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通过外切酶融合改进 FnCas12a 基因组编辑 吴永强 1*，袁其晨 2*，朱玉峰 3，高翔 4，宋家宝 5，尹子如 6 1 河北科技大学基因编辑研究中心，河北石家庄 050018。2 美国莱斯大学化学与生物分子工程系，休斯顿，德克萨斯州 77005，美国。3 河北科技大学科技发展研究所，河北石家庄。4 河北科技大学环境科学与工程学院，河北石家庄 050018。5 河北科技大学生物科学与生物工程系，河北石家庄。 6 河北科技大学期刊出版社，河北石家庄 050018。 * 通讯作者：吴永强（wuyongqiang@hebust.edu.cn），袁其晨（yqc@rice.edu） 摘要 在目前报道的 Cas12a 直系同源物中，新凶手弗朗西斯菌 Cas12a (FnCas12a) 受原型间隔区相邻基序 (PAM) 的限制较少，这将有助于靶向以前无法接近的基因组位点。然而，FnCas12a 核酸酶的活性在人体细胞中相对较低或无法检测到，限制了其作为理想基因组工程工具的应用。在这里，我们描述了 TEXT（将 EXonuclease T5 与 FnCas12a 连接），这是一种融合策略，可显着提高人体细胞中 FnCas12a 在三种不同细胞系中的多个基因组位点的敲除效率。使用18nt至23nt的不同间隔长度，TEXT的插入和删除（indel）效率均高于FnCas12a，其中18nt的插入效率最高，比FnCas12a高出11倍。深度测序表明，TEXT显著增加了目标位点的删除频率和删除大小。TEXT增强了FnCas12a核酸酶的活性，拓展了其在人类细胞基因组工程中的应用。
通过核酸外切酶融合改进FnCas12a基因组编辑
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