4。离心1分钟@≥8000x g。这是“洗手#1”。5。将列转移到新的1.5 ml管,标有相同名称和“洗手#2”。6。将50 µL缓冲液直接添加到柱膜上,然后在新管中离心1分钟 @≥8000x g。这是洗脱#2。7。将样品(洗脱#1和洗脱#2存储在4°C下。如果几个月不使用DNA,请为冰箱制作等分试样并保留
航空发动机润滑油 ................................................................................................................ 1C980 航空电子设备、零件和部件 ................................................................................................ 7A994 不在 USML 上的军用航空电子系统、设备、零件...................................................... 7A611/3A611 航空电子设备 EMP/EMI 防护技术 ............................................................................................. 7E102 地面车辆的车轴 ............................................................................................................. 0A606.y.3 炭疽芽孢杆菌 ............................................................................................................. 1C351.c.1 电连接器后壳 ............................................................................................................. 3A611.y.9 细菌 ............................................................................................................................. 1C351.c 细菌 ............................................................................................................................. 1C354.a 平衡机 ............................................................................................................................. 2B119.a 离心多平面平衡机 ............................................................................................................. 2B229平衡机,离心多平面……
所有离心步骤均在室温下执行。确保使用的离心管能够承受所需的离心力。用Norgen的血浆/血清细胞无循环的DNA纯化试剂盒提供的自旋柱被优化可与台式离心机一起使用,并且不适用于真空设备大多数标准的台式台式微型离心机将容纳Norgen的Micro和Mini Spin柱。离心诺根的自旋柱以比该过程中建议的高速速度可能影响DNA产量。以比该过程中建议的速度低的离心NORGEN的自旋柱不会影响DNA产量。但是,在较低速度下离心可能需要更长的时间才能通过旋转柱进行•清洁,一次性手套应始终戴上处理试剂,样品,移液器,一次性管等时,应始终戴上固定柱。建议经常更换手套以避免污染。确保所有溶液在使用前都处于室温下,并且没有形成沉淀物。如有必要,请加热解决方案并充分混合,直到解决方案再次变得清晰。通过将24毫升的96-100%乙醇(用户提供)加到包含浓缩溶液WN的瓶子中,准备溶液WN的工作浓度。这将给出42毫升的最终体积。瓶子上的标签具有一个可以检查的盒子,以表明已添加了乙醇。这将给出最终的128毫升。将水浴或加热块预热至60°C。通过将90 ml的96-100%乙醇(用户提供)加入含有浓缩洗涤溶液a的瓶子来准备清洗溶液A的工作浓度。瓶子上的标签具有一个可以检查的盒子,以表明已添加了乙醇确保样品未经过一个以上的冷冻周期,因为这可能会导致DNA降解。此套件适合于从肝素,EDTA或柠檬酸盐收集的血液中制备的新鲜或冷冻血清或血浆分离DNA。如果任何解决方案都不经过指定离心时间内的自旋柱,请再旋转1-2分钟,直到溶液完全通过列。不超过离心速度,因为这可能会影响DNA产量。冷冻血浆(从肝素,EDTA或柠檬酸酯管上收集的血液)或血清样品应在处理前在400 x g(〜2,000 rpm)下离心2分钟。仅处理清晰的上清液,因为直接处理冷冻样品,可能会遇到列堵塞。
