Patient-derived tumor explant Models of tumor immune Microenvironment Reveal Distinct and Reproducible Immunotherapy Responses Rita Turpin * 1.2, Karita Peltonen 3.4,5 *, Jenna H. Coast 2, Ruixian Juo 1, Anita N. Kumari 3,4 1, Moon Hee Lee 3,4, Minna Mutka 6, Panu E. Kovanen 6, Laura Niinikoski 7,Tuomo Meretoja 7,Johanna Mattson 8,PetrusJärvinen9,Kanerva Lahdensuo 9,RiikkaJärvinen9,Sara Tornberg 9,Tuomas Mirtti 10,PiaBostrti 10,PiaBoström11,Ilkka Koskka Koskka Koskka Koskka Koskka Koskka Koskka Koskka Koskka Koskka Koskka Koskka Koskka Koskka Koskka Koskka Koskka Koskka Koskka Koskkivuo 12。 Pouwels 1,MaijaHollmén2 **,Satu Mustjoki 3,4,5 **,JuhaKlefström1,14,15,16** 1癌细胞巡回赛实验室,转化癌症医学,医学院,赫尔辛基大学医学院。
未成熟胚和未成熟花序是间接高粱再生的最佳外植体。然而,从田间或温室中获取这些外植体需要很长的培养期。因此,幼苗的茎尖具有很大的优势,可以很容易地获得外植体,以满足全年基因转化实验的需求。这里我们报告了两种埃及高粱品系 LG1 和 LG3 的幼苗茎尖快速再生方案。愈伤组织诱导培养基 CIM1 和 CIM2 的合成生长素 2,4-二氯苯氧乙酸 (2,4-D) 和激动素 (Kin) 的浓度不同,它们在促进两种基因型的愈伤组织形成方面的能力不同,然而,这两种基因型对愈伤组织诱导的反应明显不同。 LG3 在 CIM1 上的最低愈伤组织指示百分比和最高愈伤组织诱导百分比分别为 16.60% 和 33.65%,而 LG1 在 CIM2 上的最低愈伤组织指示百分比和最高愈伤组织诱导百分比分别为 33.65%。两种基因型的愈伤组织再生差异不显著,最低为 11.29%,最高为 20.15%。我们的研究结果表明,利用这些埃及高粱品系进行组织培养以进行转基因和基因编辑具有潜力。
教学大纲:植物组织培养实验室的要求;植物组织培养的技术;媒体组件和准备工作;各种外植体的灭菌技术和接种;各种外植体的无菌操纵;愈伤组织诱导和植物再生;重要农作物的微型传播;花药,胚胎和胚乳文化;再生植物的硬化 /适应;体细胞胚发生和合成种子的产生;分离原生质体;培养原生质体的演示;隔离DNA的证明;基因转移技术的演示,直接方法;基因转移技术的演示,间接方法;证明遗传转化的确认;凝胶电泳技术的演示。纳米颗粒的绿色合成及其大小的表征。
背景:事后组织是细胞疗法的茎/祖细胞的潜在来源,保存种质和通过克隆复兴濒危和/或死亡物种的复兴。然而,动物死亡后可以恢复多长时间。这项研究的目的是评估可从冷藏绵羊皮肤中回收活细胞的死后间隔(PMI)窗口。耳朵皮是从屠宰场的动物中采购的,并在实验室中存储在4°C。小型外植体(2-3 mM 2)。在37°C培养物在CO 2孵化器中培养10-12天后对外植体周围的细胞产物进行评分,并将来自选定PMI的细胞培养3-5次,并在其生长谱,遗传稳定性,冷冻保存能力和基因表达方面进行表征。
