引言嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法为治疗诸如血红蛋白病,免疫缺陷和各种形式的癌症等疾病提供了巨大的潜力。在这些疗法中,病毒载体是创建最终CAR-T产品的关键组成部分。病毒载体促进了感兴趣的基因的传递,这有助于T细胞识别癌细胞。慢病毒通常被选择为病毒载体,因为它在转导分裂和非分裂细胞及其既定的安全概况方面的有效性(Sinn等,2005)。使用LV进行了200多次正在进行的临床试验,用于体内细胞修饰或体内疗法,以及最近对几种EX Vivo LV疗法的FDA批准,正在发生病毒载体需求的主要激增(ClinicalTrialStrials.gov)。低慢病毒滴度生产从当前的细胞培养物中获得的生产需要大量生产量来满足需求,这意味着大规模的培养基制剂和产品存储以及长期而复杂的生物反应器种子火车和病毒制造过程。LV的不稳定性质也带来了挑战,在室温下半衰期为8-40小时,在37°C下为8 - 12小时,这可以进一步降低有效的滴度(Dautzenberg等,2021,Labisch等,2021,2021,以及Higashikawa和Chang and Chang,2001年)。解决这些大规模制造缺点的一种方法是加强LV生产过程。此外,TFDF灌注可以在72小时的时间内将LV连续收获到4°C的储存容器,以维持LV功能滴度(Labisch等,2021)。最近的出版物表明,使用切向流动深度过滤(TFDF)灌注技术用于LV制造可以提高工艺生产率并降低成本(Tran等,2022; Tona等,2023)。TFDF疗法的这种连续的轻柔收获特征LV灭活问题,该问题会对批处理模式下的LV产生产生负面影响。TFDF技术提供2 - 5 µm的孔径深度滤波器,以切向流量模式运行,以保留生物反应器中的细胞和细胞碎屑,同时可以连续收获废物代谢物和分泌的载体。
•Purecol®(CAT#5005)•干细胞•具有血清和抗生素的细胞培养基•细胞培养瓶•胰蛋白酶-EDTA(Fisher Scientific,Cat#25-200-114)•地塞米松(Dex)(Dex)(Sigma-Aldrich,CAT#D2915-100MG,CAT) -Aldrich,CAT#i5879-5g)•印霉素(IM)(Sigma -Aldrich,CAT#i7378-25g)•4%多羟基甲醛(Thermofisher,CAT#047392-9M) 0.22 µm过滤器•DI水•血细胞•细胞培养板•血清学移液器•Eppendorf Tubes
人类IPS细胞(1231A3)在Imatrix-511上保持了(CAT。编号np891-011) - 涂层板和在STEMFIT®培养基中生长(Cat。编号akn02)。细胞,并使用Tryple Select(Thermofisher)(热泡)将其分解为单个细胞,并进行洗涤和计数。然后将单细胞在补充10 µM Y27632的StemFit培养基中以10 5个细胞/ml的播种(Cat。编号04-0012),并以55 rpm的恒定旋转器搅动转移到能够的30 mL一次性生物反应器中。在第2天和第4天收获细胞,并被Tryple Select分散的球体分散,并用锥虫蓝色染色并计数。细胞,并被Tryple Select分散的球体分散,并用锥虫蓝色染色并计数。
流感 A(H3N2) 谱系细胞培养衍生的候选疫苗病毒 1 或重组疫苗抗原,用于开发和生产用于 2024-2025 年北半球流感季节的疫苗。世卫组织全球流感监测和应对系统 (GISRS) 的世卫组织合作中心 (CC) 已使用认证细胞系(如 MDCK 33016 PF a、NIID-MDCK b)分离人流感病毒。世卫组织 CC 还对细胞培养的候选疫苗病毒 (ccCVV) 进行抗原和基因分析。除非另有说明,这些 ccCVV 已通过针对符合世卫组织建议 2 的细胞培养繁殖原型病毒的双向血凝抑制 (HI) 或病毒中和 (VN) 测试。世卫组织 CC 尚未对这些 ccCVV 进行任何其他测试(包括外来因子)。国家或地区监管部门通常会批准每个国家使用的流感疫苗的生产、成分和配方 3 。制造商应咨询相关国家或地区监管部门,了解使用这些 ccCVV 进行流感疫苗生产的适用性。
•顺序较不健壮的克隆可能需要依次适应新的媒体。从25%的25%:75%的培养基中进行亚培养细胞,其中有没有long®R3 IGF-I。当细胞的可行性超过90%,并且细胞加倍时间稳定时,可以将细胞转变为下一个介质混合物(即50%:50%)。如果生长速度减慢或生存力降低,则应继续在同一介质中传递细胞,直到生存能力和加倍时间稳定为止。
