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TBR225是越南北部最受欢迎的商业大米品种之一。然而,这种品种非常容易受到细菌叶枯白(BLB)的影响,这是一种由黄元莫纳斯·奥利扎·PV引起的疾病。oryzae(XOO),可能导致重要的产量损失。OSSWEET14属于编码糖转运蛋白的甜基因家族。与其他进化枝III成员一起,其表现为一种易感性(S)基因,亚洲XOO转录激活剂样效应子(Tales)对于疾病绝对必要。在这项研究中,我们试图在TBR225精英品种中引入BLB耐药性。首先,在TBR225感染后显示了两种越南XOO菌株在上调OSSWEET14。如果这种诱导与疾病易感性相关,则使用CRISPR/CAS9编辑系统获得了OSS-WEET14启动子的九个TBR225突变型线,其中九个具有突变,PTHXO3或TALF TALES TARES DNA TALES DNA目标序列。T 0和T 1个个体的基因分型分析表明,突变是稳定遗传的。三个无基因T2编辑线的所检查的农艺性状与野生型TBR225的较大不同。重要的是,具有最大的纯合6 bp缺失的T 2系之一,显示出OSSWEET14表达的降低,以及对越南XOO菌株的敏感性降低,并且对另一种菌株的完全抗性。我们的发现表明,CRISPR/CAS9编辑赋予了对越南商业精英大米品种的BLB耐药性。
供应形式和标准包装•Estane®ZHF 80AT7以颗粒形式提供,并以50磅的袋子或1000磅的盒子包装。材料制备•在加工之前,必须在220°F(104°C)下干燥estane®ZHF 80AT7 2-4小时。•建议在干燥剂型干燥机中干燥材料。目标露点应为-40°C。•根据所应用的加工技术,最大水分水平应为0.02%。处理条件•可以在任何常规挤出机上处理estane®ZHF80AT7。
SQUAMOSA 启动子结合样 (SPL) 蛋白构成了一个转录因子大家族,已知它们在生长和发育过程中起着关键作用,包括幼年到成年和营养期到生殖期的转变。这使得 SPL 成为烟草属植物精准育种的有趣靶标,例如用作重组生物工厂。我们报告了在烟草品种 K326 中鉴定出的 49 个 SPL 基因和在本氏烟草 LAB 菌株中鉴定出的 43 个 SPL 基因,根据拟南芥中的 SPL 分类,它们被分为八个系统发育组。外显子-内含子基因结构和 DNA 结合域在同源物和直系同源物之间高度保守。我们发现 30 个 NbSPL 基因和 33 个 NtSPL 基因可能是 microRNA 156 的靶标。通过 RNA-seq 分析了叶片中 SPL 基因的表达,发现不受 miR156 控制的基因通常以高水平组成性表达,而 miR156 调控的基因则表现出较低的表达,通常是发育调控的。我们选择了 N. benthamiana SPL13_1a 基因作为 CRISPR/Cas9 敲除实验的靶标。我们在此表明,完全敲除该单个基因会导致开花时间显著延迟,这一特性可用于增加重组蛋白生产的生物量。
1。小儿血液学肿瘤学系,血液和骨髓移植,克利夫兰诊所,俄亥俄州克利夫兰,美国。2。萨拉(Div)的萨拉(Sarah Cannon)研究所,位于田纳西州纳什维尔(Nashville)的特里斯塔(Tristar Centennial)儿童医院。3。科罗拉多大学科罗拉多州儿童医院,科罗拉多大学Anschutz医疗校园,美国科罗拉多州Aurora。4。血液和骨髓移植计划和骨髓加工实验室,美国德克萨斯州达拉斯市贝勒大学医学中心。5。骨髓移植和细胞疗法计划,美国纽约市哥伦比亚大学欧文医学中心。6。血液学和骨髓移植,俄亥俄州克利夫兰,彩虹婴儿和儿童医院。7。Editas Medicine,Inc。,美国马萨诸塞州剑桥。8。加利福尼亚大学,美国加利福尼亚州奥克兰市旧金山贝尼奥夫儿童医院。加利福尼亚大学,美国加利福尼亚州奥克兰市旧金山贝尼奥夫儿童医院。
和缺失分别以+和-表示。i 使用酶StuI对T0纯合突变体进行限制性消化筛选。野生型Solanum etuberosum产生消化的PCR带(蓝色箭头),而突变植物产生对StuI消化有抗性的PCR带。J、k CR-SeSP5G突变体在短日照条件下开花,而野生型在短日照条件下不能开花。比例尺:1厘米;NF,无花。
1. 美国田纳西州纳什维尔 TriStar Centennial 儿童医院 Sarah Cannon 研究所。2. 美国俄亥俄州克利夫兰克利夫兰诊所儿科血液肿瘤学和血液与骨髓移植科。3. 美国科罗拉多州奥罗拉科罗拉多大学安舒茨医学院科罗拉多儿童医院。4. 美国德克萨斯州达拉斯贝勒大学医学中心血液与骨髓移植项目和骨髓处理实验室。5. 美国纽约州纽约市哥伦比亚大学欧文医学中心骨髓移植和细胞治疗项目。6. 美国俄亥俄州克利夫兰 Rainbow 婴儿与儿童医院血液学和骨髓移植科。7. 美国马萨诸塞州剑桥 Editas Medicine, Inc. 8. 美国加利福尼亚州奥克兰加利福尼亚大学旧金山分校贝尼奥夫儿童医院。
合成了具有最高预测效力的构建体并在 HEK293T 细胞中进行了测试。第一代的结果表明,大多数增强子+启动子构建体的性能与母体 C6 启动子一样好或更好。特别是,构建体 C120 和 C124 分别表现出约 30% 和约 40% 的提高效力。同样,一些点突变导致性能提高 10% 到 30%。超突变构建体(采用迭代或贪婪方法)破坏了 HEK293T 细胞中的启动子活性。根据第一代的结果,我们合理地设计了一组新的构建体,这些构建体基于体外表达最高的构建体的组合。第二代在 HEK293T 细胞中进行了测试,所有构建体都表现出比亲本 C6 更高的表达。特别是,与原始 C6 构建体相比,构建体 C187 达到了约 2 倍的改善。
它们的活性如何结合起来控制 RNA 表达仍不清楚。在这里,我们设计了一种高通量报告基因检测方法,称为 ExP STARR-seq(增强子 x 启动子自转录活性调控区测序),并用它来检查人类 K562 细胞中 1,000 个增强子和 1,000 个启动子序列的组合兼容性。我们确定了增强子-启动子兼容性的简单规则:大多数增强子以相似的量激活所有启动子,并且内在增强子和启动子活性相乘地结合起来决定 RNA 输出(R 2 =0.82)。此外,两类增强子和启动子显示出微妙的优先效应。管家基因的启动子含有内置的激活基序,例如 GABPA 和 YY1 等因子,这降低了启动子对远端增强子的反应性。可变表达基因的启动子缺乏这些基序,对增强子表现出更强的反应性。总之,对增强子-启动子兼容性的系统评估表明,通过增强子和启动子类别调整的乘法模型可以控制人类基因组中的基因转录。