(未通过同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本版的版权持有人于2024年2月22日发布。 https://doi.org/10.1101/2024.02.21.581282 doi:biorxiv Preprint
(未通过同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本版的版权持有人于2024年2月22日发布。 https://doi.org/10.1101/2024.02.20.581294 doi:Biorxiv Preprint
HR 比 NHEJ 慢得多,NHEJ 可以从 DSB 事件中拯救更多细胞。NHEJ 几乎不需要或根本不需要末端切除来直接重新连接 DSB 末端。相比之下,HR 需要短距离切除和长距离切除 DSB 以及供体来实施修复过程。此外,其他蛋白质也可能是 HR 修复途径的限制因素 [18, 19]。我们在此发现,在同时删除两个基因和整合多个片段期间,将 MRE11 与 CAS9 融合可提高 CFU 数量
通过外切酶融合改进 FnCas12a 基因组编辑 吴永强 1*,袁其晨 2*,朱玉峰 3,高翔 4,宋家宝 5,尹子如 6 1 河北科技大学基因编辑研究中心,河北石家庄 050018。2 美国莱斯大学化学与生物分子工程系,休斯顿,德克萨斯州 77005,美国。3 河北科技大学科技发展研究所,河北石家庄。4 河北科技大学环境科学与工程学院,河北石家庄 050018。5 河北科技大学生物科学与生物工程系,河北石家庄。 6 河北科技大学期刊出版社,河北石家庄 050018。 * 通讯作者:吴永强(wuyongqiang@hebust.edu.cn),袁其晨(yqc@rice.edu) 摘要 在目前报道的 Cas12a 直系同源物中,新凶手弗朗西斯菌 Cas12a (FnCas12a) 受原型间隔区相邻基序 (PAM) 的限制较少,这将有助于靶向以前无法接近的基因组位点。然而,FnCas12a 核酸酶的活性在人体细胞中相对较低或无法检测到,限制了其作为理想基因组工程工具的应用。在这里,我们描述了 TEXT(将 EXonuclease T5 与 FnCas12a 连接),这是一种融合策略,可显着提高人体细胞中 FnCas12a 在三种不同细胞系中的多个基因组位点的敲除效率。使用18nt至23nt的不同间隔长度,TEXT的插入和删除(indel)效率均高于FnCas12a,其中18nt的插入效率最高,比FnCas12a高出11倍。深度测序表明,TEXT显著增加了目标位点的删除频率和删除大小。TEXT增强了FnCas12a核酸酶的活性,拓展了其在人类细胞基因组工程中的应用。
通过外切酶融合改进 FnCas12a 基因组编辑 吴永强 1*、袁其晨 2*、朱玉峰 3、高翔 4、宋家宝 5、尹子如 6 1 河北科技大学基因编辑研究中心,河北石家庄 050018。2 美国莱斯大学化学与生物分子工程系,休斯顿,德克萨斯州 77005,美国。3 河北科技大学科技发展研究所,河北石家庄。4 河北科技大学环境科学与工程学院,河北石家庄 050018。5 河北科技大学生物科学与生物工程系,河北石家庄。 6 河北科技大学期刊出版社,河北石家庄 050018。 * 通讯作者:吴永强(wuyongqiang@hebust.edu.cn),袁其晨(yqc@rice.edu) 摘要 在目前报道的 Cas12a 直系同源物中,新凶手弗朗西斯菌 Cas12a (FnCas12a) 受原型间隔区相邻基序 (PAM) 的限制较少,这有助于靶向以前无法接近的基因组位点。然而,FnCas12a 核酸酶的活性相对较低或无法观察到,限制了其作为理想基因组工程工具的应用。在这里,我们描述了 TEXT(将 EXonuclease T5 与 FnCas12a 连接),这是一种融合策略,可显着提高 FnCas12a 在人类细胞中在三种不同细胞系中的多个基因组位点的敲除效率。 TEXT 在 18nt 至 23nt 不同间隔长度下均表现出比 FnCas12a 更高的插入和缺失效率,其中 18nt 的插入效率最高,比 FnCas12a 高出 11 倍。深度测序表明 TEXT 显著增加了目标位点的缺失频率和大小。总之,TEXT 增强了 FnCas12a 核酸酶的活性,拓展了其在人类细胞基因组工程中的应用。