摘要 桉树属有 900 多个品种和杂交种,其中许多是珍贵的速生硬木。由于其经济重要性,桉树是较早被破译基因组的树种之一。然而,缺乏有效的遗传转化系统严重制约了该植物的功能基因组学研究。桉树再生和转化的成功在很大程度上取决于基因型和外植体。在本研究中,我们系统地筛选了 12 个桉树品种的 26 个基因型,试图获得具有高再生潜力的桉树基因型。我们开发了两种常见的再生培养基,可用于大多数受试桉树基因型的播种下胚轴和克隆的节间作为外植体。然后,我们使用 DsRed2 作为遗传转化效率测试的视觉标记。我们的结果表明,E. camaldulen 和 E. robusta 适合进行遗传转化。最后,我们分别使用播种下胚轴和克隆节间成功地建立了稳定的农杆菌介导的桉树和桉树的遗传转化程序。总之,我们的研究为桉树的无性繁殖、基因转化、基于 CRISPR 的基因诱变、激活和抑制以及基因的功能表征提供了有价值的手段。
6校正:使用人肝组织外植体(PLOS ONE 12:8(e0181962)doi:10.1371/journal.pone.0181962) 6校正:在感染模型中,在感染模型中,Entamoeba Histoltica vs E. Dispar的致病基因的差异表达:PONE.0181962)6校正:在感染模型中,在感染模型中,Entamoeba Histoltica vs E. Dispar的致病基因的差异表达:PONE.0181962)
图1的遗传转化效率(ET)线。10个选定的F8线被用作202材料,用于转化Pant1ox构建体。从幼苗中切出7天大的子叶,并通过pant1ox构建体转化203个子叶,然后在卡纳米霉素选择培养基上生长。在一个实验中使用了至少30个204个外植体。进行了三个生物学重复。pant1ox 205构造。kanr:kanamycin表达录音带(pnos-nptii-tocs),p35s:CAMV35S长启动器。b 206 slant1在番茄共叶中的表达(代表性图片)。上图:转换后21 207天的Slant1表达(DAT)。紫色箭头指示紫色斑点。下面板:紫色芽(左)208和水果(右)。c转换效率。y轴显示平均每209个外植体的紫色斑点。 X轴表示在本实验中测试的番茄F8线。数据表示平均值±SD。n = 3。210星号表示ET线与对照HK之间的显着差异(P <0.05),为211由t检验确定。212
2 兰契大学植物学系,兰契,贾坎德邦,印度 3 兰契大学植物学系生物技术硕士,兰契大学植物学系,印度贾坎德邦 4 兰契大学植物学系生物技术硕士,兰契大学植物学系,印度贾坎德邦 摘 要 本研究旨在建立一种优化的印度芥菜 (L.) Czern & Coss. (芥菜) 不同部位的体外愈伤组织诱导和增殖方案。将叶和茎外植体培养在补充了各种生长素和细胞分裂素浓度的 Murashige 和 Skoog (MS) 培养基中,以获得愈伤组织形成的最佳生长条件。所测试的激素组合包括 0.5、1 和 2 mg/L 的吲哚-3-乙酸 (IAA)、0.5、1 和 2 mg/L 的苄氨基嘌呤以及 0.5、1 和 2 mg/L 的 2,4-二氯苯氧乙酸 (2,4-D)。基于愈伤组织诱导频率,在不同时期和光照、温度和湿度培养条件下,对叶片和茎外植体产生的愈伤组织进行三次重复评估。在以 1:1 的比例补充 BAP 和 2,4 D 的 MS 培养基中,将叶片作为外植体的结果显示,接种 45 天后愈伤组织诱导率最高,这是独一无二的。茎外植体接种 45 天后,在激素浓度 BAP:IAA(0.5:1)下产生愈伤组织。这些产生的愈伤组织显示出明显的伸长和良好的叶片形状。未分化愈伤组织增生、变绿并形成成熟芽凸显了愈伤组织的有效性。继代培养后,愈伤组织的习惯化和持续传代使得培养基中无需添加细胞分裂素。愈伤组织获得细胞分裂素,导致出芽和营养器官发育。反过来,这些细胞允许器官发生,成熟植物成功再生。这种可重复的方案可用于愈伤组织诱导和植物再生,这是植物育种或生物技术应用(包括用于作物改良的基因转化)的重要工具。此外,通过既定的方案,对芥菜组织中植物激素之间相互作用的认识得到了提高。 关键词:愈伤组织、再生、生长素、作物、BAP、器官发生、芥菜 (L.) 1. 引言 在植物组织培养中,愈伤组织发生和器官发生是基因转化和作物发育所必需的过程。这些程序中的一个关键阶段是有效的愈伤组织诱导,它为以后的再生和转化提供所需的细胞材料。先前的研究表明,为了在不同芸苔属植物中获得较高的愈伤组织诱导率和植物再生,优化植物激素浓度至关重要(Gupta & Chaturvedi,2021 年;Singh 等人,2020 年)。大多数人称之为印度芥菜,Brassica juncea (L.) Czern. & Coss。是一种广泛种植的油籽作物,其油料和叶类蔬菜对经济十分重要。