机构联系详细信息的候选疫苗病毒订单和其他信息:CBER:cbershippingrequests@fda.hhs.gov ccdc:dayanwang@cnic.org.org.org.org.cn cdc:nmb7@cdc.gov(主题:cvv request:cvv request) richard.webby@stjude.org hku:malik@hkucc.hku.hk谁ccs:https://www.who.int/initiatives/global-influenza-influenza-surveillance-and-response-系统/who-collaboration-center-erl?cxitpeottwx0xud5tjdjdjdjdjdjdodsxcicnyjqzyd7fzeivpn7xci =候选疫苗病毒病毒病毒和效力测试试剂(H5N1)在谁的WHO网站上可以在WHO WHO网站上找到http://www.who.int/influenza/vaccines/virus/candidates_reagents/a_h5n1/en//其他类型和亚型候选疫苗病毒和效力测试试验的信息计划/疫苗/WHO征服/人畜共患病毒 - 病毒和候选疫苗病毒,请联系GISRS-WHOHQ@who.int
由Nucleus Biologics开发和制造的 VITRONECTIN XF™是一种定义的,无XENO的细胞培养基质,支持HPSC的生长和分化。 Use with mTeSR ™ 1 ( Catalog #85850 ), mTeSR ™ Plus ( Catalog #100-0276 ), TeSR ™ -E8 ™ ( Catalog #05990 ), or TeSR ™ -AOF ( Catalog #100-0401 ) medium to provide a defined culture system for the maintenance of ES and iPS cells and greater control over the culture environment, resulting in more consistent在下游应用中,细胞群体和可重复的结果。 人类ES和IPS细胞在玻璃连蛋白XF™上培养的细胞保留多能性和正常菌落形态,而无需适应步骤(图1)。 与温和的细胞解离试剂(GCDR;目录#07174)或RELESR™(目录#05872)搭配以维持高质量的培养物。VITRONECTIN XF™是一种定义的,无XENO的细胞培养基质,支持HPSC的生长和分化。Use with mTeSR ™ 1 ( Catalog #85850 ), mTeSR ™ Plus ( Catalog #100-0276 ), TeSR ™ -E8 ™ ( Catalog #05990 ), or TeSR ™ -AOF ( Catalog #100-0401 ) medium to provide a defined culture system for the maintenance of ES and iPS cells and greater control over the culture environment, resulting in more consistent在下游应用中,细胞群体和可重复的结果。人类ES和IPS细胞在玻璃连蛋白XF™上培养的细胞保留多能性和正常菌落形态,而无需适应步骤(图1)。与温和的细胞解离试剂(GCDR;目录#07174)或RELESR™(目录#05872)搭配以维持高质量的培养物。
背景:在皮肤复兴中使用生长因子是一种新型的抗衰老治疗方法。虽然生长因子在伤口愈合中的作用已经很好地确定,但它们在皮肤复兴中的使用直到最近才研究,并且没有进行对照试验。目的:我们评估了亚洲皮肤中与人植物干细胞(HESC-EPC)区分的内皮前体细胞分泌因子的抗衰老作用。方法:这项随机,受控的分裂研究中总共包括25名妇女。每个参与者脸的左右两侧被随机分配给hESC-EPC条件培养基(CM)或盐水。为了增强表皮穿透,使用了0.25毫米的微针辊。以2周的间隔重复五个治疗课程。结果:在治疗后,植物学对色素沉着和皱纹的全球评估表明,与单独的微对比相比,微针和hESC-EPC CM的统计学意义上的统计学意义(p<0.05)。通过Mexameter和Visiometer进行的皮肤测量也揭示了微孔系以及HESC-EPC CM对色素沉着和皱纹的统计学意义(P <0.05)。唯一最小的不良事件是