摘要 立方体是纳米生物工程的产物,是一种自结构脂质纳米粒子,其作用类似于载药的诊断探针。本文,我们描述了一种制备组合载药立方体的简单方法,经原理验证,该立方体具有治疗癌细胞的作用以及诊断能力。抗癌药物顺铂和紫杉醇组合装载在立方体中。立方体上涂有一层聚-Ɛ-赖氨酸,这有助于避免药物最初的爆发性释放,并允许缓慢和持续释放以获得更好的疗效。用透射电子显微镜对立方体进行成像,并通过差示扫描量热法和X射线衍射图研究在体外分析其分散性。显微图像描绘了球形多角结构,很容易区分。分析表明,药物均匀分散在整个立方体中。通过 zeta 电位测量、体外释放和包封率研究进行了进一步表征。体外研究表明,立方体涂层最初成功地减少了药物的爆发性释放,并证实了随着时间推移,药物释放缓慢而持续。使用人肝癌 HepG2 细胞系评估了涂层、未涂层和空白立方体的细胞毒性比较,发现这些制剂完全无毒,与空白制剂相似。通过阻抗测量和荧光成像证实了立方体对 HeLa 细胞的治疗效果。此外,用涂层组合立方体处理的细胞阻抗降低证明了 HeLa 细胞的损伤,这通过荧光显微镜得到证实。
15. 将 Matrigel 包被的培养板和 hiPSC 培养基预热至 20-25 C。16. 从预包被的培养板中吸出 Matrigel 并加入 hiPSC 培养基(6 孔板每孔 2 ml)。17. 将 9 ml hiPSC 培养基加入到 15 ml 离心管中。18. 将低温小瓶直接转移到 37 C 水浴中并观察解冻过程。当管中大部分内容物解冻并仅剩下一小块冰时,迅速取出并用 70% 乙醇彻底清洗。19. 小心地将细胞逐滴转移到准备好的带有培养基的 15 ml 离心管中。以 200 3 g 的速度离心 5 分钟。20. 小心吸出上清液。将沉淀物悬浮在 hiPSC 培养基(例如 1 ml)中,并接种到准备好的 Matrigel 包被的培养板上。前 24 小时加入 1 ml/ml 2 mM Thiazovivin(最终浓度 2 m M)。21. 如果 24 小时后细胞附着良好,则用 hiPSC 培养基更换培养基。如果附着力较低,再加入 1 ml/ml 2 mM Thiazovivin(最终浓度 2 m M),培养 24 小时。从第二天开始,每天更换培养基,每孔(6 孔)加入 2 ml hiPSC 培养基。继续“hiPSC 传代和维护”,步骤 1-8。
壳聚糖包被的香蕉 Musa acuminata 和车前草 M. balbisiana 中的凝集素蛋白的纯化和表征,作为检测癌症生物标志物的凝集素分子候选物
使用 Kohl 和 Ascoli [13] 改进的间接酶联免疫吸附测定法对 IgY 浓度进行定量,并对洗涤和封闭缓冲液的体积、包被抗体的浓度、终止液的类型和微孔板读数仪的波长进行了修改。用紫外线灭菌后,用 2.5 µ g/mL 浓度的山羊抗 IgY 免疫球蛋白 G (IgG) (SAB3700195,Sigma-Aldrich) 作为捕获抗体包被微孔板。用 pH 9.6 的缓冲碳酸氢盐 (0.005 M 碳酸盐碳酸氢盐) 稀释抗体,并将微孔板在 4°C 下孵育过夜。用磷酸盐缓冲盐水和吐温-20 (PBST-20,pH 7.4) 清洗微孔板 3 次。随后用2%牛血清白蛋白(BSA)封闭微孔板(每孔100 µL),37 ℃孵育1 h,用0.05% PBST清洗微孔板3次,加入血清样品至100 µL(1:100稀释),37 ℃孵育1 h。
培养基中,当细胞仍处于对数生长期时,将其转移到培养基中。一旦细胞接近 100% 汇合,它们就会进入平台期(静止期),其中只有不到 10% 的细胞在活跃分裂,并且细胞更容易受到压力的影响。这种低分裂率使得细胞系难以维持,并且增加了细胞系中随着时间的推移积累不想要的突变的可能性。2. 用基质胶溶液包被六孔板,并在 37°C 下孵育至少 30 分钟。
