合乳糖糖组成。该结构的一致性在整个凝胶中产生了均匀的孔隙度。结合了整个DNA分子的均匀电荷分布，可以精确确定通过凝胶动员的DNA片段的大小。可以通过改变琼脂糖的浓度来进一步调整迁移率和分辨率。增加琼脂糖浓度会在低分子量下增加带分辨率 - 大的DNA片段会通过琼脂糖和缓慢行进的方式具有更大的抵抗力，将更多的凝胶用于小带分辨率。降低琼脂糖的浓度可改善高分子重量下的条带分辨率（见表1）。
使用碱性单细胞凝胶电泳（SCGE）彗星测定的氧化DNA损伤以及N-乙酰基半决赛的保护作用
Zearalenone（ZEN）是一种由几种在谷物和农产品中发现的镰刀菌产生的非甾体雌激素霉菌毒素。Zen与农场动物和人类的霉菌毒性有关。ZEN的毒性作用众所周知，但是尚未确定碱性彗星测定法评估Zen诱导的Chang肝细胞中氧化DNA损伤的能力。这项研究的第一个目的是评估彗星测定法测定Zen Toxin诱导的细胞毒性和DNA大坝的程度，第二个目的是研究N-乙酰半胱氨酸酰胺（NACA）保护细胞以保护细胞免受Zen诱导的毒性的能力。在彗星测定中，通过量化尾部范围矩（TEM；任意单位）和尾部长度（TL；任意单位）来评估DNA损伤，这些损伤用作SCGE中DNA链断裂的指标。通过抑制细胞增殖并诱导氧化DNA损伤，介导Zen在变肝细胞中的细胞毒性作用。增加ZEN的集中度增加了DNA损伤的程度。用Zen毒素治疗后，DNA迁移的程度和尾部的细胞百分比显着增加（P <0.05）。与高浓度的Zen毒素（250 p m）的细胞治疗相比，用低浓度的Zen毒素（25 p m）处理Zen毒素（25 p m）的治疗诱导的DNA损伤水平相对较低。氧化DNA损伤似乎是Chang肝细胞中Zen诱导的毒性的关键决定因素。在暴露于任何浓度的ZEN之前先用NACA预先处理细胞时，观察到细胞溶解性的显着降低和氧化DNA损伤。我们的数据表明ZEN在Chang肝细胞中诱导DNA损伤，NACA的抗氧化活性可能有助于通过消除氧化应激减少Zen诱导的DNA损伤和细胞毒性。
限制摘要和琼脂糖凝胶电泳
T ECHNIQUES I N M OLECULAR B IOLOGY – R ESTRICTION D IGEST AND A GAROSE G EL E LECTROPHORESIS This lab will introduce you to DNA modification by restriction enzymes using the purified plasmids you prepared from your transformation.我们还将使用水平凝胶电泳对纯化的质粒和消化进行分析。您将对限制酶进行切割之前和之后对纯化的质粒进行凝胶分析。您将执行质粒的模拟（控制）摘要，一种具有两种不同限制酶和双重摘要的单个摘要。从中，您应该能够确定Qiagen微型制备质粒DNA的纯度，以及在PQE60载体中的WGMDH插入物。一定要阅读有关限制摘要（教科书读数）和琼脂糖凝胶（教科书和讲义）的信息，以了解每个概念的理论，并了解执行成功实验所需的细节。必需的视频 - 新英格兰Biolabs准备的网页上的限制酶链接。观看所需的最小视频是（具有限制性酶的消化，限制酶消化的标准协议和NEB限制酶Double Digigest协议视频）。在进行实验之前，您还应该查看其他几个。https://www.neb.com/applications/cloning-‐and-‐synthetic-‐ biology/dna-‐preparation/restriction-‐enzyme-‐digestion Practical notes on Restriction Endonucleases (RE) and Their Use Enzymatic Unit definition: 1 Unit = amount of enzyme necessary to digest 1 µg DNA in 1 hr (37°C, with适当的缓冲区）。glycerol Re Digests。确保您使用的是正确的缓冲液，酶与底物的正确比率（DNA和正确消化的条件）。Rextion缓冲每个限制酶具有一个缓冲液，其中最高活性（通常为10倍浓缩物）。某些酶具有共同的缓冲液，而其他酶则需要与独特的缓冲液一起使用以进行最佳活动。几家公司（以新英格兰的Biolabs为例）具有与多种酶合作的共同缓冲液。您的网站上有一个链接 - 探索几家公司以了解缓冲液和酶。存储条件RE通过反复暴露于较高的温度来对活动丧失敏感；使用库存以长期存储保持在-20°C，在使用时在〜0°C（在冰上）处于〜0°C（在冰上）。进行消化时，温育几个小时后，某些酶的活性就会损失。由于RE昂贵，因此必须谨慎处理库存。酶应在-20°C时不断存储在非冻结冰箱中。（无霜的冰柜定期在冰点上加热以限制冰的积累。）也最好将酶放在冰箱中的绝缘容器中，该酶在打开冰柜时会限制温度变化（如果存储在霜冻的冰柜中，这一点尤其重要）。为防止在-20°C下冻结，RE库存在含有50％甘油的溶液中。由于在存在> 5％甘油的情况下可以抑制或改变RE活性，因此应库存不超过10％的最终RE消化反应混合物。[A 1:10 RE的稀释度将50％的甘油含量为5％。]在不正确的缓冲液条件下或在存在> 5％甘油的情况下，RE的恒星（*）活性可以显示出改变的DNA裂解特异性，称为“恒星活性”。在这种情况下，酶可以识别出其正常6 bp识别位点的4个基对子集，因此将在比预期的更多位点上切割DNA。例如，熟悉的酶EcoRI因其在低离子强度溶液中的恒星活性而臭名昭著。
凝胶电泳实验室生物科学学院
质粒是一些细菌所具有的圆形DNA，并且对染色体是额外的。质粒比染色体DNA（通常为几千个碱基对）小得多，并且取决于单个质粒，可能存在于每个细胞的一个拷贝到每个细胞的数百份。质粒也很特别，因为它们可以在细胞之间转移，因此质粒上存在的基因可以通过细菌种群传播。这种传播的经典例子是抗生素耐药性。
讲座27：用于DNA分析的琼脂糖凝胶电泳
A。DNA浓度，电压和缓冲液浓度。B.凝胶百分比，缓冲液浓度和电压。C. DNA的大小，凝胶浓度和DNA构象。D.凝胶的长度，缓冲液浓度和DNA浓度。
凝胶电泳：排序并参见DNA前类活动
21,226 23,130 16,841 19,329 18,170 19,044 7,421 9,416 7,233 16,380 14,083 12,434 5,804 6,557 6,770 4,572 7,054 7,888 5,643 4,361 6,527 4,254 4,641 6,995 4.878 2.322 5.626 3.965 4.55 $ 3.530 2.527 5,527 564 5660 1860