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World File Search System溶菌酶
大肠杆菌高效生产功能性溶菌酶
摘要 Proaerolysin 是由嗜水气单胞菌产生的一种细菌毒素，它特异性地与质膜上的 GPI 锚定蛋白结合，形成跨膜孔，导致细胞在几个小时内死亡。利用这种独特的特性，proaerolysin 被广泛用于阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (PNH) 的诊断测试，这是一种由 PIGA 基因体细胞突变引起的疾病，该基因参与 GPI 锚的生物合成。此外，proaerolysin 还可作为基因操作中的反选择剂。尽管之前已经报道过 proaerolysin 的细菌表达和纯化，但由于缺乏对蛋白质稳定性至关重要的内部二硫键，产量较低。在这里，我们证明使用 Shuffle E. coli 菌株（它促进细胞质中二硫键的形成）可显著提高 proaerolysin 的溶解度和正确折叠。我们实现了高产量的 proaerolysin，从 50 ml 细菌培养物中可获得约 3 mg，纯度超过 99%。通过在小鼠胚胎干细胞 (mESC) 中进行测试，证实了重组 proaerolysin 的功能性，表明这种高产量生产方法为广泛的生物技术应用提供了可靠且经济高效的功能性 proaerolysin 来源。
litopenaeus vannamei c型溶菌酶的免疫信号及其在微孢子虫肠肠肠肠肝范（EHP）感染中的作用
微孢子虫肠肠肝癌（EHP）是一种与真菌相关的，形成孢子的寄生虫。EHP感染会导致虾的生长迟缓和大小变化，从而导致严重的经济损失。 对虾免疫反应的研究表明，在EHP感染后，几种抗微生物肽（AMP）上调。 在那些高度高度的放大器中是C型溶菌酶（LV LYZ-C）。 然而，负责虾中LV LYZ-C产生的免疫信号通路及其针对EHP感染的功能仍然很少了解。 在这里，我们表征了主要的虾免疫信号通路路径，并发现在EHP感染后TOLL和JAK/STAT途径被上调。 击倒JAK/STAT途径中的无效（圆顶）受体，导致LV LYZ-C显着降低，EHP拷贝数的升高。 我们通过在大肠杆菌中异源表达重组LV LYZ-C（R LV Lyz-c）进一步阐明了LV LYZ-C的功能。 r lv lyz-c表现出针对多种细菌的抗菌活性，例如枯草芽孢杆菌和弧菌副溶血性。 有趣的是，我们发现R LV LYZ-C对白色念珠菌的抗真菌活性，这使我们进一步研究了R LV Lyz-C对EHP孢子的影响。 与R lv lyz-c的EHP孢子一起孵育，然后再构成几丁质染色，表明信号以剂量依赖性的方式显着降低，这表明R LV LYZ-C可能会在EHP孢子上消化一件几丁蛋白。 我们假设EHP内孢子的变薄会导致渗透率改变，从而影响孢子发芽。EHP感染会导致虾的生长迟缓和大小变化，从而导致严重的经济损失。对虾免疫反应的研究表明，在EHP感染后，几种抗微生物肽（AMP）上调。在那些高度高度的放大器中是C型溶菌酶（LV LYZ-C）。然而，负责虾中LV LYZ-C产生的免疫信号通路及其针对EHP感染的功能仍然很少了解。在这里，我们表征了主要的虾免疫信号通路路径，并发现在EHP感染后TOLL和JAK/STAT途径被上调。击倒JAK/STAT途径中的无效（圆顶）受体，导致LV LYZ-C显着降低，EHP拷贝数的升高。我们通过在大肠杆菌中异源表达重组LV LYZ-C（R LV Lyz-c）进一步阐明了LV LYZ-C的功能。r lv lyz-c表现出针对多种细菌的抗菌活性，例如枯草芽孢杆菌和弧菌副溶血性。有趣的是，我们发现R LV LYZ-C对白色念珠菌的抗真菌活性，这使我们进一步研究了R LV Lyz-C对EHP孢子的影响。与R lv lyz-c的EHP孢子一起孵育，然后再构成几丁质染色，表明信号以剂量依赖性的方式显着降低，这表明R LV LYZ-C可能会在EHP孢子上消化一件几丁蛋白。我们假设EHP内孢子的变薄会导致渗透率改变，从而影响孢子发芽。透射电子显微镜分析表明，主要由几丁质组成的内孢子层被R LV LYZ-C消化。最后，我们观察到用R LV LYZ-C处理的EHP孢子显示孢子发芽率显着降低。这项工作提供了对负责LV LYZ-C产生及其抗EHP特性的虾免疫信号通路的见解。这些知识将作为制定EHP控制策略的重要基础。
溶菌酶抑制剂作为溶菌酶分析的工具
摘要：溶菌酶是动物先天免疫系统的通用成分，它们通过水解其主细胞壁聚合物肽聚糖而杀死细菌。已经确定了三个主要的溶菌酶家族，称为鸡（c） - ，鹅（g）和无脊椎动物（i）-type。在反应中，细菌对三个溶菌酶家族中的每一个都进化了特定的蛋白抑制剂。在这项研究中，我们开发了由三个由C-，G-和I型型抑制剂功能化的三个Af-fiential矩阵的序列阵列，用于溶菌酶键入，即检测和区分溶菌酶从动物中流动或提取物。该工具在蓝贻贝（Mytilus Edulis）上进行了验证，其基因组具有多种推定的I-，G-和C型溶菌酶基因。血淋巴等离子体包含I-和G型，但不含C型溶菌酶。此外，分别分析了缺乏或过量产生I-type或G-type溶菌酶抑制剂的嗜水和大肠杆菌菌株的血淋巴存活，以研究两种溶菌酶在先天免疫中的作用。结果表明，G型溶菌酶在蓝贻贝的先天免疫中发挥了积极作用，但未能显示I-type溶菌酶的贡献。使用基于抑制剂的AFINIDE色谱法进行溶菌酶填充将是研究动物先天免疫的有用新工具。