图 1 hiPSC-NSC 的生成和核型分析。A、在 Matrigel 上生长的 R-iPSC4-hiPSC 菌落。B、用胶原酶 IV 消化 hiPSC 后形成的胚状体 (EB)。C、用 TGF β 抑制剂 SB421543 和 BMP 抑制剂 dorsomorphin 处理的 EB 接种到聚-l-鸟氨酸和层粘连蛋白包被的板上后 7-10 天出现玫瑰花结状结构。D、通过解离玫瑰花结状结构并接种到聚-l-鸟氨酸和层粘连蛋白包被的板上获得神经外胚层细胞。E、F、这些细胞表达 NSC 标记物 Nestin (E) 并在分化第 30 天分化为表达微管相关蛋白 2 (MAP2) 的神经元 (F)。细胞核用 Hoechst 33342 (蓝色) 染色。比例尺:100 µ m。G、H、基于全基因组 SNP 阵列的 hiPSC-NSC 核型分析。针对位于该区域的阵列上所有 SNP,绘制了每条染色体的 B 等位基因频率(上图)和 log 2 R 比率(下图)。每个点都是一个 SNP。虽然第 10 代(p10)的细胞没有显示任何主要核型异常(G),但 p16 的 hiPSC-NSC 表现出 1 号染色体整个长臂的重复,dup(1)q(H)
摘要 迄今为止,纳米粒子 (NP) 已被广泛用于治疗癌症。它们被归类为高效的药物输送系统,因为它们具有出色的性能和设计灵活性,使其具有高度的针对性和安全性。然而,纳米粒子仍然面临着生物稳定性、非特异性、被识别为外来物质和快速清除方面的挑战,这限制了它们在临床上的应用。为了克服这些缺点,提出了先进的仿生纳米技术,使用 T 细胞膜包被的 NP 作为优越的药物输送系统,这可以增加它们的循环时间并防止免疫系统快速从体内清除。免疫 T 细胞具有特定的表面蛋白,可在膜提取和包被过程中将独特的功能转移到仿生 NP。T 细胞表面的此类蛋白质为纳米粒子提供了各种优势,包括延长循环、增加药物靶向范围、控制释放、特定的细胞相互作用和有限的体内毒性。本综述讨论了基于 T 细胞膜的仿生纳米系统、其详细的提取工艺、制造、涂覆 NP 以及这些仿生系统在癌症治疗中的适用性。此外,还介绍了其临床转化的最新应用、未来前景和当前挑战。关键词:癌症治疗、T 细胞修饰纳米粒子、T 细胞膜涂层、特洛伊木马纳米粒子
伪狂犬病毒 (PRV) 是一种导致伪狂犬病的疱疹病毒,可导致猪群死亡率高。要制定有效且新颖的抗病毒策略,必须了解 PRV 感染宿主的入侵机制。病毒进入宿主细胞的方式多种多样。其中之一就是内吞作用,这是一种基本的细胞过程,通过该过程,来自外部环境的物质被内化到细胞中。根据网格蛋白的作用,该过程分为网格蛋白介导的内吞作用 (CME) 和网格蛋白非依赖性内吞作用 (CIE)。尽管已经描述了富含胆固醇的脂筏参与 PRV 的进入,但迄今为止,涉及网格蛋白的其他内吞途径的重要性仍未得到探索。在这里,我们描述了 CME 在 PRV 进入 PK15 猪细胞系中的作用。通过使用 CME 抑制药物,我们发现当 CME 通路被阻断时,PRV 感染率会降低。我们还对衔接蛋白 AP-2 (AP2M1) 的 µ 亚基进行了 shRNA 敲低,该蛋白在网格蛋白包被囊泡的成熟过程中起着重要作用,当敲低该亚基时,感染率会大大降低。此外,透射电子显微镜图像显示 PRV 病毒体位于网格蛋白包被囊泡内。总体而言,这项研究首次表明 CME 是 PRV 进入 PK15 细胞的一种机制,并为其可能的进入途径提供了有价值的见解。
Paragon Automation提供自定义的容器化MGD(CMGD)用户外壳,称为Paragon Shell。系统管理员可以使用Paragon Shell部署和配置Paragon自动化群集。使用OVA或OVF捆绑包在VMware ESXI服务器上创建VM之后,已安装了Paragon Shell CLI。OVA或OVF捆绑包被预先包装,并使用创建节点VM并部署Paragon Automation群集所需的所有软件包。帕拉贡外壳安装在基本操作系统上。
本文提到的所有测试均遵循相同的实验室流程。样本通过基于杂交捕获的靶标富集策略进行制备,以便进行后续的下一代测序。患者基因组 DNA 的等分试样被打碎。通过连接含有独特患者索引的测序接头,将碎裂的 DNA 构建成一个文库。该文库经过纯化,然后通过与一组生物素化探针杂交来富集感兴趣的靶标,然后将其捕获在链霉亲和素包被的珠子上。然后将索引样本汇集并加载到大规模并行的下一代测序仪上进行双端测序。探针设计和 NGS 数据分析针对具有已知假基因区域的基因进行了优化,并根据需要进行了额外的确认测试。