骨折的愈合可能会变得异常,并导致骨折,进而对患者健康产生负面影响。了解为什么骨骼通常无法治愈的原因会使我们能够对患者的生活产生积极影响。虽然我们在裂缝修复的啮齿动物模型上拥有大量的分子数据,但人类与人类不一样。因此,仍然缺乏有关正常生理修复和骨无法分子差异的信息。这项研究旨在通过比较生理裂缝愈伤组织与两种不同的骨不连类型的差异表达的基因(DEG),即肥厚(HNU)和贫营养(ONU)之间的差异表达基因(DEG)来解决这一差距。RNA测序数据在每个样品中揭示了约18,000个基因。使用生理愈伤组织作为对照和肉骨样品作为实验组,生物信息学分析分别确定了HNU和ONU的67和81统计学意义的DEG。在HNU的67摄氏度中分别向上和下调。同样,在ONU的81度中,48和33分别向上和下调。此外,我们还确定了两个骨不连的样品之间的共同基因。 8(10.8%)上调,12(22.2%)下调。我们进一步确定了许多生物学过程,并具有几种具有统计学意义的生物过程。其中一些与肌肉有关,并且在两个骨不连的样品之间很常见。这项研究代表了了解人类肉瘤生物学中发生的全球分子事件的首次全面尝试。通过进一步的研究,我们也许可以破译可能针对治疗靶向的人骨骨折的异常愈合的新分子途径。
摘要 本研究利用CRISPR/Cas9核糖核蛋白(RNP)复合体系统对康乃馨乙烯(ET)生物合成基因[1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)合成酶1(ACS1)和ACC氧化酶1(ACO1)]进行编辑。首先,验证靶基因(ACS1和ACO1)的保守区域,以生成不同的单向导RNA(sgRNA),然后使用体外切割试验验证sgRNA特异性切割靶基因的能力。体外切割试验表明,sgRNA在切割各自的靶区域方面具有很高的效率。将sgRNA:Cas9复合物直接递送到康乃馨原生质体中,并对原生质体中的靶基因进行深度测序。结果表明,sgRNA 适用于编辑 ET 生物合成基因,因为 ACO1 的突变频率范围为 8.8% 至 10.8%,ACS1 的突变频率范围为 0.2–58.5%。在对用 sgRNA:Cas9 转化的原生质体产生的愈伤组织中的目标基因进行测序时,在 ACO1 中发现了不同的 indel 模式(+ 1、- 1 和 - 8 bp),在 ACS1 中发现了不同的 indel 模式(- 1、+ 1 和 + 11)。这项研究强调了 CRISPR/Cas9 RNP 复合物系统在促进康乃馨 ET 生物合成的精确基因编辑方面的潜在应用。关键词 愈伤组织,CRISPR/Cas9,乙烯生物合成基因,Indel 模式,体外裂解,原生质体
教学大纲:植物组织培养实验室的要求;植物组织培养的技术;媒体组件和准备工作;各种外植体的灭菌技术和接种;各种外植体的无菌操纵;愈伤组织诱导和植物再生;重要农作物的微型传播;花药,胚胎和胚乳文化;再生植物的硬化 /适应;体细胞胚发生和合成种子的产生;分离原生质体;培养原生质体的演示;隔离DNA的证明;基因转移技术的演示,直接方法;基因转移技术的演示,间接方法;证明遗传转化的确认;凝胶电泳技术的演示。纳米颗粒的绿色合成及其大小的表征。
荞麦 (Fagopyrum tataricum (L.) Gaertn.) 是一种特殊的作物,以其显著的健康益处、高含量的有益多酚和无麸质特性而闻名,使其成为备受追捧的功能性食品。它的自花授粉能力和对恶劣环境的适应性进一步增强了它作为可持续农业选择的潜力。为了利用其独有的性状,荞麦的遗传转化至关重要。在本研究中,我们优化了农杆菌介导的荞麦愈伤组织转化方案,使再生植物的转化率达到约 20%。通过成功的 GUS 染色、GFP 表达以及通过 FtPDS 基因失活产生白化植物,证实了该方案的有效性。这些结果验证了基因操作的可行性,并强调了荞麦性状增强的潜力。