1。在微输出式的5,000 x g处离心1分钟,以颗粒样品。将上清液(〜180 µL)转移到新的微输出管中。保存上清液和颗粒。2。将100 µL PBS(用户提供)添加到样品颗粒和移液器混合物中,直到明显重悬于颗粒为止。3。在5,000 x g处离心1分钟以颗粒样品。将上清液与前一步的原始样品上清液(总计约280 µL)结合在一起。4。将1 ml PBS(用户提供)在新的颗粒中添加,然后混合直至显然重悬于颗粒。5。在微输出式的5,000 x g处离心1分钟,以颗粒样品并丢弃上清液。6。将100 µL TE缓冲液和25 µL溶菌酶4(100 mg/ml;提供的用户)加入颗粒。7。移液管混合物直到明显重悬于沉淀物,然后在55°C下孵育30分钟。8。将保存的上清液(〜280 µL)与125 µL消化样品结合在一起。9。加入20 µL 10%SD(提供的用户)和10 µL蛋白酶K。简短的移液器混合并在55°C下孵育10分钟。10。在微输出式中离心1分钟,以颗粒残留碎片。转移
isaamlic。以氯仿和等质醇混合物的含量和苯酚体积的一半和一半的量子和一半。.ex:对于5个样品,等分试样2 ml苯酚(1,250 +备用)和等分试样5 ml Isoamlic混合物 +氯仿(200μLISO +4800μL氯仿)。7。等分试样500μL(有时是样品数量)异丙醇酒精。8。移液器250μl苯酚,然后250μl氯仿 +同含同生醇。通过反转摇动。9。摇动30分钟(75速),然后以最高速度离心5分钟。10。小心地卸下上清液(〜400μl),请勿卸下所有内容,以免删除界面。11。与上一步一样,加入400μl氯仿混合物 +同醇酒精,然后通过反转和离心摇动。12。编程4°C的离心机13。卸下上清液,加入500μl异丙醇,通过反转均匀,以13000 g至15分钟的离心液均匀。14。为离心机编程室温。15。删除上清液,请注意不要去除颗粒,加入1毫升的70%乙醇,通过观察颗粒和离心剂在室温下5分钟到13000 g,一两次均质。16。除霜超纯水。17。除去所有酒精,然后将其干燥约15分钟,然后将沉淀物重新降低150μl的超纯水。在冰箱中过夜,第二天将其保持-20°C
• 将上清液倒入含有 300 µl 异丙醇 >99% 的干净 1.5 ml 微管中 • 轻轻颠倒 50 次以混合样品 • 以 15,000 g 离心 1 分钟(DNA 应可见为小白色沉淀) • 弃去上清液并将管短暂排干在干净的吸水纸上。添加 500 µl 洗涤缓冲液并颠倒管数次以洗涤 DNA 沉淀 • 以 15,000 g 离心 1 分钟。小心弃去乙醇。 • 在室温下风干 10-15 分钟
50-200μL缓冲液或直接到膜中心的蒸馏水。 在室温下孵育2-5分钟,然后在12,000 rpm(〜13,400×g)下离心2分钟。 注意:如果洗脱缓冲液的体积小于50μL,则可能会影响恢复效率。 洗脱缓冲液的pH值将在洗脱中产生一定影响。 我们建议选择缓冲液或蒸馏水(pH 7.0-8.5)以洗脱gDNA。 对于长期存储DNA,建议在缓冲液中洗脱并在-30〜 -15°C下存储,因为存储在水中的DNA会接受酸水解。 为了提高gDNA产量,可以将洗脱液重新加载至CB3,在室温2分钟下孵育,然后以12,000 rpm(〜13,400×g)的速度离心2分钟,以获得最终的洗脱。50-200μL缓冲液或直接到膜中心的蒸馏水。在室温下孵育2-5分钟,然后在12,000 rpm(〜13,400×g)下离心2分钟。注意:如果洗脱缓冲液的体积小于50μL,则可能会影响恢复效率。洗脱缓冲液的pH值将在洗脱中产生一定影响。我们建议选择缓冲液或蒸馏水(pH 7.0-8.5)以洗脱gDNA。对于长期存储DNA,建议在缓冲液中洗脱并在-30〜 -15°C下存储,因为存储在水中的DNA会接受酸水解。为了提高gDNA产量,可以将洗脱液重新加载至CB3,在室温2分钟下孵育,然后以12,000 rpm(〜13,400×g)的速度离心2分钟,以获得最终的洗脱。
(p h e n o l,c h i o rofo r m,i so m y i a a a a a a cohol)在已经孵育的混合物中,然后摇动5分钟,然后以3,000 rpm的速度离心10分钟。将上清液层被取出并放入新的管中,并添加了PCL溶液与上清液相同。获得上清液后,从PCL溶液中分离的结果,然后加入接下来的700 mL Cl溶液(氯形,lsoamylalkohol),然后搅拌5分钟,然后以10分钟之间3,000 rpm的速度离心。在此阶段获得的上清液中增加了100毫升3M乙酸钠和1,000 mL的葡萄酒啤酒(99.5%);并储存-10'C 30分钟。DNA通过以5,000 rpm的速度离心10分钟,然后将上述项目放电并在RR中干燥DNA,从而沉积了DNA。在干燥后加入50-100 ml“ iris'hdta(TE)自助过程,并将其存储在4oC中,然后在下一阶段使用。
系统是一种逆流离心系统,与手动离心相比,具有提高的分离效率。通过将离心力与流体的反流相结合,旋转系统可以根据其密度和尺寸来精确地分离细胞悬浮液中的不同组件。这项技术提供了增加的吞吐量,减少的处理时间以及改善的可重复性。Rotea系统的多功能性以其处理大量起始材料和更高的处理流速的能力突出显示,使其适合工业规模的生产。它与多种细胞类型和应用兼容,使其成为生物制药公司,研究机构和临床实验室的宝贵工具。