抽象的树枝状菌Asper是一种具有较高商业价值的竹类,是世界热带地区大规模农业林木种植园的首选竹子。使用组织培养的微磷化对于产生均匀的克隆至关重要的,这些克隆可容纳在工业农业污染项目中,用于竹类生物量,栖息地恢复或碳固存中。本文报告了使用市售种子建立D. Asper Invitro。使用三种不同的化学剂(次氯酸钠(20%),氯化汞(0.1%)和乙醇(70%),然后在Murashige和Skoog(MS)培养基上以6-苯甲酰胺(BAP)补充,浓度为1.0 -0 -0 -0 -0 -MG/l。在补充不同浓度的IBA吲哚-3-丁酸(IBA)和萘乙酸(NAA)的MS培养基上乘以繁殖,并最终在泥炭苔藓中生根并坚硬。我们的研究结果表明,灭菌方案消除了所有植物病原体,从而产生了轴突培养。补充5 mg/l BAP的全强度MS培养基在接种四个星期后产生的芽数量最高(每位外植体11.46)。在补充了3 mg/l BAP的MS培养基上获得了最高的乘法率(每次外植体3.95芽)。从启动到硬化所需的时间为70至90天,随后植物会准备进行现场试验。这项研究的结果将促进建立致力于生产D. Asper在本地生产的植物组织培养计划,从而消除了对进口的需求以及可能对当地农业林业行业有害的植物病原体的可能进入。关键字:dendrocalamus asper;竹子;微爆; 6苄基氨基嘌呤;吲哚-3-丁酸;萘乙酸; Murashige和Skoog Medium
在人类和其他灵长类动物中,由于BDNF基因在巨核细胞中的表达,血小板含有高浓度的脑源性神经营养因子。相比之下,通常用于研究中枢神经系统病变的影响的小鼠在血小板中没有明显水平的脑衍生的神经营养因子,并且它们的巨核细胞没有大量的bdnf基因。在这里,我们使用两种良好的CNS病变模型探索了血小板脑源性神经营养因子的潜在贡献,并使用“人源化”小鼠在巨核细胞特异性启动子的控制下使用“人性化”小鼠进行表达BDNF基因。使用二元术和通过sholl分析后评估的视网膜神经节细胞的树突状细胞的树状完整性标记了由含有脑源性神经营养因子的小鼠制备的视网膜外植体。将结果与野生型动物的视网膜以及补充饱和浓度的脑源性神经营养因子或tropomyosin激酶B抗体激动剂ZEB85的野生型外植体进行了比较。还进行了视神经张力,视网膜神经节细胞的树突在伤害后7天评估,将血小板中含有脑源性神经营养因子的小鼠与野生型动物进行了比较。在含有脑源性神经营养因子的小鼠中,纯合子的平均血清脑源性神经营养因子水平为25.74±11.36 ng/ml,17.02±6.44 ng/ml的杂氮小鼠,近乎杂合小鼠,接近原始的小鼠。基于细胞计数的视网膜神经节细胞存活在所有四组中均相似,显示约15%的损失。表现出强大的树突复杂性保存,类似于与补充脑衍生的神经营养因子或真霉素受体激酶B抗体抗体抗体激动剂的培养基孵育的野生型外植体,Zeb85。曲线下的sholl区域为1811±258、1776±435和1763±256,而野生型对照组中的Sholl区域为1406±315(p≤0.001)。在评估反式基因小鼠中视网膜神经节细胞的树突时,还观察到了一种强大的神经保护作用,与野生型相比,弯曲曲线下的视网膜神经节细胞的树突明显更高(2667±690和1921±392,p = 0.026),并且在无显着差异中,并且是无显着差异的。重复实验发现细胞存活没有差异,两者均显示约50%的损失。这些结果表明,血小板脑衍生的神经营养因子对视网膜神经节细胞的树突复杂性具有强大的神经保护作用,在体内和体内模型中,这表明血小板脑源性的神经营养因子可能是灵长类动物的重要神经保护因子。