转化和基因组编辑技术是从基础研究到实用材料生产、植物育种等实际应用领域中不可或缺的技术。在植物研究中,遗传转化、基因组编辑技术、个体再生以及组织和细胞培养系统都是必不可少的。组织培养研究始于20世纪初。Haberlandt(1902)提出植物细胞具有全能性,这通过发现从生长中的愈伤组织中分化出的不定芽得到证实(White等人,1939)。随后,许多研究人员尝试诱导不定芽和根的分化。组织和细胞培养技术的突破是植物激素的发现,例如细胞分裂素和生长素。研究发现,控制细胞分裂素与生长素的比例可以调节烟草的不定芽和根的分化(Skoog和Miller,1957)。Steward等人(1958)和Reinert(1959)从胡萝卜愈伤组织诱导体细胞胚再生出完整的植物。该生长过程在形态上类似于受精卵的胚胎发育,因此再生被称为体细胞胚胎发生。这一认识为研究分化机制和应用遗传转化和基因组编辑提供了一种重要方法。同时,许多用于培养组织和细胞的基础培养基也被开发出来,其中一些至今仍在使用。Murashige 和 Skoog (1962) 报道了一种通过培养烟草髓细胞来优化营养浓度的培养基(MS 培养基)。Gamborg 等人 (1968) 报道了用于培养大豆根尖细胞的 B5 培养基。其他已建立的培养基包括 White 培养基(White 1963)、LS 培养基(Linsmaier 和 Skoog 1965)、NN 培养基(Nitsch 和 Nitsch 1969)、N6 培养基(Chu 1978)和 AA 培养基(Müller 和 Grafe 1978)。通过调节植物激素条件、改变碳源、改良无机盐等,可以开发出适合每种植物材料的培养基。
员工之前请病假超过 30 天,现已复职,但因相同或相关的疾病或受伤再次请病假。 员工之前请病假超过 30 天,现已复职,但因相同或相关的疾病或受伤再次请病假。该员工将于/大约 _ 处于无薪休假状态。上述员工将于/大约 _ 处于无薪病假状态。
荞麦 (Fagopyrum tataricum (L.) Gaertn.) 是一种特殊的作物,以其显著的健康益处、高含量的有益多酚和无麸质特性而闻名,使其成为备受追捧的功能性食品。它的自花授粉能力和对恶劣环境的适应性进一步增强了它作为可持续农业选择的潜力。为了利用其独有的性状,荞麦的遗传转化至关重要。在本研究中,我们优化了农杆菌介导的荞麦愈伤组织转化方案,使再生植物的转化率达到约 20%。通过成功的 GUS 染色、GFP 表达以及通过 FtPDS 基因失活产生白化植物,证实了该方案的有效性。这些结果验证了基因操作的可行性,并强调了荞麦性状增强的潜力。
2伊拉克蒂克里特大学理学院生物学系。*通信电子邮件:nadhimsalim@tu.edu.iq摘要该实验是在园艺和景观系的植物组织培养实验室进行的 - 农业学院 - tikrit大学。该实验旨在了解铜醇及其概述的基础构造的作用。底物将罗勒植物种子播种在固体中型murashige和skoog中(没有植物生长调节剂)。在Murashige和Skoog培养基上取出真正的叶子,并提供(0.0、0.5、1.0、1.5和2.0)2,4 -D的MGL -1),将2,4 -D的Mgl -1与浓度为0.5 mgl -1的亲属混合。种植4周后,结果表明,使用2,4 -D的浓度之间的愈伤组织产生变化。浓度为2.0 mg l-
明显分为阳性和阴性;根据我们的观察,没有子叶表现出嵌合 GFP 荧光(图 4a-j)。在具有活性 GFP 的绿色发芽体细胞胚中,由于叶绿素自发荧光强,几乎观察不到 GFP 荧光;相反,在胚基部的愈伤组织中观察到 GFP 荧光(图 4d,i)。为了研究子叶体细胞胚中的嵌合性,使用 8-30 个子叶胚(来自 6 个品系的 139 个)进行了测序分析。来自品系#47-2 的一个子叶胚在一个体细胞胚中有两种修饰模式。然而,在其他品系中,突变模式在单个子叶胚中明显分开(图 4k)。接下来,通过分析 4 个品系(分别为 #42 - 2、#18、#31 - 2 和 #11)中各 10 个通过体细胞胚胎发生再生的幼苗,分析了突变模式的稳定性。
作物。对 87 种芒属植物基因型的初步筛选确定了胚性愈伤组织形成和再生的显著差异,而另一子集则显示出通过农杆菌或基因枪转化的能力差异——所有这些因素都可能影响基因编辑效率。针对五种基因型开发了优化程序,其中包括一种 Msi (2x)、两种 Msa (2x 和 4x) 和一种 Mxg (3x)。设计了一种多步骤筛选方法来设计能够成功靶向基因同源物的 gRNA,有利于靶向古异源多倍体芒属植物中的基因。在玉米中靶向以通过 CRISPR/Cas9 产生突变体的视觉标记基因 lw1 [36, 37, 38] 被选为芒属植物的靶向基因。编辑后的 lw1 中的叶子表型(淡绿色/黄色、条纹、白色)是一个引人注目的视觉标记